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组织工程颌下腺细胞与胶原海绵复合培养的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第2期21卷 160-164页

作者：周青朱耀旻邓春富王玉新中国医科大学口腔医学院口腔颌面外科沈阳110001

目的研究大鼠颌下腺细胞在胶原海绵材料支架上的生长情况。方法取8d龄Wistar大鼠颌下腺细胞,传代培养至第2代细胞,按2×104/ml注射法接种于5mm×5mm×2mm胶原海绵表面进行培养。术后1、2、3周行组织学观察、扫描电镜观察胶原海绵上接种... 详细信息

目的研究大鼠颌下腺细胞在胶原海绵材料支架上的生长情况。方法取8d龄Wistar大鼠颌下腺细胞,传代培养至第2代细胞,按2×104/ml注射法接种于5mm×5mm×2mm胶原海绵表面进行培养。术后1、2、3周行组织学观察、扫描电镜观察胶原海绵上接种颌下腺细胞形态结构特点;取复合培养3周的颌下腺细胞行免疫组织化学细胞角蛋白(cytokratin8.13,CK8.13)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscular actin,α-SMA)染色,透射电镜观察细胞超微结构,鉴定细胞来源。分别取复合培养1d,1、2、3周的培养上清,用Amano法测定淀粉酶含量,检测与胶原海绵复合培养的颌下腺细胞功能。结果细胞接种后第1周细胞分散于材料表面,无细胞突起形成;第2周细胞数量有所增加、细胞突起形成并锚定于胶原海绵表面;第3周时附着的细胞数目增多,可见细胞表层有丝状纤维形成。免疫组织化学染色观察复合培养的颌下腺细胞上皮细胞特异性抗体CK8.13呈强阳性,肌上皮细胞特异性抗体α-SMA染色呈阳性。透射电镜下颌下腺上皮细胞表面可见微绒毛、胞浆皱褶和细胞顶部的酶原颗粒,胞核大卵圆形,胞质内见线粒体和粗面内质网。随着接种后培养时间的延长,与胶原海绵复合培养的颌下腺细胞分泌的淀粉酶含量有不同程度的增加。结论胶原海绵具有良好的细胞相容性,颌下腺细胞与胶原海绵复合培养,细胞可保持增殖分化能力及分泌功能,有望成为颌下腺细胞的载体应用于组织工程支架材料。

关键词：颌下腺细胞胶原海绵复合培养大鼠

转化生长因子β_3对鼠颌下腺细胞分泌功能的影响

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中国修复重建外科杂志 2004年第6期18卷 490-493页

作者：朱耀旻周青王玉新中国医科大学附属第一临床医院整形外科沈阳110001 中国医科大学附属第一临床医院口腔颌面外科沈阳110001

目的　研究转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)对鼠颌下腺细胞 (ratsubmandibular gland cells,RSGCs)分泌淀粉酶功能的影响。　方法　原代及传代培养 Wistar大鼠 RSGCs,免疫组织化学鉴定细胞来源 ,按加入不同浓度... 详细信息

目的　研究转化生长因子β3(transforming growth factorβ3,TGF-β3)对鼠颌下腺细胞 (ratsubmandibular gland cells,RSGCs)分泌淀粉酶功能的影响。　方法　原代及传代培养 Wistar大鼠 RSGCs,免疫组织化学鉴定细胞来源 ,按加入不同浓度 TGF-β3(0 .5、1.0、5 .0、10 .0、2 5 .0 ng/ ml)分组 ,未加入 TGF-β3的为对照组。采用噻唑蓝 (MTT)比色法、自动生化分析仪和免疫印迹法检测 2 4、4 8、72和 96小时后 TGF-β3对细胞增殖及淀粉酶分泌功能的影响。　结果　培养的 RSGCs免疫组织化学鉴定 CK 8.13、S- 10 0蛋白染色呈阳性 ,波形丝蛋白染色呈阴性。 MTT法检测各组细胞吸光度 A值与对照组比较 ,差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。 72和 96小时后 ,0 .5～ 10 .0 ng/ ml TGF-β3组与对照组比较 ,细胞分泌的淀粉酶明显增加 ,差异有统计学意义 (P颌下腺组织及培养细胞的淀粉酶提取物形成蛋白表达一致的电泳带。　结论　 TGF-β3能促进 RSGCs的分化和淀粉酶的分泌功能。

