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中国粉体技术 2018年第4期24卷 12-17页

作者：孙思佳丁浩刘坤陈颖中国地质大学(北京)材料科学与工程学院北京100083

为使纳米碳酸钙(NCC)呈现分散型颗粒特征以提高其功能作用,对NCC颗粒的聚集行为和水介质中NCC聚团体的解聚、分散及其特征进行研究。结果表明,NCC颗粒粒径约为50~100 nm,彼此以较强作用结合成中位径d(0.5)=1.799μm、表面积平均径D[3,2]... 详细信息

为使纳米碳酸钙(NCC)呈现分散型颗粒特征以提高其功能作用,对NCC颗粒的聚集行为和水介质中NCC聚团体的解聚、分散及其特征进行研究。结果表明,NCC颗粒粒径约为50~100 nm,彼此以较强作用结合成中位径d(0.5)=1.799μm、表面积平均径D[3,2]=1.412μm的聚团体,对添加聚丙烯酸钠CD458的NCC悬浮体进行高速搅拌和超声波振荡可使聚团体得到有效解聚并良好分散,其解聚产物的D[3,2]分别减小至160、146 nm,d(0.5)分别减小至263、158 nm。

关键词：纳米碳酸钙颗粒解聚分散

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基于病毒样颗粒的戊型肝炎病毒中和抗体8C11的作用机制和结构基础研究

基于病毒样颗粒的戊型肝炎病毒中和抗体8C11的作用机制和结构基础...

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作者：蒋婕厦门大学

学位级别：硕士

戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）是一种无包膜的单股正链RNA病毒,共有四种基因型,但只有一种血清型。由该病毒引起的戊型肝炎是全世界范围内的公共卫生问题,孕妇感染戊肝病毒具有较高的死亡率。由于目前缺乏高效的HEV体外培养模... 详细信息

戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus,HEV）是一种无包膜的单股正链RNA病毒,共有四种基因型,但只有一种血清型。由该病毒引起的戊型肝炎是全世界范围内的公共卫生问题,孕妇感染戊肝病毒具有较高的死亡率。由于目前缺乏高效的HEV体外培养模型,HEV的感染及中和机制一直未被阐明。HEVORF2编码唯一的结构蛋白并组装成病毒衣壳蛋白,由于HEV无包膜,衣壳蛋白直接参与了病毒吸附、入胞,并诱导宿主免疫应答等过程。重组表达的HEV衣壳蛋白是相关研究的理想对象,对于HEV衣壳蛋白的结构和重要抗原性表位的研究有助于阐明HEV的结构基础和感染、入胞机制,进而为戊肝的预防、诊断和治疗提供理论指导。ORF2编码全长660个氨基酸的结构蛋白,其中aa459-606可形成同源二聚体（E2s）,是HEV主要的中和抗体结合区域。本实验室前期筛选获得HEV高亲和力中和抗体8C11,并利用大肠杆菌表达的E2s与中和抗体8C11的Fab制备免疫复合物并解析了复合物结构,阐明了 8C11的识别表位。E2s在体外无法组装成颗粒,而昆虫细胞表达的ORF2p495蛋白（aa112-606）可组装形成T=1的正二十面体对称的病毒样颗粒（Virus Like Particle,VLP）。E2s位于颗粒表面二倍轴区域的突起,8C11的识别表位位于二聚体突起的沟槽区。有趣的是,按照已解析的E2s:8C11结构所阐明的结合方式,结合在p495上的8C11将与颗粒上相邻的二聚体突起发生碰撞,提示8C11结合p495颗粒具有较大的空间位阻。为阐明8C11结合p495乃至天然病毒并发挥中和作用的具体机制,本研究利用昆虫细胞表达的p495 VLP,解析颗粒及颗粒复合物的冷冻电镜结构,并在颗粒层面上研究8C11与p495的相互作用。首先,利用杆状病毒昆虫细胞表达系统表达p495蛋白,组装成VLPs,通过PEG沉淀和阴离子交换层析两步纯化高效地获得纯度大于90%、形态大小均一的p495VLPs,并确定了最佳缓冲条件,验证了颗粒在该缓冲液中的稳定性。酶联免疫实验和小鼠免疫实验验证了 p495VLPs具有良好的抗原性和免疫原性,且与已上市的戊肝疫苗Hecolin（?）相当。进一步的细胞实验表明p495 VLPs能成功吸附HepG2细胞,中和抗体8C11能阻断该吸附。利用冷冻电镜技术,获得分辨率为3.4 A的T=1 p495 VLP结构,与已报道的晶体结构基本一致。再者,利用本研究获得的p495VLPs与中和抗体8C11制备复合物。在此研究中我们发现p495VLPs与8C11形成的免疫复合物极不稳定,在一定时间后颗粒解聚,形成p495单体,二聚体或多聚体的8C11复合物,电镜结果和生化实验都证实了这一现象。而p495 VLPs与另一株抗体3B6形成的免疫复合物却未出现这种解聚现象。利用冷冻电镜单颗粒重构技术,我们解析暂未完全解聚的p495:8C11复合物,分辨率为4.0A,对结构的分析结果显示,复合物表面的E2s部分由于8C11的结合产生较大的无规则形变,对称性被破坏,使得在利用信号叠加方式的重构过程中E2s的部分密度丢失。通过多种重构方法的尝试,均未获得理想的复合物结构,这些结果证明了 8C11的结合会破坏颗粒。作为对照,p495:3B6复合物（9.4 A）能看到完整的p495及Fab密度。由于本研究所观察到的抗体导致的解聚现象是基于VLP,为进一步证实8C11是否对天然病毒也具有解聚作用,我们进一步进行基于真病毒的核酸释放实验,证实了 8C11在真病毒上同样存在潜在的裂解作用。综上所述,本研究借助生物化学、分子生物学和结构生物学等方法,研究阐释了中和抗体8C11结合病毒样颗粒后,由于空间位阻及空间碰撞的存在,对颗粒产生挤压和扭曲,最终导致颗粒的解聚。这种中和抗体结合后由于空间位阻直接对颗粒产生破坏的方式,可能是一种全新的中和抗体中和机制。

关键词：戊型肝炎病毒复合物颗粒解聚冷冻电镜结构空间位阻

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电熔法生产氧化锆副产物硅灰性质与颗粒特性

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中国粉体技术 2018年第6期24卷 25-29页

作者：孙思佳丁浩史亚超中国地质大学(北京)材料科学与工程学院北京100083

为优化电熔法生产氧化锆过程副产物硅灰(DR-GH)加工技术、提高其利用价值,采用粒度分布测试、扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)观察,并结合化学元素、X射线衍射(XRD)分析、DR-GH水悬浮液搅拌手段,对DR-GH的化学成分、物相组成... 详细信息

为优化电熔法生产氧化锆过程副产物硅灰(DR-GH)加工技术、提高其利用价值,采用粒度分布测试、扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)观察,并结合化学元素、X射线衍射(XRD)分析、DR-GH水悬浮液搅拌手段,对DR-GH的化学成分、物相组成、颗粒特性进行研究。结果表明,DR-GH主要由无定形SiO_2实心体微球和少量ZrO_2粒子组成,SiO_2微球原级粒径为0.5～3μm,彼此间先聚集形成结合力强的二次颗粒,再由二次颗粒凝聚成结合力较弱的SiO_2团聚体。对DR-GH水悬浮液搅拌可使SiO_2团聚体解聚至二次颗粒尺度,其粒度d_(90)由18.551μm降至5.379μm,d_(50)由2.582μm降至1.88μm。

关键词：硅灰无定形SiO2 颗粒解聚

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