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通用dna探针放大分析系统快速检测靶dna

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国外医学（临床生物化学与检验学分册） 1991年第2期12卷 77-78页

作者： Urdea MS 廖国祥

本文介绍了一种非同位素标记的通用dna 探针放大检测系统快速鉴定微生物的方法,完成整个检测过程只需4小时。作者用此方法鉴定了引性起传播疾病的几种微生物及其抗药性基因。此法具有特异、敏感等优点,是临床实验室中早期、快速、准确... 详细信息

本文介绍了一种非同位素标记的通用dna 探针放大检测系统快速鉴定微生物的方法,完成整个检测过程只需4小时。作者用此方法鉴定了引性起传播疾病的几种微生物及其抗药性基因。此法具有特异、敏感等优点,是临床实验室中早期、快速、准确诊断微生物感染的又一新的、有效的诊断工具。

关键词：靶dna dna探针检测

基于RAFT聚合信号放大策略的高灵敏电化学传感研究

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基于RAFT聚合信号放大策略的高灵敏电化学传感研究

作者：苏洛锋广州大学

学位级别：硕士

常规的电化学生物传感器无法满足含量极低的生物分子高灵敏和高选择性的检测,因此,在本文中,我们采用具有高亲和力以及高特异性的识别肽、肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)和适体(aptamer)作为生物识别元件,同时结合可逆加成-断裂链转... 详细信息

常规的电化学生物传感器无法满足含量极低的生物分子高灵敏和高选择性的检测,因此,在本文中,我们采用具有高亲和力以及高特异性的识别肽、肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)和适体(aptamer)作为生物识别元件,同时结合可逆加成-断裂链转移(reversible addition-fragmentation chain transfer,RAFT)聚合作为一种新颖的信号放大策略,用于显著提升检测的灵敏度,从而建立一种高效的电化学生物传感器用于高灵敏、高选择性地检测生物分子(凝血酶、靶dna和蛋白激酶)的含量。实验结果表明,基于RAFT聚合信号放大策略的电化学传感器能实现对特定生物分子的高灵敏、高选择性的定量检测。论文的主体研究工作分为以下三个部分:(1)核酸的超灵敏检测,对于疾病早期诊断、传染病控制以及疫情监测等具有十分重要的意义。在本部分工作,我们使用PNA捕获探针作为生物识别元件,借助于辅酶(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)介导的eRAFT(NAD-eRAFT)聚合的信号放大作用,构建了一种电化学传感器,用于靶dna的高灵敏和高选择性检测。由于NAD-eRAFT聚合信号放大方法只需两步,即:1)将RAFT试剂连接到靶dna上;2)进行NAD-eRAFT聚合,因此该方法具有高效和操作简单等优点。在最优条件下,该方法在可用于0.1 fM～0.1 nM的范围内靶dna浓度的定量分析(相关系数R=0.996),检测限为0.067 fM(S/N=3)。此外,该传感器可区分单个碱基错配,并适用于复杂血清基质中的dna检测,因此在超低浓度靶dna序列特异性检测方面具有巨大潜力。(2)在疾病的诊断和新药的研发中,超灵敏的蛋白激酶活性检测具有十分重要的意义。在本部分工作,我们提出了一种生物学介导的RAFT聚合(biologically mediated RAFT polymerization,BMRP)的信号放大策略,并将其应用于超灵敏的蛋白激酶活性电化学检测,以实现信号的放大。在最优条件下,该方法在可用于25 mU/mL～175 mU/mL的范围内蛋白激酶A活性的定量分析(相关系数R=0.998),检测限为1.85 mU/mL(S/N=3)。此外,该传感器能够用于血清样品中激酶活性的检测以及激酶抑制剂的筛选。凭借其成本低廉、高灵敏度和高选择性以及操作简单等优点,该传感器在医学诊断和药物筛选方面具有巨大的应用潜力。(3)由于凝血酶的异常表达与各种病理状况密切相关,因此凝血酶的临床检测对疾病诊断具有重要意义。在本部分工作中,我借助靶向-协同生物学介导的RAFT聚合(target-synergized BMRP,tsBMRP)的信号放大作用,提出了一种操作简单且成本低廉的凝血酶电化学适体传感器。该方法借助于硼酸盐亲和力交联反应,将含有苯硼酸基团的RAFT试剂标记到凝血酶的寡糖链上的顺式二醇基团,然后以甲基丙烯酸二茂铁基甲酯(ferrocenylmethyl methacrylate,FcMMA)为单体,通过tsBMRP反应在电极表面原位合成二茂铁基聚合物。该方法可以使标记有RAFT试剂的位点均能连接上大量的二茂铁探针,从而显著提高检测的灵敏度。在最优条件下,该方法可用于0.05 pM至100 pM的范围内凝血酶浓度的定量分析(相关系数R=0.998),检测限为35.3 fM(S/N=3);同时具有较高选择性,并适用于血清样品中的凝血酶检测。基于tsBMRP信号放大策略的电化学凝血酶适体传感器具有成本低廉、高灵敏度和高选择性以及操作简单等优点。

