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基于PI3K/Akt通路探讨首乌丸对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2022年第22期28卷 76-84页

作者：张超加秀凤黄万凌周勇汤琪陈刚湖北中医药大学基础医学院武汉430065 湖北中医药高等专科学校湖北荆州434020 武汉市中医医院武汉430017 湖北省中医院武汉430061

目的:探讨首乌丸通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:将SPF级SD雄性大50只随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸中剂量组及首乌丸高剂量组,除正常组外,其余4组均用D-半... 详细信息

目的:探讨首乌丸通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:将SPF级SD雄性大50只随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸中剂量组及首乌丸高剂量组,除正常组外,其余4组均用D-半乳糖(120 mg·kg^(-1))制造衰老模型,同时首乌丸中、高剂量组用首乌丸(1.08、2.16 g·kg^(-1))进行灌胃,维生素E组予以维生素E(0.018 g·kg^(-1))灌胃。造模6周后取全脑、海马组织,尼氏染色观察海马神经元形态学变化,原位末端标记法(TUNEL)检测海马细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),磷酸化(p)-PI3K,蛋白激酶B(Akt),p-Akt、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框蛋白O3a(FoxO3a)、p-FoxO3a、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马FoxO3a mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马神经元凋亡阳性细胞明显增多,凋亡指数显著升高(P首乌丸治疗后,凋亡阳性细胞明显减少,细胞凋亡指数显著降低(P首乌丸中、高剂量组的p-PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著降低,FoxO3a、p-FoxO3a蛋白表达、p-FoxO3a/FoxO3a显著升高(P首乌丸能够改善海马神经元组织结构,抑制PI3K/Akt信号通路,下调Caspase-3蛋白表达,激活FoxO3a,上调Bcl-2,下调Bax,上调Bcl-2/Bax,从而减少神经元细胞凋亡。

关键词：脑衰老首乌丸神经元凋亡磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路叉头框蛋白O3a(FoxO3a)

基于mTOR信号通路探讨首乌丸对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元突触可塑性的影响

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中国实验方剂学杂志 2023年第17期29卷 116-125页

作者：张超加秀凤黄万凌周勇汤琪陈刚湖北中医药大学基础医学院武汉430065 湖北中医药高等专科学校湖北荆州434020 湖北省中医院武汉430061

目的:探讨首乌丸基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元突触可塑性的影响。方法:将50只SPF级SD雄性大随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸低剂量组及首乌丸高剂量组,除正常组外,其余4组均用D-... 详细信息

目的:探讨首乌丸基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对D-半乳糖衰老大鼠海马神经元突触可塑性的影响。方法:将50只SPF级SD雄性大随机分为正常组、模型组、维生素E组、首乌丸低剂量组及首乌丸高剂量组,除正常组外,其余4组均用D-半乳糖(120 mg·kg^(-1))制造衰老模型,同时给予维生素E(0.018 g·kg^(-1)),首乌丸低、高剂量(1.08、2.16 g·kg^(-1))灌胃。造模6周后Morris水迷宫检测行为学变化,取全脑、海马组织,免疫组化检测海马突触后密度蛋白-95(PSD-95)、突触素(SYN)的表达,高尔基染色观察大鼠神经元形态及功能的变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中mTOR、磷酸化(p)-mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)、磷酸化(p)-p70S6K、真核翻译起始因子4E结合蛋白2(4EBP2)、磷酸化(p)-4EBP2蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马mTOR、p70S6K、4EBP2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠平均游泳速度减慢(P首乌丸低、高剂量组大鼠的平均游泳速度加快(P首乌丸低、高剂量组大鼠的树突棘数量、长度、密度均升高(P首乌丸能够改善D-半乳糖模型大鼠的学习记忆能力,增强突触可塑性相关蛋白表达,改善神经元形态,修复神经功能,减少神经元凋亡,抑制mTOR信号通路,延缓脑衰老。

关键词：脑衰老首乌丸哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路突触可塑性

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首乌丸抗衰老作用的实验研究

中成药 1991年第4期13卷 28-29页

作者：刘青云彭代银訾晓梅张敬礼安徽中医学院 230033 中国人民解放军105医院

首乌丸抑制黄嘌呤——黄嘌呤氧化酶——鲁米诺化学发光强度50％的浓度(IC_(50))为18.2μg/ml,该浓度对超氧阴离子自由基(Oi)的清除率为43.2％。本品(15g/kg)给大、小鼠灌饲,连续30d,可明显降低大鼠肝过氧化脂质含量和小鼠脑单胺氧化酶—... 详细信息

