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马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种及其研究进展

微生物学报 2022年第2期62卷 414-420页

作者：王艳萍严婷王亚琦王远望王萌天津科技大学食品科学与工程学院天津300457

马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)是一类革兰氏阳性乳杆菌,其来源广泛,功能多样,安全性好。2020年12月国家卫健委批准马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种作为我国新食品原料。本文主要综述国内外马乳酒样乳杆菌和马乳酒样乳杆菌... 详细信息

马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)是一类革兰氏阳性乳杆菌,其来源广泛,功能多样,安全性好。2020年12月国家卫健委批准马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种作为我国新食品原料。本文主要综述国内外马乳酒样乳杆菌和马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种的菌种形态学和基因组特性、益生功能、主要价值和发展前景等方面的研究进展,旨在为马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种的研究和产业应用提供参考。

关键词：马乳酒样乳杆菌马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种形态学基因组特性益生功能

马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)合成开菲尔多糖培养基组成的优化

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工业微生物 2007年第4期37卷 36-40页

作者：王淼毕洁江南大学食品科学技术国家重点实验室江苏无锡214122 江南大学食品学院江苏无锡214122

研究了发酵培养基组成对Lactobacillus kefiranofaciens的菌体生长以及合成开菲尔多糖(Kefiran)的影响。通过比较L. kefiranofaciens利用各种糖类和麦芽汁的发酵情况,发现麦芽汁最利于菌体生长及发酵产糖;各种氮源对L. kefiranofaciens... 详细信息

研究了发酵培养基组成对Lactobacillus kefiranofaciens的菌体生长以及合成开菲尔多糖(Kefiran)的影响。通过比较L. kefiranofaciens利用各种糖类和麦芽汁的发酵情况,发现麦芽汁最利于菌体生长及发酵产糖;各种氮源对L. kefiranofaciens发酵影响不同,其中以酵母粉最好,采用一品鲜酵母粉发酵的最佳浓度为10%;正交实验和RSA方法确定对发酵影响显著的三个无机盐是MnSO4.4H2O、MgSO4.7H2O和KH2PO4,最佳用量为0.2g/L,1g/L,4g/L,此时发酵获得开菲尔多糖产量为2.6±0.05g/L。L. kefiranofaciens发酵生产开菲尔多糖96h时可达到最佳发酵结果。

关键词：马乳酒样乳杆菌开菲尔多糖培养基优化

马乳酒样乳杆菌(XL10)的分离、鉴定及对小鼠肠道菌群的影响

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食品研究与开发 2019年第10期40卷 182-187页

作者：贾庆喜邢竹青孙也王艳萍天津科技大学食品工程与生物技术学院天津300457 天津中医药大学健康科学与工程学院天津300193

以西藏开菲尔粒为原料,从中筛选出一株马乳酒样乳杆菌XL10,对其进行鉴定及生长特性研究;并以小鼠为研究对象,观察XL10对小鼠肠道菌群的影响。结果表明XL10菌株能够促进小鼠肠道有益菌生长,抑制有害菌繁殖。结果表明XL10菌株具有能够调... 详细信息

以西藏开菲尔粒为原料,从中筛选出一株马乳酒样乳杆菌XL10,对其进行鉴定及生长特性研究;并以小鼠为研究对象,观察XL10对小鼠肠道菌群的影响。结果表明XL10菌株能够促进小鼠肠道有益菌生长,抑制有害菌繁殖。结果表明XL10菌株具有能够调节肠道菌群平衡,保护肠道健康的潜能。

关键词：马乳酒样乳杆菌分离鉴定菌群平衡开菲尔生长特性

马乳酒样乳杆菌ZW3高密度培养及抗过敏功能的初步研究

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马乳酒样乳杆菌ZW3高密度培养及抗过敏功能的初步研究

作者：段晓微天津科技大学

学位级别：硕士

马乳酒样乳杆菌ZW3具有良好的生物学特性和益生功能,本研究中对马乳酒样乳杆菌ZW3进行高密度培养制备直投式发酵剂并用于抗过敏免疫机制的初步探究,并且基于RAST数据库和VFDB数据库分析马乳酒样乳杆菌ZW3安全性相关基因。本研究首先对... 详细信息