关键词： RAFT聚合电化学传感器蛋白激酶靶dna 凝血酶

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dna印迹试验

安徽医科大学学报 2005年第2期40卷 194-196页

作者：汪渊左艳左莉刘虎张素梅熊江霞卜丽佳周青桂淑玉安徽医科大学分子生物学中心实验室和生物化学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学第一附属医院肿瘤科安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022

dna印迹是一种将电泳分离的dna片段转移到固相支持物上用探针与靶dna进行杂交的技术,又称Southern杂交.利用一种或多种限制内切酶酶切消化的基因组dna[1],或经PCR获得扩增片段,经琼脂糖凝胶电泳,所得的dna片段按分子大小分离,dna片段经... 详细信息

dna印迹是一种将电泳分离的dna片段转移到固相支持物上用探针与靶dna进行杂交的技术,又称Southern杂交.利用一种或多种限制内切酶酶切消化的基因组dna[1],或经PCR获得扩增片段,经琼脂糖凝胶电泳,所得的dna片段按分子大小分离,dna片段经琼脂糖凝胶、变性,并将凝胶中的单链dna片段转移到固相支持物上(多为硝酸纤维素膜,NC或尼龙膜),用放射性核素标记或非放射性核素(如地高辛)标记的探针与交联于NC膜上的dna杂交,杂交斑点对X线底片曝光产生放射自显影图像或显色,有互补序列的dna可通过形成特异的探针-靶序列复合物使靶序列可见.

关键词：印迹试验 Southem杂交 dna片段琼脂糖凝胶电泳固相支持物基因组dna 硝酸纤维素膜 dna印迹限制内切酶靶dna 电泳分离扩增片段分子大小 PCR 尼龙膜转移

黑曲霉T21 glaA 5’上游调控区的两个蛋白结合因子及其靶序列

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自然科学进展 2002年第1期12卷 41-44页

作者：仇润祥刘丽朱兴国唐国敏中国科学院微生物研究所北京100080

采用凝胶阻滞法从糖化酶高产株黑曲霉(Aspergillus niger)T21部分纯化的蛋白提取液中检测到与糖化酶基因(glaA)5＇cis调控区特异结合的两个蛋白因子,其一的靶dna定位在glaA翻译起始点(ATG)上游-580～-509及-318～-254bp两个区域,另一蛋... 详细信息

采用凝胶阻滞法从糖化酶高产株黑曲霉(Aspergillus niger)T21部分纯化的蛋白提取液中检测到与糖化酶基因(glaA)5＇cis调控区特异结合的两个蛋白因子,其一的靶dna定位在glaA翻译起始点(ATG)上游-580～-509及-318～-254bp两个区域,另一蛋白因子的靶dna定位在-809～-580区域.-580～-509序列含有“TATA”的重复结构,-318～-254序列富含“GC”以及-809～-580序列含有CCAAT的特点暗示此3片段及其所结合的蛋白因子在A.niger T21 glaA的表达调控中可能有重要作用.

关键词： T21 glaA 5′上游调控区蛋白结合因子靶序列黑曲霉糖化酶基因凝胶阻带法靶dna 反式调控

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实时荧光PCR研究新进展

世界华人消化杂志 2005年第5期13卷 596-599页

作者：施林祥李东辉厦门大学医学院抗癌研究中心福建省厦门市361005

实时荧光PCR技术自问世以来,以其高特异性,高灵敏性,可定量,无污染,而得到了广泛的应用.该技术是根据荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)原理,设计相应的荧光标记核酸探针,通过PCR反应对相应靶dna进行均相... 详细信息

实时荧光PCR技术自问世以来,以其高特异性,高灵敏性,可定量,无污染,而得到了广泛的应用.该技术是根据荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)原理,设计相应的荧光标记核酸探针,通过PCR反应对相应靶dna进行均相定性定量测定的技术.根据检测中所使用的荧光探针分类, 目前已经开发出TaqMan,Molecular Beacon, Scorpion,LightCycler,Single—labeled probe, ResonSense,Angler以及双链探针等相关技术.本文对该技术的研究进展作一综述.

关键词：研究新进展实时 Molecular 荧光共振能量转移荧光PCR技术定性定量测定 TaqMan Single 高特异性核酸探针荧光标记荧光探针靶dna 相关技术双链探针灵敏性

dna纳米荧光探针的研制及其在肿瘤细胞和基因检测中的应用

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DNA纳米荧光探针的研制及其在肿瘤细胞和基因检测中的应用

作者：张如敏青岛科技大学

学位级别：硕士

随着生存环境的不断恶化，肿瘤已经成为威胁人类健康的最大杀手之一。现代肿瘤学认为恶性肿瘤是一种全身性的疾病。有关肿瘤细胞早期检测和诊断方法的研究已经成为近年来的研究热点。本论文研制了两种新型dna纳米荧光探针，分别应用于... 详细信息