首乌丸抑制黄嘌呤——黄嘌呤氧化酶——鲁米诺化学发光强度50％的浓度(IC_(50))为18.2μg/ml,该浓度对超氧阴离子自由基(Oi)的清除率为43.2％。本品(15g/kg)给大、小鼠灌饲,连续30d,可明显降低大鼠肝过氧化脂质含量和小鼠脑单胺氧化酶——B活性以及脑脂褐质含量,提示首乌丸有抗衰老作用。

关键词：首乌丸抗衰老作用实验

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首乌丸质量标准的研究

药物分析杂志 2009年第2期29卷 285-287页

作者：肖瑞贞毛焕娣东莞市亚洲制药有限公司东莞523160

目的:建立首乌丸质量标准。方法:采用TLC法对地黄、牛膝进行鉴别;用HPLC法测定大黄素的含量,色谱柱为Kro-masil ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1),流速1.0 mL·min-1,检测波长437 nm。结果:TLC色谱斑点清... 详细信息

目的:建立首乌丸质量标准。方法:采用TLC法对地黄、牛膝进行鉴别;用HPLC法测定大黄素的含量,色谱柱为Kro-masil ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水-冰醋酸(80∶20∶1),流速1.0 mL·min-1,检测波长437 nm。结果:TLC色谱斑点清晰;大黄素在13.66～136.6μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.92%(RSD为0.84%)。结论:本法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。

关键词：首乌丸质量标准薄层色谱法高效液相色谱法

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首乌丸压制法工艺改进

中成药 2005年第11期27卷 1346-1348页

作者：李旭琴上海市嘉定区真新地段医院 201824

首乌丸由于疗效确切稳定，服用剂量相对较少，深受患者的欢迎，该产品在生产中存在的工艺质量问题较多。为此我们对首乌丸的老工艺进行改革研究，工艺改进后，产品质量有了明显提高。

关键词：首乌丸压制法流化床制粒增圆

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首乌丸对衰老大鼠肝肾组织的作用及机制研究

时珍国医国药 2022年第8期33卷 1872-1878页

作者：黄万凌张超陈刚湖北中医药大学基础医学院湖北武汉430065 湖北中医药高等专科学校湖北荆州434020

目的观察首乌丸对D-半乳糖致衰大鼠肝肾组织中SIRT1、p53、p21、FoxO4、DNMT1的影响,以探讨首乌丸延缓衰老的作用及可能机制。方法大鼠随机分为正常组、模型组、首乌丸组、维E组。模型组、首乌丸组、维E组用D-半乳糖造成衰老模型,造模... 详细信息

目的观察首乌丸对D-半乳糖致衰大鼠肝肾组织中SIRT1、p53、p21、FoxO4、DNMT1的影响,以探讨首乌丸延缓衰老的作用及可能机制。方法大鼠随机分为正常组、模型组、首乌丸组、维E组。模型组、首乌丸组、维E组用D-半乳糖造成衰老模型,造模同时首乌丸组以首乌丸混悬液灌胃,维E组以维生素E混悬液灌胃,正常组、模型组予等量生理盐水灌胃,连续6周。HE染色观察肝肾组织病理改变,三标免疫荧光染色观测大鼠肝肾组织p53、p21、SIRT1的表达,WB检测大鼠肝肾组织FoxO4的蛋白表达量,qPCR检测大鼠肝肾组织DNMT1 mRNA的表达。结果首乌丸可明显改善衰老大鼠肝细胞的脂肪变性以及肾脏结缔组织增生、肾小管扩张等病理改变。同时提高衰老大鼠肝肾组织中SIRT1阳性率,降低p53阳性率及p21阳性率,降低FoxO4蛋白表达量,促进DNMT1mRNA的表达。结论首乌丸可能通过上调肝肾组织中SIRT1的水平,抑制p53、p21及FoxO4的表达,促进衰老细胞凋亡,增强细胞的活性,同时上调DNMT1表达以增强肝肾组织的DNA甲基化水平,从而延缓衰老。

关键词：首乌丸衰老 SIRT1/p53/p21通路 FoxO4 DNMT1

首乌丸对卵巢早衰模型大鼠SIRT1/PGC-1α/Cytochrome C通路的影响

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中国中医基础医学杂志 2023年第3期29卷 413-419页

