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巨自噬与分子伴侣介导的自噬在饥饿诱导的Raji细胞中相继顺序被激活

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中国药理学通报 2019年第7期35卷 958-961页

作者：李彩丽辛英魏虎来陈静王蓓李敏西北民族大学医学院甘肃兰州730030 兰州大学基础医学院甘肃省新药临床前研究重点实验室甘肃兰州730030

目的研究巨自噬与分子伴侣介导的自噬在饥饿诱导的Raji细胞中出现的先后顺序及其机制。方法用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察MDC荧光染色后,Raji细胞内自噬体的形成情况;Western blot检测细胞LC3Ⅰ/Ⅱ、 Beclin-1、Hsc70及Lamp-2a... 详细信息

目的研究巨自噬与分子伴侣介导的自噬在饥饿诱导的Raji细胞中出现的先后顺序及其机制。方法用激光共聚焦显微镜和荧光显微镜观察MDC荧光染色后,Raji细胞内自噬体的形成情况;Western blot检测细胞LC3Ⅰ/Ⅱ、 Beclin-1、Hsc70及Lamp-2a等蛋白的表达水平。结果在饥饿诱导的Raji细胞中,巨自噬与分子伴侣介导的自噬是相继顺序,而非同步被激活,巨自噬活性在饥饿诱导的最初几小时快速升高并达到峰值,然后随着饥饿时间的延长逐渐下降,而与巨自噬活性下降相伴随的是分子伴侣介导的自噬活性逐渐增加。结论肿瘤细胞在饥饿诱导的不同阶段通过不同的自噬方式应对压力刺激,巨自噬与分子伴侣介导的自噬之间此消彼长、协调补充的关系更有助于肿瘤细胞适应内外环境的变化,维持自身的生长与增殖。

关键词：巨自噬分子伴侣介导的自噬 Raji细胞饥饿诱导 Burkitt淋巴瘤 Hsc70

球形棕囊藻的负趋光性和硝酸盐饥饿诱导鞭毛脱落试验

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水生态学杂志 2015年第5期36卷 58-62页

作者：陈加雄李伟滨廖小珊林传旭中国科学院汕头海洋植物实验站广东汕头515041

为了解释自然界中球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)赤潮的生消现象,对其负趋光性和硝酸盐饥饿诱导鞭毛脱落进行试验。通过制作简易的实验装置,对球形棕囊藻生活史中的游动单细胞、不动单细胞和群体3种形态进行趋光性试验。结果显示,具... 详细信息

为了解释自然界中球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)赤潮的生消现象,对其负趋光性和硝酸盐饥饿诱导鞭毛脱落进行试验。通过制作简易的实验装置,对球形棕囊藻生活史中的游动单细胞、不动单细胞和群体3种形态进行趋光性试验。结果显示,具有鞭毛的游动单细胞形态的球形棕囊藻负趋光性明显,其他2种形态则无负趋光性;当培养基中硝酸盐完全缺失时,或者用等量氮素的亚硝酸盐或尿素代替,球形棕囊藻细胞均不能正常生长;在硝酸盐饥饿状态下,诱导游动单细胞鞭毛脱落成为不动单细胞,并逐渐聚集形成群体,不动单细胞和群体培养液添加硝酸盐继续培养后又出现大量游动单细胞。试验表明,球形棕囊藻具有负趋光性,硝酸盐饥饿能够诱导游动单细胞鞭毛脱落并逐渐形成群体,当硝酸盐营养得到补充时,游动单细胞即可再生,与其在自然界中的赤潮生消现象相吻合。

关键词：球形棕囊藻负趋光性硝酸盐饥饿诱导鞭毛脱落

萝卜硫素对饥饿诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用

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中国药房 2014年第39期25卷 3656-3658页

作者：郑来双马玉莲河南省医药采购服务中心郑州450000

目的:研究萝卜硫素抑制饥饿诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用。方法:以饥饿培养法诱导HUVECs凋亡。试验随机均分为正常对照(完全培养液)组、模型(模型培养液)组与萝卜硫素高、低浓度(10、5μmol/L)组。观察HUVECs形态;SRB法检测H... 详细信息