关键词：转化生长因子β3 颌下腺细胞淀粉酶细胞培养

组织工程化颌下腺细胞与支架材料复合培养最佳细胞浓度的实验研究

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中国医科大学学报 2003年第5期32卷 428-430页

作者：谭学新宫相芹王玉新周青邓春富王绪凯中国医科大学附属第一医院口腔颌面外科辽宁沈阳110001 沈阳市口腔医院

目的 :研究颌下腺细胞与支架材料体外复合培养中 ,细胞接种浓度对复合培养物的影响。方法 :体外原代培养SD鼠颌下腺细胞 ,并传代至第 2代 ,细胞计数 ,按细胞浓度为 10 ,2 0 ,30 ,4 0 ,5 0 ,6 0 ,70× 10 6/ml接种于 5mm× 5mm× 2mm胶... 详细信息

目的 :研究颌下腺细胞与支架材料体外复合培养中 ,细胞接种浓度对复合培养物的影响。方法 :体外原代培养SD鼠颌下腺细胞 ,并传代至第 2代 ,细胞计数 ,按细胞浓度为 10 ,2 0 ,30 ,4 0 ,5 0 ,6 0 ,70× 10 6/ml接种于 5mm× 5mm× 2mm胶原海绵表面 ,并置于 2 4孔培养板内 ,形成颌下腺细胞胶原海绵复合物。继续培养 ,于接种细胞后 1,3,5 ,7d取材 ;HE染色、免疫组化、扫描电镜观察及细胞计数检测等 ,评价颌下腺细胞 -胶原海绵复合物形成的最佳细胞接种浓度。结果 :5 0 ,6 0 ,70× 10 6/ml细胞浓度的复合物中颌下腺细胞在支架材料上黏附、伸展及生长良好。 10 ,2 0 ,30 ,4 0× 10 6/ml细胞浓度的复合物中颌下腺细胞在支架材料上增殖分化及生长较差。细胞计数显示接种 7d时 ,各组材料细胞数均只有 10 4/ml数量级 ,5 0 ,6 0 ,70× 10 6/ml接种浓度时 ,细胞粘附数量是 10 ,2 0 ,30 ,4 0× 10 6/ml的 2倍。结论 :颌下腺细胞与胶原海绵复合培养最佳接种细胞浓度为 5 0× 10 6/ml。

关键词：颌下腺细胞胶原海绵组织工程

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组织块法培养大鼠颌下腺细胞的实验研究

中国医科大学学报 2010年第3期39卷 194-196页

作者：黄巍巍谭学新李波王哲李欣宇马丽黄丹丹中国医科大学口腔医学院口腔解剖生理学教研室沈阳110002 内蒙古医学院第三附属医院妇产科内蒙古包头014010

目的探讨组织块法培养大鼠颌下腺细胞(RSGC)的方法与细胞生长的特点。方法采用组织块法培养RSGC,使用酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,免疫组织化学SABC方法进行细胞角蛋白-8免疫组化染色,进行细胞来源鉴定。倒置显微镜下进行形态学观... 详细信息

目的探讨组织块法培养大鼠颌下腺细胞(RSGC)的方法与细胞生长的特点。方法采用组织块法培养RSGC,使用酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,免疫组织化学SABC方法进行细胞角蛋白-8免疫组化染色,进行细胞来源鉴定。倒置显微镜下进行形态学观察,取第2代RSGC,FDA-PI双色荧光法检测细胞活力,MTT法绘制生长曲线。结果细胞角蛋白-8染色阳性。倒置显微镜下,细胞主要呈3种形态,为圆形亮细胞、多角形暗细胞、梭形暗细胞。细胞活力>95%,生长曲线表示细胞5d开始进入对数生长期。结论此方法简便,易操作,获得了大量的RSGC,为颌下腺细胞作为种子细胞的颌下腺组织工程研究提供了实验基础和理论依据。