马乳酒样乳杆菌ZW3具有良好的生物学特性和益生功能,本研究中对马乳酒样乳杆菌ZW3进行高密度培养制备直投式发酵剂并用于抗过敏免疫机制的初步探究,并且基于RAST数据库和VFDB数据库分析马乳酒样乳杆菌ZW3安全性相关基因。本研究首先对马乳酒样乳杆菌ZW3进行了增殖培养基及培养条件的优化,最终确定最佳培养基组分为:葡萄糖4%（m/v）,蛋白胨2%（m/v）,酵母浸膏0.5%（m/v）,MgSO4·7H2O 0.02%（m/v）,MnSO4·4H2O 0.02%（m/v）,K2HPO4 0.2%（m/v）,柠檬酸三胺0.2%（m/v）,吐温-80 0.1%（v/v）,无水乙酸钠0.5%（m/v）。并且在7L半自动发酵罐中对影响高密度发酵工艺的因素进行优化,得到最佳高密度发酵工艺为:中和剂为20%的氢氧化钠,发酵恒定pH值为4.9,搅拌转速为100r/min,温度为30℃。在此条件下,马乳酒样乳杆菌ZW3经过高密度发酵48h后,发酵液的活菌数可达到1.13 X 108cfu/mL,所制备的菌粉活菌数可达到2.2X 109cfu/g。应用上述马乳酒样乳杆菌ZW3直投式发酵剂在OVA诱导的食物过敏小鼠模型中进行抗过敏免疫机制的初步探究,观察过敏评分、体质量、胸腺指数和脾脏指数,ELISA检测血清 OVA-sIgE 水平,RT-qPCR 检测脾中 IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的mRNA水平,细菌培养法检测粪便菌群的改变,结果表明马乳酒样乳杆菌ZW3使过敏模型小鼠体质量、胸腺指数恢复到正常水平;过敏评分、血清OVA-sIgE、肠道大肠杆菌、IL-4、IL-5、IL-10的表达降低;IFN-γ、IL-2的表达和肠道乳酸杆菌增加,表明马乳酒样乳杆菌ZW3通过调节Th1/Th2的平衡,可以有效改善腹腔注射OVA的食物过敏小鼠的过敏症状。最后对马乳酒样乳杆菌ZW3安全性相关基因进行了分析,通过RAST数据库筛选和比对,得到马乳酒样乳杆菌ZW3中存在1类粘附相关基因、1类胆汁水解相关基因、3类离子转运相关基因、5类抗生素耐药性相关基因;通过VFDB数据库的筛选,得到马乳酒样乳杆菌ZW3中2个cpsB、cpsF基因、3个clpC、clpE、clpP基因。综合RAST、VFDB数据库分析结果认为马乳酒样乳杆菌ZW3基于基因水平分析并不存在毒力基因。

关键词：马乳酒样乳杆菌增殖培养基高密度发酵抗过敏安全性评估

马乳酒样乳杆菌ZW3的抗生素抗性及在发酵酸奶中的应用

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马乳酒样乳杆菌ZW3的抗生素抗性及在发酵酸奶中的应用

作者：王萌天津科技大学

学位级别：硕士

马乳酒样乳杆菌ZW3分离自西藏开菲尔粒,是一株革兰氏阳性菌株,具有良好的益生功能。本文从遗传学角度分析马乳酒样乳杆菌ZW3的抗生素抗性并且研究其在发酵酸奶中的应用。主要的研究内容和结果如下:(1)通过生物信息学手段对马乳酒样乳杆... 详细信息

