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利用ISSR-PCR技术分析香蕉枯萎病菌的遗传多样性

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微生物学报 2015年第6期55卷 691-699页

作者：张贺张欣蒲金基漆艳香陆英喻群芳张辉强谢艺贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室海南海口571101

【目的】应用简单序列重复区间(inter-simple sequence repeats,ISSR)分子标记技术对全国主要香蕉产区95个香蕉枯萎病菌菌株进行ISSR分析,了解其遗传多样性,为香蕉品种的合理布局及枯萎病的防治提供理论依据。【方法】选用8条引物,对香... 详细信息

【目的】应用简单序列重复区间(inter-simple sequence repeats,ISSR)分子标记技术对全国主要香蕉产区95个香蕉枯萎病菌菌株进行ISSR分析,了解其遗传多样性,为香蕉品种的合理布局及枯萎病的防治提供理论依据。【方法】选用8条引物,对香蕉枯萎病菌进行ISSR-PCR分析,采用NTSYSpc v2.10e软件分析其遗传结构。【结果】从33条随机引物中筛选出8条重复性好、特异性高的引物,共产生52个ISSR分子标记,其中92.3%的片段具有多态性。菌株间的Nei遗传距离(D)为0.57-1.00,供试菌株以遗传距离为0.68阀值可以分为A、B、C、D、E、和F共6个类群,所占的比例分别为51.06%、5.20%、2.08%、39.58%、1.04%、1.04%。【结论】病原菌菌株间的遗传变异很大,差别很明显,ISSR聚类组群的划分与病原菌的寄主和小种有很明显的相关性。

关键词：香蕉枯萎病菌遗传多样性 ISSR分析

香蕉枯萎病菌4号生理小种致病性突变体△Focr4-1422生物学特性研究

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热带作物学报 2012年第10期33卷 1789-1793页

作者：陈海洋曾涛陈汉清郭刚曾会才海南大学环境与植物保护学院海南海口570228 中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101 中国热带农业科学院海口实验站/香蕉研究所海南海口570102

为研究香蕉枯萎病菌4号生理小种致病性突变体相关致病基因的功能,研究了基因敲除子△Focr4-1422与野生型菌株193之间部分致病性相关的表型差异。结果表明,基因敲除子对巴西蕉的致病性减弱,荧光检测显示菌丝能够从根部扩散到根茎交界处... 详细信息

为研究香蕉枯萎病菌4号生理小种致病性突变体相关致病基因的功能,研究了基因敲除子△Focr4-1422与野生型菌株193之间部分致病性相关的表型差异。结果表明,基因敲除子对巴西蕉的致病性减弱,荧光检测显示菌丝能够从根部扩散到根茎交界处的茎部。△Focr4-1422对细胞壁降解酶的抗性大大增强。基因敲除子△Focr4-1422和野生型193在相同的温度、pH值、光照条件和碳氮源培养基下的生长速率均没有达到极显著差异,两者的菌丝和孢子的致死温度也一致。

关键词：香蕉枯萎病菌致病性测定生物学特征

香蕉枯萎病菌2个生理小种PL基因真核表达载体的构建与表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第4期40卷 102-106页

作者：董章勇秦世雯王振中仲恺农业工程学院植物保护系广东广州510225 华南农业大学资源环境学院植物病理生理学研究室广东广州510642

【目的】构建香蕉枯萎病菌1号小种(FOC1)和4号小种(FOC4)果胶裂解酶(Pectate lyases,PL)基因的真核表达载体,并进行诱导表达,为进一步研究PL在病原菌致病过程中的作用奠定基础。【方法】将质粒pMD18-pl-foc1、pMD18-pl-foc4和真核表达... 详细信息

【目的】构建香蕉枯萎病菌1号小种(FOC1)和4号小种(FOC4)果胶裂解酶(Pectate lyases,PL)基因的真核表达载体,并进行诱导表达,为进一步研究PL在病原菌致病过程中的作用奠定基础。【方法】将质粒pMD18-pl-foc1、pMD18-pl-foc4和真核表达穿梭载体pPICZαA进行EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切反应,回收目的片段连接,转化至DH5α进行筛选扩繁,对菌落进行PCR鉴定后抽提质粒进行PCR和EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切鉴定。将阳性载体线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168感受态细胞,用甲醇进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。【结果】成功构建了FOC1和FOC4 PL基因的真核表达载体pPICZαA-pl-foc1和pPICZαA-pl-foc4,经甲醇诱导表达后分别获得了重组的PL蛋白,其分子质量约为23.4ku。【结论】FOC1和FOC4 2个香蕉枯萎病菌小种的PL基因在酵母中得到了成功表达。

