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细菌鞭毛研究概况及进展

微生物学通报 2005年第6期32卷 124-127页

作者：李任峰何启盖周锐陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室动物病原分室

鞭毛是细菌的一种特殊结构,约半数的杆菌、极少数球菌和所有的螺旋菌及弧菌都有鞭毛。鞭毛与细菌的运动有关,并在感染与免疫以及分类鉴定等方面发挥重要的作用,受到细菌研究者的高度重视。从细菌鞭毛的结构以及它在细菌致病性和免疫中... 详细信息

鞭毛是细菌的一种特殊结构,约半数的杆菌、极少数球菌和所有的螺旋菌及弧菌都有鞭毛。鞭毛与细菌的运动有关,并在感染与免疫以及分类鉴定等方面发挥重要的作用,受到细菌研究者的高度重视。从细菌鞭毛的结构以及它在细菌致病性和免疫中的作用最新研究进展加以概述,以供细菌研究者参考。

关键词：细菌鞭毛运动性抗原毒力相关因子

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空肠弯曲杆菌鞭毛的研究进展

中国畜牧兽医 2018年第9期45卷 2591-2599页

作者：刘明月程古月王旭戴梦红郝海红袁宗辉华中农业大学国家兽药残留基准实验室武汉430070

空肠弯曲杆菌是一种人畜共患的食物源性病原菌,可引起人和动物细菌性腹泻,且该菌的感染率逐年递增。鞭毛是细菌菌体的一种特殊结构,与菌体的运动性密切相关,有助于其躲避有害环境,同时鞭毛在细菌的致病性等方面也起着重要作用。研究发现... 详细信息

空肠弯曲杆菌是一种人畜共患的食物源性病原菌,可引起人和动物细菌性腹泻,且该菌的感染率逐年递增。鞭毛是细菌菌体的一种特殊结构,与菌体的运动性密切相关,有助于其躲避有害环境,同时鞭毛在细菌的致病性等方面也起着重要作用。研究发现,空肠弯曲杆菌的发病机制与鞭毛在宿主上皮细胞的定植力、黏附、侵袭力及毒素的产生密切相关。文章概述了空肠弯曲杆菌鞭毛结构、功能、调控机制及相关基因等方面的研究进展,通过归纳总结已知基因缺失突变对鞭毛的影响,从分子水平了解鞭毛的调控机制,从而探讨空肠弯曲杆菌的致病机理,以期为降低其感染率提供理论依据。

关键词：空肠弯曲杆菌鞭毛致病性鞭毛蛋白

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赖夫生鞭毛染色法的改进

微生物学通报 2001年第6期28卷 100-103页

作者：郭坚华周明华朱艳许高娟葛云英南京农业大学植保学院南京210095 江苏省张家港出入境检验检疫局张家港215000

赖夫生染色法是细菌鞭毛染色的一种常用方法。最近发现了延长赖夫生染剂使用寿命及改进染色效果的方法 ,并在此基础上进一步论证了乙醇在染色过程中所起的作用。

关键词：赖失生染色法鞭毛乙醇改进细菌

鞭毛在Geobacter胞外电子传递过程中的作用与机制研究

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鞭毛在Geobacter胞外电子传递过程中的作用与机制研究

作者：卓仕燕福建农林大学

学位级别：硕士

地杆菌(Geobacter)是一类具有胞外呼吸能力的厌氧细菌,广泛分布于土壤和地下水沉积物中,它们可在胞内彻底氧化有机物,产生的电子经胞内呼吸链传递至胞外电子受体(如铁氧化物、腐殖质、固体电极、互营细菌等)使其还原,并产生能量维持自... 详细信息