关键词：颌下腺细胞组织块培养方法酶消化法差速贴壁法组织工程

两种支架材料与颌下腺细胞体外复合培养的比较研究

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中华实验外科杂志 2005年第5期22卷 591-592页

作者：邓春富谭学新周青黄绍辉王玉新中国医科大学口腔医学院颌面外科沈阳110002

目的将颌下腺细胞分别与颌下腺脱细胞基质(SGAM)生物衍生材料及胶原海绵体外复合培养,比较两种不同支架材料的生物相容性。方法用传代培养第2代的颌下腺细胞分别与SGAM生物衍生材料及胶原海绵体外复合培养,在一定时间通过扫描电镜观察... 详细信息

目的将颌下腺细胞分别与颌下腺脱细胞基质(SGAM)生物衍生材料及胶原海绵体外复合培养,比较两种不同支架材料的生物相容性。方法用传代培养第2代的颌下腺细胞分别与SGAM生物衍生材料及胶原海绵体外复合培养,在一定时间通过扫描电镜观察细胞在不同支架材料上的生长情况。结果颌下腺细胞在SGAM生物衍生支架材料上,多数附着在支架材料的孔隙内或其边缘,数量较多,大小不等,形态各异,表面凸凹不平,突起丰富;表面结构似“银耳”状。而细胞在胶原海绵支架材料上大多附着在材料表面,数量较少,突起较少。结论颌下腺脱细胞基质支架材料与胶原海绵支架材料相比具有良好的生物相容性,是一种较为理想的颌下腺组织工程用支架材料。

关键词：体外复合培养颌下腺细胞生物衍生支架材料生物衍生材料脱细胞基质生物相容性胶原海绵扫描电镜观察传代培养表面结构材料表面组织工程附着突起

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多聚赖氨酸对胎鼠颌下腺细胞培养的影响

中国医科大学学报 2006年第5期35卷 510-511页

作者：黄绍辉张恩礁周青王玉新徐颖中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科辽宁沈阳110002 鞍山市中心医院口腔科

目的:研究以多聚赖氨酸为生长底物对体外培养胎鼠颌下腺上皮细胞生长的影响。方法:以多聚赖氨酸包被培养板,对胎鼠颌下腺上皮细胞进行分离培养,应用相差显微镜及电镜观察细胞生长特性,免疫组织化学方法对细胞来源进行鉴定。结果:颌下腺... 详细信息

目的:研究以多聚赖氨酸为生长底物对体外培养胎鼠颌下腺上皮细胞生长的影响。方法:以多聚赖氨酸包被培养板,对胎鼠颌下腺上皮细胞进行分离培养,应用相差显微镜及电镜观察细胞生长特性,免疫组织化学方法对细胞来源进行鉴定。结果:颌下腺细胞在包被有多聚赖氨酸的培养皿表面生长分化良好,呈单层生长;免疫组织化学检测单克隆角蛋白、上皮膜抗体呈阳性表达。结论:多聚赖氨酸在体外培养的过程中,可以促进细胞的黏附与生长。

关键词：多聚赖氨酸颌下腺细胞细胞培养

表皮生长因子对颌下腺细胞在胶原海绵黏附的影响

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中华实验外科杂志 2004年第6期21卷 659-660,i002页

作者：谭学新邓春富周青黄绍辉王玉新王绪凯中国医科大学附属第一医院整形外科沈阳110001

目的　探讨表皮生长因子 (EGF)对颌下腺细胞在胶原海绵支架上黏附的影响。方法体外原代培养SD鼠颌下腺细胞 ,并传至第 2代 ,将其分别接种于含表皮生长因子修饰的胶原海绵上 ,和不含表皮生长因子修饰的胶原海绵上。于接种后 7d取材 ,进... 详细信息