关键词：香蕉枯萎病香蕉枯萎病菌果胶裂解酶载体构建真核表达

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香蕉枯萎病菌对不同香蕉品种防御酶系的影响

中国农学通报 2010年第17期26卷 251-255页

作者：李赤黎永坚于莉广东海洋大学广东湛江524088 珠海市农业科学研究中心广东珠海519075

研究不同香蕉品种在接种香蕉枯萎病菌后防御酶系的变化。结果表明,经病原菌接种后,抗病品种SOD酶活性明显低于感病品种,SOD酶活性的大小与香蕉品种的抗、感病之间呈负相关;PO酶和内切几丁质酶活性的大小和变化趋势与香蕉品种的抗、感病... 详细信息

研究不同香蕉品种在接种香蕉枯萎病菌后防御酶系的变化。结果表明,经病原菌接种后,抗病品种SOD酶活性明显低于感病品种,SOD酶活性的大小与香蕉品种的抗、感病之间呈负相关;PO酶和内切几丁质酶活性的大小和变化趋势与香蕉品种的抗、感病性之间不存在相关性;抗病品种和感病品种的PAL酶、β-1,3-葡聚糖酶活性大小无明显差异,但抗性品种的PAL酶和β-1,3-葡聚糖酶活性一直处于增长状态;抗病品种外切几丁质酶的活性明显高于感病品种,外切几丁质酶活性的大小与香蕉品种的抗、感病之间呈正相关。综合试验结果,PAL酶、β-1,3-葡聚糖酶和外切几丁质酶可以作为香蕉品种抗枯萎病一个重要的生物化学指标。

关键词：香蕉枯萎病菌防御酶系香蕉品种抗病性

香蕉枯萎病菌4个生理小种核糖体DNA内转录间隔区的RFLP分析

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华南农业大学学报 2017年第3期38卷 52-56页

作者：舒灿伟曾蕊杨媚周而勋华南农业大学农学院/广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广东广州510642

【目的】明确香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.***.cubense 4个生理小种的系统发育关系。【方法】利用PCR扩增该病菌4个生理小种的核糖体DNA内转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS),利用AIu I、Hpa II和Taq I 3种限制性内切酶... 详细信息

【目的】明确香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.***.cubense 4个生理小种的系统发育关系。【方法】利用PCR扩增该病菌4个生理小种的核糖体DNA内转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS),利用AIu I、Hpa II和Taq I 3种限制性内切酶对这些小种的ITS产物进行RFLP分析。【结果】PCR扩增结果表明:来自4个生理小种的8个菌株均可扩增得到568 bp的ITS单一片段,但这些生理小种间的片段没有明显的多态性;对这些生理小种ITS产物进行RFLP分析发现,不同生理小种之间的差异很小。【结论】PCR-RFLP技术不适用香蕉枯萎病菌生理小种的分析鉴定。

关键词：香蕉枯萎病菌生理小种内部转录间隔区聚合酶链式反应限制性片段长度多态性

香蕉枯萎病菌SNF1基因的克隆及生物信息学分析

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广东农业科学 2012年第21期39卷 160-164页

作者：刘一贤周端咏毛超汪军黄俊生海南大学环境与植物保护学院海南海口570100 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所/农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室海南儋州571737

为了解SNF1基因在香蕉枯萎病菌致病过程中的作用以及FOC1和FOC4两个生理小种之间的致病力差异关系,采用了PCR、RT-PCR的方法扩增了2个生理小种的SNF1基因,测序并采用生物信息学软件对相似序列进行搜索、比对,并对该基因编码的预测蛋白... 详细信息

为了解SNF1基因在香蕉枯萎病菌致病过程中的作用以及FOC1和FOC4两个生理小种之间的致病力差异关系,采用了PCR、RT-PCR的方法扩增了2个生理小种的SNF1基因,测序并采用生物信息学软件对相似序列进行搜索、比对,并对该基因编码的预测蛋白进行氨基酸序列比对和分析。研究结果显示,2个生理小种的SNF1基因的ORF分别为2 136、2 130 bp,二者相差6个碱基,同源性为99.5%。FOC1和FOC4的SNF1基因分别编码711、709个氨基酸,相差两个氨基酸,为丝氨酸(FOC1)和谷氨酰胺(FOC1)。生物信息学软件预测结果表明该蛋白N端不存在信号肽,但具有两个相同的功能结构域位点,分子量约为79 ku,pI为6.80。

