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预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响

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预知子提取物对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响

作者：薛天南方医科大学

学位级别：硕士

目的建立准确、灵敏、操作简便的高效液相色谱—电化学检测法(HPLC-ECD),测定大鼠脑组织中单胺类神经递质含量;考察预知子提取物(FAE)对大鼠前额皮层、海马、纹状体中去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)含量的影响,探索FAE... 详细信息

目的建立准确、灵敏、操作简便的高效液相色谱—电化学检测法(HPLC-ECD),测定大鼠脑组织中单胺类神经递质含量;考察预知子提取物(FAE)对大鼠前额皮层、海马、纹状体中去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、五羟色胺(5-HT)含量的影响,探索FAE可能的抗抑郁机制。建立检测马兜铃酸A的高效液相色谱法(HPLC-DAD),检测FAE与常春藤皂苷元(Hederagenin)中,是否含有肾毒性残留成分马兜铃酸A,进一步完善质量控制标准,以确保FAE和常春藤皂苷元的用药安全性。方法1、大鼠脑组织中单胺类神经递质测定方法的建立：采用HPLC-ECD法测定大鼠脑组织中NA、DA、5-HT的递质含量,以3,4-二羟基苄胺(DHBA)为内标。采用的色谱条件为,色谱柱：Dikma Diamonsil-C18(5μm,4.6×250mm);流动相：A-B(90:10),A为磷酸二氢钠水溶液(含25.0mmol/L NaH2PO4,1.7mmol/L辛烷磺酸钠,0.7mmol/L三乙胺,0.025mmol/LEDTA-2Na,pH=3.0),B为乙腈;流速：1.0mL/min;柱温：32℃;检测电势：E1=-150V,E2=220V,进样量20μL。2、FAE对大鼠脑组织中单胺类神经递质含量的影响：(1)急性给药实验：将体重范围在200-220g的雄性SD大鼠,随机分为4组,即溶剂对照(0.5%羧甲基纤维素钠)组、草酸-S-西酞普兰(ESC)10mg/kg阳性对照组、FAE50mg/kg给药组和FAE25mg/kg给药组。各组动物均灌胃-次,灌胃体积为10mL/kg;大鼠单次给药后分别于1h、2h、3h、5h四个时间点取出脑组织,冰上操作分离不同脑区,收集样品待测。(2)亚急性给药实验：将体重范围在200-220g的雄性SD大鼠,随机分为4组(同急性给药实验),除溶剂对照组灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠外,其余各组灌胃给予相应药物处理;各组动物每日灌胃1次,每次灌胃体积为10mL/kg,连续给药21d,并于末次给药2h后收集样品。(3)样品处理：大鼠断头处死,迅速取出全脑,于冰上快速分离出前额皮层、海马、纹状体部位,置冻存管存于液氮。取冻存的脑组织,称重后置于玻璃匀浆器,按10mL/kg的比例加入预冷含内标DHBA的高氯酸工作液,于冰浴下快速匀浆2min。将研磨好的匀浆液移入棕色离心管,于4℃条件下14000×g离心20min后取上清液,上清液再用0.22μm滤器过滤后上机检测。(4)数据处理：各部位的单胺类神经递质含量,均换算成湿组织浓度(ng/g),并用SPSS13.0进行统计学分析(ONE-WAY ANOVA),结果用GraphPad Prism5作图。3、马兜铃酸A检测方法的建立：采用HPLC-DAD法,样品用Dikma Diamonsil-C18柱(5μm,4.6×250mm)进行分离;以乙腈-水-冰醋酸(80：20：0.04)作为流动相;流速1.0mL/min,柱温为32℃,进样量为20μL;检测波长分别为210nm与250nm。结果1、测定大鼠脑组织中单胺类神经递质的HPLC-ECD法：样品中的内源性物质不干扰检测,各色谱峰均有效分离。NA、DA、5-HT的定量下限依次为12.0ng/mL、9.8ng/mL、20.8ng/mL,分别在0.0240-0.2400,0.0196-0.1960,0.0226-0.2260μg/mL范围内线性关系良好(R2≥0.9996);平均回收率分别为NA：84.41%-102.77%,DA：87.52%～104.61%,5-HT：83.74%-101.66%,RSD均小于15%;日内精密度均在3.05%-5.81%范围内,日间精密度在4.98%～7.59%之间。2、急性给药处理后,大鼠脑组织各部位的单胺类神经递质变化结果：(1)在前额皮层与海马部位,与溶剂对照组比较,NA在急性给予25mg/klg和50mg/kg FAE3h后显著升高;5-HT在急性给予10mg/kg ESC2h后和给予50mg/kg FAE3h后有所升高;DA在给予各种处理后均末观察到明显的变化。(NA-溶剂对照组vs25mg/kg和50mg/kg FAE组,前额皮层：360.645±13.619ng/g vs436.582±5.785ng/g,450.396±12.506ng/g;海马：351.405±14.206ng/g vs394.362±±8.041ng/g,410.530±10.477ng/g。)(5-HT-溶剂对照组vs10mg/kg ESC组,前额皮层：934.494±25.054ng/g vs1034.001±29.773