目的　探讨表皮生长因子 (EGF)对颌下腺细胞在胶原海绵支架上黏附的影响。方法体外原代培养SD鼠颌下腺细胞 ,并传至第 2代 ,将其分别接种于含表皮生长因子修饰的胶原海绵上 ,和不含表皮生长因子修饰的胶原海绵上。于接种后 7d取材 ,进行细胞计数计算细胞贴附率 ;苏木素伊红 (HE)染色 ,扫描电镜观察等检测。结果　实验组含有EGF ,细胞贴附率为 73 .1% ,对照组不含EGF ,贴附率为 62 .8% (P 颌下腺细胞在胶原海绵支架上黏附 ,增殖及分化均优于对照组。结论　EGF对颌下腺细胞在胶原海绵上的黏附有促进作用。

关键词：表皮生长因子颌下腺细胞胶原海绵细胞计数扫描电镜

单链DNA结合蛋白1沉默对颌下腺细胞放射后增殖修复的影响

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中华放射医学与防护杂志 2017年第9期37卷 645-650页

作者：陈龙吕秋丽义彬玲孙喆王代友广西医科大学附属口腔医院口腔颌面外科广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室广西颌面外科疾病诊治研究高校重点实验室南宁530021

目的研究沉默大鼠颌下腺（submandibular gland，SMG）细胞单链DNA结合蛋白1（single-strand DNA-binding protein 1，SSB1）表达后，放射损伤下细胞的增殖及修复情况。方法机械胰酶联合法进行大鼠SMG细胞原代培养及免疫组织化学法鉴... 详细信息

目的研究沉默大鼠颌下腺（submandibular gland，SMG）细胞单链DNA结合蛋白1（single-strand DNA-binding protein 1，SSB1）表达后，放射损伤下细胞的增殖及修复情况。方法机械胰酶联合法进行大鼠SMG细胞原代培养及免疫组织化学法鉴定。实验分3组：正常细胞组、阴性对照组（Ad-HK组）和实验组（Ad-SSB1-shRNA组）。重组腺病毒介导shRNA转染SMG细胞，荧光定量PCR检测SSB1表达沉默情况。CCK-8法及免疫荧光法分别检测细胞活性及γ-H2AX焦点数动态变化。结果细胞免疫组织化学检测角蛋白和α-淀粉酶表达均呈阳性。转染72 h后转染效率接近90%，实验组SSB1 mRNA表达较正常细胞组明显降低（t=16.24，P〈0.05）。照射前，实验组细胞活性下降不明显，120 h时细胞活性才明显低于正常细胞组（t=3.29，P〈0.05）。5 Gy照射后，实验组各时间点细胞活性均明显低于阴性对照组和正常细胞组（F=10.19~30.13，P〈0.05）。γ-H2AX免疫荧光显示，沉默SSB1能抑制细胞DNA放射损伤修复。结论沉默SSB1表达的大鼠SMG细胞对放射损伤更敏感。SSB1在大鼠SMG细胞DNA放射损伤修复中有着重要作用。

关键词：单链DNA结合蛋白1 颌下腺细胞电离辐射 DNA双链断裂

异丙肾上腺素对SD大鼠原代颌下腺细胞增殖的影响

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实用口腔医学杂志 2005年第5期21卷 618-620页

作者：黄桂林李龙江李学英宋庆高宋琦遵义医学院附属口腔医院口腔颌面外科 563003 四川大学华西口腔医院口腔颌面外科

目的研究异丙肾上腺素对颌下腺细胞增殖的影响,为体外构建组织工程化涎腺提供充足的种子细胞。方法采用不同的方式加入异丙肾上腺素后,用Brdu标记阳性的细胞比率及绘制生长曲线的方法,检测颌下腺细胞的增殖能力。结果体外培养条件下,颌... 详细信息

目的研究异丙肾上腺素对颌下腺细胞增殖的影响,为体外构建组织工程化涎腺提供充足的种子细胞。方法采用不同的方式加入异丙肾上腺素后,用Brdu标记阳性的细胞比率及绘制生长曲线的方法,检测颌下腺细胞的增殖能力。结果体外培养条件下,颌下腺细胞保持了对肾上腺素能受体刺激的反应,但与给药浓度及方式有关。结论异丙肾上腺素能在一定作用时间和浓度条件下促进颌下腺细胞的增殖,能为体外构建组织工程化涎腺提供种子细胞。

关键词：颌下腺细胞异丙肾上腺素增殖组织工程