地杆菌(Geobacter)是一类具有胞外呼吸能力的厌氧细菌,广泛分布于土壤和地下水沉积物中,它们可在胞内彻底氧化有机物,产生的电子经胞内呼吸链传递至胞外电子受体(如铁氧化物、腐殖质、固体电极、互营细菌等)使其还原,并产生能量维持自身生长。地杆菌独特的胞外电子传递能力,使其在元素生物地球化学循环、土壤修复、污染物降解、厌氧消化产甲烷等方面具有重要应用价值。Geobacter sulfurrducens作为地杆菌中的模式菌株,具有完整的全基因组序列信息和完备的基因操作手段,被广泛用于地杆菌代谢、基因调控和胞外电子传递等方面的研究。Gsu.urreducens胞外分布着丰富的细胞色素c、胞外多聚物、菌毛和鞭毛。早期研究表明,G.sulfurreducens的胞外细胞色素c、胞外多聚物、菌毛等均可介导胞外电子传递。然而,鞭毛在地杆菌胞外电子传递过程的作用还未见报道。本研究以Gsulfurreducens 为对象,通过基因操作方法,恢复菌株PCA鞭毛的表达和抑制菌株KN400鞭毛的表达,分别以水铁矿、石墨电极和互营细菌(Geobacter metallireducens)等作为胞外电子受体,探究鞭毛在Geobacter胞外电子传递中的作用。主要研究结论如下:(1)通过恢复G.sulfurreducen PCA菌株鞭毛表达,获得了菌株PCA-PRG5fgrM;通过抑制G.sulfurreducen KN400 菌株鞭毛表达,获得了菌株KNΔFilC;在缺失菌毛组装蛋白(PilB)基础上,获得了菌株 PCAΔPilB-PRG5fgrM 和 KNΔPilBΔFilC。(2)发现鞭毛可促进G.sulfurreducens还原胞外难溶性水铁矿。菌株PCA-PRG5FgrM对水铁矿的还原速率高于野生型菌株PCA,而菌株KNΔFilC对水铁矿的还原速率低于野生型菌株KN400,可见恢复鞭毛的表达可提高其还原水铁矿速率,而缺失鞭毛则使其水铁矿还原速率降低。说明鞭毛的游动性赋予了G.sulfurreducens 定位更多新鲜水铁矿的能力,进而提高其还原水铁矿的速率。(3)发现鞭毛可提高G.sulfurreducens 产电性能。通过生物膜厚度和总蛋白含量分析,发现鞭毛可提高2倍的生物膜厚度;在生物膜胞外细胞色素c含量与组成方面,缺失鞭毛使其胞外细胞色素c含量降低54.5%,但对其组成无影响;利用电化学手段表征生物膜,发现鞭毛可提高其将电子传递到电极的能力。结果表明,鞭毛可作为支架结构促进产电生物膜的形成,提高单位电极面积的产电生物量和胞外细胞色素c含量,从而提高其产电性能。(4)发现鞭毛不影响G.sulfurreducens KN400与G.metallireducens GS-15种间直接电子传递,但有利于共培养体系的形成。通过构建 KNΔFilC 与 GS-15、KN400 与 GS-15△FilC、KNΔFilC与GS-15ΔFilC等三组共培养体系,研究鞭毛种间直接电子传递中的作用,结果表明鞭毛在种间直接电子传递中无作用,但可促进共培养体系的形成。本研究通过构建G.sulfurreducens鞭毛表达与缺失的突变株,表明鞭毛可促进水铁矿还原、电极还原、互营细菌等胞外电子传递过程,不仅改变了鞭毛仅仅作为细菌运动性器官的传统认识,还为理解微生物胞外电子传递过程提供新的视角。

关键词：鞭毛硫还原地杆菌胞外电子传递阳极代谢

禽坦布苏病毒E基因与沙门菌鞭毛保守区的嵌合表达研究

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中国家禽 2018年第10期40卷 17-20页

作者：施少华程龙飞傅光华陈红梅万春和傅秋玲刘荣昌林建生黄瑜福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 福建省禽病防治重点实验室福建福州350013