作者：加秀凤张超罗丹汤琪陈刚湖北中医药大学基础医学院武汉430065 武汉市中西医结合医院武汉430022 湖北中医药大学湖北省中医院武汉430061

目的探讨首乌丸是否通过调控线粒体介导的细胞凋亡通路抑制卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)进展。方法60只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、首乌丸4周组、首乌丸6周组、首乌丸预防组、补佳乐组。腹腔注射去氧乙烯基环己烯(d... 详细信息

目的探讨首乌丸是否通过调控线粒体介导的细胞凋亡通路抑制卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)进展。方法60只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、首乌丸4周组、首乌丸6周组、首乌丸预防组、补佳乐组。腹腔注射去氧乙烯基环己烯(deoxyvinylcyclohexene,VCD)建立POF大鼠模型,予相应药物灌胃治疗后,采用Elisa法检测各组大鼠血清性激素水平,HE染色观察卵巢组织结构变化,电镜观察卵巢超微结构变化,荧光标记TUNEL法检测卵巢细胞凋亡水平,荧光定量PCR及Western blot检测大鼠卵巢组织中沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)、过氧化物酶增殖活化受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator1α,PGC-1α)、抑凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(b-cell lymphoma-2,Bcl-2)、促凋亡因子细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)及Bcl-2相关X蛋白(bcl2-associated X protein,Bax)的mRNA及蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠血清促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平显著升高(P首乌丸各治疗组血清性激素水平均显著改善(P首乌丸预防组的作用最明显。结论首乌丸可以延缓POF进展,早期预防作用更显著;其具体机制可能与调节线粒体介导的SIRT1/PGC-1α/Cyt C细胞凋亡通路,减少卵巢GCs凋亡有关。

关键词：首乌丸卵巢早衰 SIRT1/PGC-1α/Cyt C信号通路线粒体大鼠

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高效液相色谱法测定首乌丸中大黄素的含量

中国生化药物杂志 2009年第2期30卷 118-120,123页

作者：李静张莉曹玲王玉中国药科大学江苏南京210009 江苏省食品药品检验所江苏南京210008

目的建立首乌丸中大黄素含量的测定方法。方法运用正交实验优化样品处理的提取条件，采用高效液相色谱法检测大黄素含量，色谱柱为UhimateXB—C18（5μm，250mm×4．6mm），流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液（87：13），检测波长254nm。结... 详细信息

目的建立首乌丸中大黄素含量的测定方法。方法运用正交实验优化样品处理的提取条件，采用高效液相色谱法检测大黄素含量，色谱柱为UhimateXB—C18（5μm，250mm×4．6mm），流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液（87：13），检测波长254nm。结果大黄素在1．89～60．37μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0．9998，游离大黄素和总大黄素的平均加样回收率分别为100．16％和99．87％，RSD分别为0．91％和1．50％。结论此法简便、准确、快捷，可用于首乌丸的质量控制。

关键词：首乌丸大黄素高效液相色谱法

HPLC-MS法测定首乌丸中五种蒽醌类成分的含量

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中国生化药物杂志 2012年第1期33卷 30-33页

作者：王玉李静张莉曹玲江苏省食品药品检验所江苏南京210008 中国药科大学江苏南京210009

目的建立首乌丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚等五种蒽醌类成分的含量测定方法。方法 HPLC-MS联用法对首乌丸中五种蒽醌类物质的含量同时测定。色谱条件为:Phenomenex Luna C18(3μm,150 mm×2 mm)柱,流动相:甲醇... 详细信息

目的建立首乌丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚以及大黄素甲醚等五种蒽醌类成分的含量测定方法。方法 HPLC-MS联用法对首乌丸中五种蒽醌类物质的含量同时测定。色谱条件为:Phenomenex Luna C18(3μm,150 mm×2 mm)柱,流动相:甲醇-5 mmol/L醋酸铵溶液(90∶10),流速:0.2 mL/min,电喷雾型质谱检测器。结果大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在0.18～56.6,0.016～10.03,0.024～14.94,0.18～11.33,0.011～6.85 ng范围内线性良好;r分别为0.999 8,0.999 9,0.998 8,0.999 9,0.999 9;水解前平均回收率分别为108.5%(RSD=0.93%),98.67%(RSD=1.57%),100.2%(RSD=0.69%),99.73%(RSD=1.27%),105.4%(RSD=1.54%);水解后平均回收率分别为99.67%(RSD=1.12%),99.21%(RSD=1.78%),98.94%(RSD=1.23%),98.32%(RSD=2.08%),96.10%(RSD=2.67%)。结论此法简便、准确、快捷,可用于首乌丸的质量控制。

关键词：首乌丸蒽醌类成分 HPLC-MS-MS