马乳酒样乳杆菌ZW3分离自西藏开菲尔粒,是一株革兰氏阳性菌株,具有良好的益生功能。本文从遗传学角度分析马乳酒样乳杆菌ZW3的抗生素抗性并且研究其在发酵酸奶中的应用。主要的研究内容和结果如下:(1)通过生物信息学手段对马乳酒样乳杆菌ZW3进行抗生素抗性基因的预测,RAST数据库注释结果显示ZW3一共有5类抗性同源基因。因此ZW3可能具有四环素(Tetracycline)、链霉素(Streptomycin)、氟喹诺酮类(Fluoroquinolones)、β-内酰胺类(β-lactams)、外排泵类(Efflux pumps)等抗生素抗性;CARD综合抗生素抗性数据库两种模式注释结果显示:Blast模式下结果显示不存在抗性基因;RGI模式结果显示,核酸和蛋白质的预测结果相同。马乳酒样乳杆菌ZW3可能含有lsaA、parE、arlR、PBP1a、rpoB、gyrB、lmrD、mepA、parC和lmrC等抗性基因,但是相似率很低,最高相似率60%。因此,认为ZW3菌株中不具有相应的抗性基因;Island Viewer在线注释平台结果显示,在马乳酒样乳杆菌ZW3基因组中未发现毒力因子以及毒力因子同源物、抗性基因和病原相关基因。发现了13种抗生素抗性基因的同源基因,但是都没有位于基因岛上,因此没有转移的危险。(2)通过抗生素药敏性试验,采用微量肉汤稀释法检测马乳酒样乳杆菌ZW3对7种常见抗菌药物的最低抑菌浓度值。检测结果显示马乳酒样乳杆菌ZW3对红霉素(Erythromycin)、氨苄青霉素(Ampicillin)、链霉素、四环素等具有敏感性,而对卡那霉素(Kanamycin)具有抗性,并且对莫西沙星(Moxifloxacin)、诺氟沙星(Norfloxacin)等氟喹诺酮类抗生素具有抗性。并且研究发现,一般认为乳酸菌对于氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素具有内在抗性。(3)通过PCR扩增技术检测马乳酒样乳杆菌ZW3是否含有相关的抗性基因,结果显示在马乳酒样乳杆菌ZW3中未检测到四环素(tet M)、β-内酰胺类抗生素(bla)、红霉素(erm B)、氟喹诺酮类(gyr A和par C)、氨基糖苷类(aad E)、外排泵类(nor E)等抗性基因。该结果与MIC实验结果并没有一一对应,可能是由于ZW3对卡那霉素、莫西沙星、诺氟沙星等抗生素的抗性不是由gyr A、par C和aad E基因调控。(4)通过ZW3在发酵酸奶中的应用研究发现,与传统发酵剂发酵酸奶相比,添加ZW3的发酵酸奶可以缩短发酵时间、提高持水力,减少乳清析出,增加酸奶结合自由水的能力、增加黏度,改善凝固酸奶的流变特性;在质构方面,添加ZW3可以增加酸奶硬度、胶着性、咀嚼性、内聚性和恢复性;添加ZW3的酸奶三维网状结构连接紧密且酪蛋白簇变粗变大,整体空隙减少;通过GC-MS技术和电子鼻分析酸奶的挥发性风味物质和香气成分,得出ZW3了丰富发酵酸奶的挥发性风味物质的种类,促进传统发酵酸奶中酸类、醛类、呋喃类和酚类风味物质的增强。

关键词：马乳酒样乳杆菌耐药性发酵酸奶最低抑菌浓度

1株马乳酒样乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

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中国畜牧兽医 2023年第7期50卷 2974-2986页

作者：周闯宋俊雅叶菁荀佳琦高海萍柳雅欣萨吉代姆·麦麦提林家琪张华江苏农林职业技术学院句容212400 克孜勒苏职业技术学院阿图什845350

【目的】从新疆克州地区传统发酵马奶酒中分离既有抗菌活性又有抗氧化活性的乳酸菌,继而获得能用于微生态制剂开发的优良菌株。【方法】采用MRS固体培养基进行乳酸菌分离培养,筛选优势菌株,观察菌体形态学特征,并通过16S rRNA基因序列... 详细信息

【目的】从新疆克州地区传统发酵马奶酒中分离既有抗菌活性又有抗氧化活性的乳酸菌,继而获得能用于微生态制剂开发的优良菌株。【方法】采用MRS固体培养基进行乳酸菌分离培养,筛选优势菌株,观察菌体形态学特征,并通过16S rRNA基因序列分析进行分子鉴定。研究菌株的生长曲线、产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力和抑菌能力,通过检测菌株耐H_(2)O_(2)能力及菌株发酵液、无细胞提取物、菌体混悬液的DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除能力、羟自由基清除能力等相关指标来评价菌株体外抗氧化功能,并通过药敏试验和小鼠饲喂试验评估菌株的安全性。【结果】试验筛选出1株菌落形态圆形、白色半透明、边缘不整齐的革兰氏阳性菌,将其命名为JK-24,经16S rRNA克隆测序鉴定该菌株为马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)。在6~18 h,D_(600 nm)值增长速度较快,进入对数生长期,JK-24发酵液pH下降明显;JK-24在pH 2.5~6.5范围内均能生长,能耐受0.3%胆盐;发酵液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为15和20 mm,具有良好抑菌活性;能耐受浓度为3.0 mmol/L的H_(2)O_(2),且在H_(2)O_(2)浓度为1.0和2.0 mmol/L时对菌株生长有促进作用;JK-24发酵液和无细胞提取物的DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除能力和羟自由基清除能力均显著高于MRS培养基(P0.05),血液学参数均处于正常范围内,体内脏器无眼观病理变化。【结论】本试验分离到的马乳酒样乳杆菌JK-24安全、无致病性,具有良好的抑菌和抗氧化等益生特性,可作为生物饲料添加剂的菌种来源。