关键词：香蕉枯萎病菌生理小种 SNF1基因细胞壁降解酶致病性

香蕉枯萎病菌果胶甲基酯酶基因的克隆与生物信息学分析

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生物技术通报 2012年第6期28卷 111-115页

作者：董章勇王振中仲恺农业工程学院广州510225 华南农业大学植物病理生理学研究室广州510642

旨在了解香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.***.cubense)4号生理小种(FOC4)PME基因序列特征,根据同源物种PME相关序列设计引物,利用PCR和RT-PCR技术,克隆FOC4序列基因和开放阅读框,命名为Foc4Pme。结果表明,所获得的PME基因均含有2个内... 详细信息

旨在了解香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.***.cubense)4号生理小种(FOC4)PME基因序列特征,根据同源物种PME相关序列设计引物,利用PCR和RT-PCR技术,克隆FOC4序列基因和开放阅读框,命名为Foc4Pme。结果表明,所获得的PME基因均含有2个内含子和3个外显子,990 bp的片段,编码329个氨基酸。预测编码蛋白有信号肽,具有1个功能位点,其分子质量和等电点分为34.894 8 kD和9.17,该蛋白为稳定存在的蛋白。该蛋白疏水性最大值为2.022,最小值为-2.156,大部分区域为亲水区。该基因编码的蛋白具有一定保守性,进化上与镰刀菌亲缘关系最近。

关键词：果胶甲基酯酶香蕉枯萎病香蕉枯萎病菌生物信息学分析

香蕉枯萎病菌4号生理小种产生毒素条件的优化

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华中农业大学学报 2011年第5期30卷 594-598页

作者：黄永辉李瑜婷范家平杨媚周而勋华南农业大学资源环境学院广州510642

由尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporumf.***.cubense)4号生理小种(Foc 4)引起的香蕉枯萎病是世界性香蕉毁灭性病害之一,毒素是其重要的致病因子。为了获得香蕉枯萎病菌毒素,采用活体香蕉苗生物测定法观察了不同培养基、培养方式、... 详细信息

由尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporumf.***.cubense)4号生理小种(Foc 4)引起的香蕉枯萎病是世界性香蕉毁灭性病害之一,毒素是其重要的致病因子。为了获得香蕉枯萎病菌毒素,采用活体香蕉苗生物测定法观察了不同培养基、培养方式、培养时间、培养温度、Richard培养基初始pH值、摇床转速、接种量和光照等条件对Foc 4产生毒素的影响。结果表明:Foc 4的最佳产生毒素条件为初始pH值7～9的Richard培养基,接种量为每300mL培养基5～9个菌丝块,培养温度25～30℃,24h持续光照,于转速140r/min摇床上振荡培养9～12d。

关键词：香蕉枯萎病菌毒素产毒条件生物活性

香蕉枯萎病菌全局性调控因子FocVeA基因的克隆及功能预测

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生物技术通报 2014年第10期30卷 101-106页

作者：漆艳香张欣陆英张贺蒲金基喻群芳谢艺贤中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带农林有害生物入侵监测与控制重点开放实验室海口571101

根据轮枝样镰刀菌(Fusa rium ve rticillioides)和藤仓镰刀菌(F.fujikuroi)veA同源基因相关序列设计引物,利用PCR与RT-PCR技术分别克隆了香蕉枯萎病菌2个生理小种的FocV eA基因序列和开放阅读框,同时对该基因的编码蛋白进行序列特征、... 详细信息

根据轮枝样镰刀菌(Fusa rium ve rticillioides)和藤仓镰刀菌(F.fujikuroi)veA同源基因相关序列设计引物,利用PCR与RT-PCR技术分别克隆了香蕉枯萎病菌2个生理小种的FocV eA基因序列和开放阅读框,同时对该基因的编码蛋白进行序列特征、系统发育与结构域分析。结果表明,2个生理小种的FocVeA基因(分别命名为F1VeA和F4VeA)的DNA片段全长分别为1 693 bp和1 690 bp,开放阅读框分别为1 599 bp和1 596 bp,分别编码532个和531个氨基酸。F1VeA和F4VeA基因预测氨基酸序列相似性均为9 9%,与G enBank中公布的Fusarium spp.veA基因氨基酸序列均有78%-99%相似性。系统聚类分析显示,F1V eA和F4VeA与GenBank中已登录的轮枝样镰刀菌(F.verticillioides)和藤仓镰刀菌(F.fujikuroi)等veA同源蛋白高度同源。蛋白质保守域搜索表明,FocVeA具有veA蛋白的功能域,属于veA蛋白家族的一员,推测该基因可能参与调控F.oxysporum f.***.cubense的生长、毒素合成及致病性等。

关键词：香蕉枯萎病菌 FocVeA基因克隆序列分析