关键词： HPLC-ECD 预知子提取物常春藤皂苷元单胺类神经递质马兜铃酸A

液质联用技术鉴定预知子提取物中的主要化学成分

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中草药 2013年第12期44卷 1562-1567页

作者：孟月华黄何松余黄鹏何明珍孙勇兵冯育林杨世林江西中药固体制剂制造技术国家工程研究中心江西南昌330006 江西中医学院江西南昌330006

目的建立分析鉴定预知子提取物中的主要化学成分的方法。方法采用LC-ESI-MS负离子检测模式对预知子中的皂苷类成分进行分析,对其进行多级质谱裂解分析。以对照品及文献数据为对照,通过对各成分的MS2和MS3谱图的解析对各成分进行指认。... 详细信息

目的建立分析鉴定预知子提取物中的主要化学成分的方法。方法采用LC-ESI-MS负离子检测模式对预知子中的皂苷类成分进行分析,对其进行多级质谱裂解分析。以对照品及文献数据为对照,通过对各成分的MS2和MS3谱图的解析对各成分进行指认。结果预知子中的17个皂苷类成分获得了良好的分离和鉴定。结论本方法准确快速,适合预知子中主要化学成分的鉴定,可用于预知子原药材的质量控制。

关键词：液质联用技术预知子提取物皂苷类常春藤皂苷元齐墩果酸阿江榄仁酸

顶空GC-MS法测定预知子提取物中有机溶剂的残留量

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中药材 2011年第6期34卷 975-977页

作者：李国樑杨雪梅周枝凤马安德万新祥南方医科大学医学院广东广州510515 南方医科大学公共卫生与热带医学学院卫生检测中心广东广州510515

目的:建立测定预知子提取物中乙醇、乙酸乙酯、正丁醇三种有机溶剂残留量的顶空气相色谱质谱法。方法:采用自动顶空GC-MS法,RxiTM-5 ms(30 m×0.25 mm,0.25μm)毛细管色谱柱,优化顶空条件,以叔丁醇为内标。结果:三种溶剂与内标均分离良... 详细信息

目的:建立测定预知子提取物中乙醇、乙酸乙酯、正丁醇三种有机溶剂残留量的顶空气相色谱质谱法。方法:采用自动顶空GC-MS法,RxiTM-5 ms(30 m×0.25 mm,0.25μm)毛细管色谱柱,优化顶空条件,以叔丁醇为内标。结果:三种溶剂与内标均分离良好,且具有良好的线性(r>0.999);乙醇、乙酸乙酯、正丁醇的检测限分别为0.090、0.015、0.14μg/mL;加样回收率均在95%以上,RSD预知子提取物中有机溶剂残留量的监控。

关键词：顶空进样法 GC-MS 预知子提取物溶剂残留测定

预知子提取物对卒中后失眠模型大鼠海马PI3K/Akt信号通路的影响

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中医药导报 2023年第9期29卷 24-28页

作者：刘景峰宋伟伟李宝栋王雅荣白德龙赵学栋宋佳张玉曼霍青河北省沧州中西医结合医院河北沧州061000 山东中医药大学附属医院山东济南250011

目的:探讨预知子提取物(FAE)对卒中后失眠模型大鼠的影响及相关机制研究。方法:随机将60只SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性对照组(艾司西酞普兰,10 mg/kg),以及预知子提取物低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg);除假手术组外,其他组... 详细信息

目的:探讨预知子提取物(FAE)对卒中后失眠模型大鼠的影响及相关机制研究。方法:随机将60只SD大鼠分为假手术组、模型组、阳性对照组(艾司西酞普兰,10 mg/kg),以及预知子提取物低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg);除假手术组外,其他组大鼠均构建卒中后失眠大鼠模型,采用改良神经功能缺损严重程度(mNSS)量表对大鼠神经功能进行评分确保建模成功,并灌胃相应药物治疗。应用Morris水迷宫实验检测大鼠学习和记忆能力,HE染色观察大鼠脑组织病理改变,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平,RT-qPCR检测PI3K mRNA、Akt mRNA,Western bolting检测大鼠脑组织PI3K、Akt蛋白。结果:假手术组大鼠脑组织未见异常,模型组边界模糊并伴有淋巴细胞浸润,预知子提取物和艾司西酞普兰治疗后,病理改变较模型组缓解。与假手术组比较,模型组大鼠逃逸时间,血清TNF-α、IL-1β和IL-6,脑组织PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达均显著增加(P预知子提取物和艾司西酞普兰干预后,与模型组比较,预知子提取物各剂量组及阳性对照组大鼠逃逸时间,血清TNF-α、IL-1β和IL-6,脑组织PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达均显著降低(P预知子提取物各剂量组具有剂量依赖性。与阳性对照组比较,预知子提取物低、中剂量组大鼠逃逸时间,血清TNF-α、IL-1β和IL-6,脑组织PI3K、Akt的mRNA和蛋白表达均显著升高(P预知子提取物高剂量组各指标与阳性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:预知子提取物可有效改善卒中后失眠模型大鼠的学习记忆功能,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,从而降低炎症反应有关。

关键词：预知子提取物卒中失眠 PI3K/Akt信号通路海马大鼠