利用PCR方法从禽坦布苏病毒和肠炎沙门菌分别扩增出E基因和鞭毛基因保守片段(Flic AC和Flic DB),随后通过over-lapping PCR方法将Flic AC片段、E基因和Flic DB片段依序串联后获得Flic AC-E-Flic DB目的片段,克隆到p MD18-T载体中获得重... 详细信息

利用PCR方法从禽坦布苏病毒和肠炎沙门菌分别扩增出E基因和鞭毛基因保守片段(Flic AC和Flic DB),随后通过over-lapping PCR方法将Flic AC片段、E基因和Flic DB片段依序串联后获得Flic AC-E-Flic DB目的片段,克隆到p MD18-T载体中获得重组质粒p MD-Flic AC-E-Flic DB,经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后接入p ET-32a载体,构建原核表达重组质粒p ET-Flic AC-E-Flic DB。表达质粒转化入感受态细胞BL21(DE3)后,经IPTG诱导后表达出Flic AC-E-Flic DB嵌合蛋白,Western-blot鉴定证实与预期融合蛋白一致。

关键词：禽坦布苏病毒 E基因沙门菌鞭毛嵌合表达

RpoN和RpoS参与细菌鞭毛合成与趋化调控的研究进展

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江苏农业科学 2013年第12期41卷 11-16页

作者：刘晓东吴港杨智敏燕永亮林敏张云华安徽农业大学生命科学学院安徽合肥230036 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

在自然界中,细菌需要靠趋化运动来趋利避害以获得有利的生存环境。鞭毛作为细菌的运动器官,是趋化的前提与基础,鞭毛的合成组装是一个高度有序、耗能的等级调控过程,每一等级的基因表达都需要多个调控因子参与。RpoN对鞭毛合成基因的表... 详细信息

在自然界中,细菌需要靠趋化运动来趋利避害以获得有利的生存环境。鞭毛作为细菌的运动器官,是趋化的前提与基础,鞭毛的合成组装是一个高度有序、耗能的等级调控过程,每一等级的基因表达都需要多个调控因子参与。RpoN对鞭毛合成基因的表达为正调控,鞭毛调节子FleQ作为RpoN的激活增强子,与RpoN协同调控了鞭毛基因的转录与表达,相反,RpoS负调控包括鞭毛调控σ因子FliA在内的鞭毛合成基因的转录与表达,且rpoS基因的缺失导致鞭毛合成相关基因的转录水平显著上调。RpoS能够负调控诸多鞭毛基因的表达可能是通过调控鞭毛主调节子FleQ或鞭毛调控σ因子FliA来实现的;亦可能是由于RpoS和其他的σ因子竞争有限的核心聚合酶造成的。本文综述了细菌的鞭毛合成与趋化中不同σ因子之间存在复杂的交叉调控。

关键词： RpoN RpoS 鞭毛趋化调控

一株肠炎沙门氏菌鞭毛基因FliC的克隆及生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2018年第12期45卷 3379-3386页

作者：程相朝田文静张梦珂毛福超廖成水洛阳职业技术学院洛阳471099 洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室洛阳471023

本研究旨在对肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)鞭毛蛋白FliC基因进行克隆,并对所获序列进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中肠炎沙门氏菌FliC基因序列设计1对引物,利用PCR克隆获得FliC基因,将其插入到克... 详细信息