目的:研究萝卜硫素抑制饥饿诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用。方法:以饥饿培养法诱导HUVECs凋亡。试验随机均分为正常对照(完全培养液)组、模型(模型培养液)组与萝卜硫素高、低浓度(10、5μmol/L)组。观察HUVECs形态;SRB法检测HUVECs存活率;Hoechst 33258染色法观察HUVECs的凋亡程度;吖啶橙染色和Western blot法观察HUVECs自噬水平的变化。结果:在饥饿条件下,萝卜硫素可以有效抑制饥饿HUVECs边缘发亮,脱离皿底的现象随时间延长而愈加明显;提高HUVECs的存活率;抑制HUVECs的凋亡,且具有剂量、时间依赖性;提高HUVECs的自噬水平。结论:萝卜硫素可能通过诱导自噬而起到抑制饥饿诱导HUVECs凋亡的作用。

关键词：萝卜硫素人脐静脉内皮细胞细胞凋亡细胞自噬饥饿诱导

细胞自噬的诱导及检测技术在细胞生物学实验教学中的应用实例

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中国细胞生物学学报 2012年第3期34卷 286-289页

作者：翟欢欢薛秀花张伟北京师范大学生命科学学院北京100875

细胞自噬是一种在进化上高度保守的溶酶体吞噬降解自身成分的胞内代谢途径。它与多种生理功能有关,如在饥饿、刺激等不利环境条件下,细胞通过自噬降解多余或异常的大分子,为细胞的生存提供能量及原材料,促进生物体的生长发育、细胞分化... 详细信息

细胞自噬是一种在进化上高度保守的溶酶体吞噬降解自身成分的胞内代谢途径。它与多种生理功能有关,如在饥饿、刺激等不利环境条件下,细胞通过自噬降解多余或异常的大分子,为细胞的生存提供能量及原材料,促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。但是,过度的自噬可以导致细胞死亡,因此自噬又被称为II型程序性细胞死亡,这是除凋亡和坏死之外的一种新的细胞死亡方式。另外,自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性病变、病原体感染等密切相关。由于细胞自噬在生理和病理过程中都发挥着重要作用,因此,自噬成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。以细胞自噬为研究内容,设计了适合在本科生课程中开设的细胞自噬的诱导及观察实验项目,对该实验项目的实验原理、实验设计与安排等进行了详细的介绍,为该项目在实验课程中的推广提供了有益的参考。

关键词：细胞自噬饥饿诱导细胞生物学实验教学

耐庆大霉素的大肠杆菌Ⅰ型持留菌形成基因的筛选及机制研究

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耐庆大霉素的大肠杆菌Ⅰ型持留菌形成基因的筛选及机制研究

作者：赵克东福建师范大学

学位级别：硕士

随着抗生素的广泛使用,细菌耐药变得日益严重,已经成为世界性难题。持留菌是存在于细菌种群中的表型变异体,对抗生素胁迫具有高度的耐受性。持留菌不仅是感染性疾病不断复发的主要元凶,而且在细菌的耐药演化中发挥着重要作用。因此深入... 详细信息

随着抗生素的广泛使用,细菌耐药变得日益严重,已经成为世界性难题。持留菌是存在于细菌种群中的表型变异体,对抗生素胁迫具有高度的耐受性。持留菌不仅是感染性疾病不断复发的主要元凶,而且在细菌的耐药演化中发挥着重要作用。因此深入研究持留菌的形成机制具有十分重要的意义。本研究以Keio敲除株文库为研究对象,利用饥饿诱导的方法,构建I型持留菌模型,然后利用庆大霉素进行筛选,以期发现新的持留菌形成基因,揭示新的持留菌形成机制。本研究取得的主要研究成果如下:1.利用庆大霉素对Keio敲除株文库进行筛选,最终得到了107个能够形成I型持留菌的单基因敲除菌株。不同敲除株对庆大霉素的耐受程度不同。2.对107个单基因敲除菌株的目的基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和KEGG通路(KEGG pathway)功能富集分析以及构建蛋白质相互作用(PPI)网络获取hub基因,发现关键基因主要富集在氨基酸的生物合成通路。3.为14个与氨基酸合成相关的单基因敲除菌株补充对应的氨基酸,能够不同程度地逆转敲除株的耐受表型。其中Δlys R和Δlys A(补充赖氨酸),Δarg G、Δarg A和Δarg H(补充精氨酸),Δmet E(补充甲硫氨酸)以及Δilv C(补充异亮氨酸)的恢复效果最为明显。我们的研究初步证明了赖氨酸、精氨酸、甲硫氨酸以及异亮氨酸的合成水平能够影响耐庆大霉素的I型持留菌的形成。我们的结果为持留菌形成机制的研究提供了新的思路,同时筛选出的目的基因有待进行更深层次的研究,为临床上消除持留菌以及发现新的药物靶点提供理论支撑。