关键词：马乳酒样乳杆菌鉴定益生特性安全性

锡林郭勒马乳中乳酸菌分离鉴定及马乳酒样乳杆菌比较基因组学研究

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锡林郭勒马乳中乳酸菌分离鉴定及马乳酒样乳杆菌比较基因组学研究

作者：刘琛内蒙古农业大学

学位级别：硕士

Lactobacillus kefiranofaciens广泛存在于发酵乳制品中,且具有重要的应用价值。2020年该菌种已被我国新增为可在食品中添加的新资源,但该菌种在基因组学方面的研究匮乏,因此,解析其基因组特征和进化历程对菌株的开发利用具有重要意义... 详细信息

Lactobacillus kefiranofaciens广泛存在于发酵乳制品中,且具有重要的应用价值。2020年该菌种已被我国新增为可在食品中添加的新资源,但该菌种在基因组学方面的研究匮乏,因此,解析其基因组特征和进化历程对菌株的开发利用具有重要意义。本研究采用Illumina Novaseq高通量测序平台完成了分离自酸马奶和酸牛奶的73株Lactobacillus kefiranofaciens全基因的测序,并结合NCBI数据库中仅有的9株菌的全基因序列,进行比较基因组学分析,解析该菌种的基因组特征,分析不同分离源菌株之间的差异,为Lactobacillus kefiranofaciens优良菌株的筛选提供数据支持。主要研究结果如下:(1)18份鲜马奶和酸马奶共分离得到284株乳酸菌,酸马奶中Lactobacillus helveticus和Lactobacillus kefiranofaciens是优势菌种,分别占比为64.8%和21.9%。而鲜马奶中Lactobacillus helveticus、Lactococcus lactis和Leuconostoc mesenteroides相对含量较高,分别占比29.8%、22.8%和31.6%,表明鲜马奶和酸马奶在菌群组成上存在一定的差异。(2)获得73株Lactobacillus kefiranofaciens全基因组序列,基于看家基因(rpo A和phe S)及ANI值进行分类学地位的判定,结合核心基因构建的系统发育树确定所有菌株的分类学地位及进化关系。ANI值显示该菌种同源性较高,基于16S r RNA基因序列和看家基因序列分析的灵敏度和分辨率较低,基于核心基因分析后分辨率提高,但大部分菌株未能确定亚种的归属,推测该菌株之前的亚种分类学地位可能存在问题。(3)Lactobacillus kefiranofaciens是一个开放的基因组,共有核心基因1045个,泛基因7189个,该菌种的多样性较高。基因组大小平均为2.05±0.10 Mb,GC含量平均为37.49±0.16%,预测基因数量平均为2153±105个,功能基因预测显示碳水化合物代谢、生命活动及信息储存等相关基因占比较大。(4)Lactobacillus kefiranofaciens遗传进化具有分离源相关性。开菲尔分离株与酸牛奶及酸马奶分离株存在显著差异,而酸马奶和酸牛奶分离株差异则不明显。主要差异体现在预测基因数量、核心基因及特异基因功能注释、碳水化合物活性酶利用和细菌素预测等方面。菌种基因组功能预测显示,开菲尔分离株在氨基酸代谢、防御机制和细胞复制、重组、修复等方面基因数量显著高于其他分离源;不同分离源菌株核心基因功能分布占比存在差异,特异基因差异体现在氨基酸代谢、各类单糖特异性运输及CRISPR-Cas防御机制等方面;碳水化合物活性酶GH42、GH31、GH36和AA4等数量差异显著,同时开菲尔分离株显示出更好的利用植物性基质发酵的能力;开菲尔分离株包含的细菌素种类少于酸牛奶及酸马奶分离株,Helveticin J和Lanthipeptide class I在开菲尔分离株中未预测到。

关键词：酸马奶马乳酒样乳杆菌纯培养全基因组测序比较基因组学

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马乳酒样乳杆菌的安全性评估

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