本研究旨在对肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)鞭毛蛋白FliC基因进行克隆,并对所获序列进行生物信息学分析。提取该菌基因组DNA作为模板,参考GenBank中肠炎沙门氏菌FliC基因序列设计1对引物,利用PCR克隆获得FliC基因,将其插入到克隆载体中进行测序,应用生物信息学软件分析该基因的核苷酸和氨基酸序列,利用BLAST进行同源性比对,并构建系统进化树,同时对该基因编码蛋白的理化性质、亲水性、信号肽、跨膜结构域、糖基化位点和B细胞抗原表位、二级结构、三级结构等进行分析。结果显示,试验成功克隆了1 518bp的目的基因,编码505个氨基酸。同源性比对发现,FliC基因相对保守,与大肠杆菌属有较高的同源性。该蛋白的化学分子式为C2254H3701N657O803S4,理论分子质量为52.981ku,理论等电点为4.91;不稳定指数为16.86,是稳定存在的亲水蛋白质。结构分析结果显示,该蛋白没有信号肽或跨膜结构域,但具有8个N-糖基化位点、13个O-糖基化位点和60个磷酸化位点,同时还含有26个B细胞线性结合位点和5个T细胞结合位点。二级结构分析显示,α-螺旋、β-转角、延伸链和无规卷曲分别占43.76%、3.76%、20.99%和31.49%。本试验成功克隆了肠炎沙门氏菌鞭毛基因FliC,并对其序列结构进行了分析,为进一步研究鞭毛在肠炎沙门致病过程中的作用及基因工程疫苗的研制提供理论依据。

关键词：肠炎沙门氏菌鞭毛 FliC基因生物信息学分析

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幽门螺旋杆菌疫苗研发研究进展

细胞与分子免疫学杂志 2023年第6期39卷 564-570页

作者：张颖李可心毕艳娜李晓亚单保恩胡代伦赵连梅河北医科大学第四医院科研中心河北石家庄050000 河北医科大学病原生物学教研室河北石家庄050000

幽门螺杆菌(Hp)是引起胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等消化道疾病的主要致病菌,已经被世界卫生组织(WHO)列为Ⅰ类致癌因子。目前临床上主要使用抗生素和质子泵抑制剂联合治疗Hp,但随着Hp耐药性的逐年增加,Hp疫苗可能成为根除Hp的最终解决... 详细信息

幽门螺杆菌(Hp)是引起胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等消化道疾病的主要致病菌,已经被世界卫生组织(WHO)列为Ⅰ类致癌因子。目前临床上主要使用抗生素和质子泵抑制剂联合治疗Hp,但随着Hp耐药性的逐年增加,Hp疫苗可能成为根除Hp的最终解决办法。尿素酶、毒力因子、外膜蛋白和鞭毛等成分在Hp感染、定殖和繁殖过程中发挥重要的作用,也成为Hp疫苗开发中潜在的候选抗原,以这些抗原为基础设计的疫苗在动物模型上取得了阶段性研究成果。我们总结了Hp疫苗的研究现状,以期为相关研究提供参考。

关键词：幽门螺杆菌(Hp) 尿素酶毒力因子鞭毛外膜蛋白疫苗综述

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空肠弯曲菌鞭毛与主要外膜蛋白的提取与纯化

中华微生物学和免疫学杂志 1989年第6期9卷 376-377页

作者：孙自捷宋后燕上海医科大学儿科医院基础部生化教研室

用乳过氧化物酶特异标记空肠弯曲菌表面膜蛋白，经电泳和放射自显影技术可显示分子量为30，43，67，94kd蛋白带。用诱变剂亚硝基胍（N-methyl-N′-nitro-N-nitro-soguanidine）可使空肠弯曲菌动力株变为无动力株，在SDS-PAGE上67kd鞭毛... 详细信息

用乳过氧化物酶特异标记空肠弯曲菌表面膜蛋白，经电泳和放射自显影技术可显示分子量为30，43，67，94kd蛋白带。用诱变剂亚硝基胍（N-methyl-N′-nitro-N-nitro-soguanidine）可使空肠弯曲菌动力株变为无动力株，在SDS-PAGE上67kd鞭毛蛋白带消失。使用超离心和酸凝集等技术，纯化了43kd和67kd组份，免疫家兔制备出抗空肠弯曲菌主要外膜蛋白及鞭毛蛋白的特异IgG.

关键词：空肠弯曲菌鞭毛乳对氧化物酶