关键词：饥饿诱导 Keio敲除株文库筛选 Ⅰ型持留菌

西藏地区盐环境嗜盐古菌多样性及产酶特性研究

同方学位论文库评论

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西藏地区盐环境嗜盐古菌多样性及产酶特性研究

作者：徐佳琪江苏大学

学位级别：硕士

我国西藏特殊的地理和气候孕育了不同于其他地区的高盐环境,这些高盐环境蕴藏着丰富的嗜盐古菌资源。本文主要研究西藏芒康地区古盐田和西藏聂耳错盐湖嗜盐古菌的多样性,分析其种群结构,利用多相分类学分析方法确定未知类群的分类学地位... 详细信息

我国西藏特殊的地理和气候孕育了不同于其他地区的高盐环境,这些高盐环境蕴藏着丰富的嗜盐古菌资源。本文主要研究西藏芒康地区古盐田和西藏聂耳错盐湖嗜盐古菌的多样性,分析其种群结构,利用多相分类学分析方法确定未知类群的分类学地位,并研究嗜盐古菌胞外蛋白酶合成机制以及蛋白酶的特性。基于16S rRNA基因系统发育分析结果表明,分离自西藏盐井古盐田的133株嗜盐古菌分别属于8个属17个分类单元,其中优势类群为Halolamina类群;分离自西藏聂耳错盐湖的58株嗜盐古菌分别属于13属21个分类单元,其中优势类群为Halorubrum类群。西藏盐湖嗜盐古菌多样性指数略高于西藏古盐田。多相分类学研究结果表明,来自西藏盐井古盐田的7个菌株,分属于6个不同的分类单元(6个新种),分别为Halobacterium tibetense XZYJT26T、Halosimplex tibetense XZYJT29T、Haladaptatus salinus XZYJT32T、Halorussus litoreusXZYJT10T、Halorussus tibetensis XZYJ18T、Halorussus limi XZYJT40T。用NOM牛奶平板筛选西藏芒康古盐田133株嗜盐古菌,共筛选到11株可产胞外蛋白酶的嗜盐古菌。系统发育分析结果表明,这11株菌进行属于4个不同种。结合产酶菌株水解圈直径和胞外蛋白酶活力的测定,菌株XZYJ18酶活力最高,并且对明胶和牛奶都具有较好的水解能力。菌株XZYJ18在对数期向稳定期过渡时开始大量分泌蛋白酶,添加酵母粗提物可抑制蛋白酶分泌。菌株XZYJ18在饥饿条件下可诱导胞外蛋白酶的合成。菌株XZYJ18胞外蛋白酶的最适反应条件为55℃、pH 8.0,在酸或碱性条件下均具有良好稳定性,其最适反应NaCl浓度为0 M,当NaCl浓度达到3 M时,酶活为最高酶活的61%,并且在不同NaCl浓度下均能保持较好稳定性。添加Mn可使酶活提高。菌株XZYJ18蛋白酶是巯基依赖的丝氨酸蛋白酶,活性可同时被EDTA和天冬氨酸蛋白酶类抑制剂pepstatin A部分抑制,暗示其可能是一种新型蛋白酶。

关键词：嗜盐古菌多样性胞外蛋白酶饥饿诱导