随着生存环境的不断恶化，肿瘤已经成为威胁人类健康的最大杀手之一。现代肿瘤学认为恶性肿瘤是一种全身性的疾病。有关肿瘤细胞早期检测和诊断方法的研究已经成为近年来的研究热点。本论文研制了两种新型dna纳米荧光探针，分别应用于肿瘤细胞的高分辨荧光检测和特定dna的可视化检测;另外研制了一种以金纳米笼为核心，功能化dna纳米材料为外壳的新型多功能纳米胶囊，并成功实现了抗肿瘤药物的靶向投送和肿瘤细胞的识别检测，取得了较为理想的结果。本论文主要研究内容如下： 1．成功研制了一种以聚苯乙烯微球为载体，功能化dna纳米线/CdTe荧光量子点为外膜的复合型荧光纳米探针，该探针具有极高的荧光强度，以之为基础建立了dna荧光传感器，实现了靶dna的可视化检测，利用荧光显微照相肉眼可分辨出50fM的靶dna的存在，选择性实验表明该方法具有良好的选择性。 2．在上述复合型荧光纳米探针荧光纳米粒子探针的基础上加以改良，以用于体外肿瘤细胞的荧光成像。本文以Ramos细胞作为模型。由于聚苯乙烯微球的高负载能力，该探针比普通适体dna标记CdTe量子点探针表现出更好的荧光性能。Ramos细胞适体序列的运用，使得该探针有良好的特异性识别能力，可在混合细胞样品中快速准确的区分出靶细胞。这一实验对肿瘤细胞的早期检测和诊断提供了理论基础。 3．研制了一种新型纳米胶囊，以金纳米笼为核心，内部装载抗癌药物盐酸阿霉素(DOX)，功能化的dna纳米材料为外壳并封锁笼口，dna纳米材料上有荧光素和适体化学修饰，这一纳米胶囊集细胞检测、药物投送等功能于一体，在荧光显微镜下可识别并检测出靶细胞(本文是Ramos细胞)，同时纳米胶囊释放出药物并作用于靶细胞，使得靶细胞死亡，达到药物投送的目的。本文纳米胶囊药物投送进行了初步检测，取得较为良好的成果，对于靶细胞的药物跟踪、作用机制还需进一步研究。这一成果对肿瘤细胞的早期治疗有所帮助。

关键词： CdTe量子点适体肿瘤细胞靶dna 金纳米笼纳米胶囊

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植物染色体原位杂交技术的发展

贵州农业科学 2007年第4期35卷 130-134页

作者：范燕陈庆富贵州师范大学生物技术与工程学院植物遗传育种研究所贵州贵阳550001

染色体原位杂交技术是现代生物技术的重要组成部分。它具有直接、准确、便捷等特点,在生物科学研究中发挥着重要的作用。随着分子生物学的进步,染色体原位杂交技术不断改进和完善,新的染色体原位杂交技术不断涌现。本文对染色体原位杂... 详细信息

染色体原位杂交技术是现代生物技术的重要组成部分。它具有直接、准确、便捷等特点,在生物科学研究中发挥着重要的作用。随着分子生物学的进步,染色体原位杂交技术不断改进和完善,新的染色体原位杂交技术不断涌现。本文对染色体原位杂交探针、染色体原位杂交靶dna类型、染色体原位杂交新技术及应用等方面进行了综述。

关键词：染色体原位杂交探针靶dna

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化学发光技术在核酸分子杂交中的应用

现代临床医学 1995年第2期26卷 65-68页

作者：刘晓宇中国医学科学院输血研究所

化学发光的发现历史悠久,但把化学发光技术与核酸分子杂交结合起来,建立化学发光核酸分子杂交技术却是近几年的事。1983年Heller和Schneider首先将化学发光技术引入了核酸的分析,这是继建立发光免疫技术之后,化学发光技术应用的又一个... 详细信息

化学发光的发现历史悠久,但把化学发光技术与核酸分子杂交结合起来,建立化学发光核酸分子杂交技术却是近几年的事。1983年Heller和Schneider首先将化学发光技术引入了核酸的分析,这是继建立发光免疫技术之后,化学发光技术应用的又一个新的领域。目前,有关这方面的报道还不多,本文试就化学发光核酸分子杂交技术及有关的应用作一简要的介绍。

关键词：化学发光反应化学发光技术核酸分子杂交核酸杂交分析 dna探针核酸杂交技术化学发光体系自显影标示物靶dna

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生物芯片技术在临床病原菌检测中的新进展

中国实验诊断学 2006年第3期10卷 325-328页

作者：刘毅韩金祥国家卫生部生物技术药物重点实验室山东省医药生物技术研究中心山东济南250062

生物芯片(Biochip)又称微阵列(Microarray)技术,是近年来生命科学与微电子学等学科相互交叉发展起来的一门高新技犬,是随着人类基因组计划(HGP)的研究发展应运而生.根据芯片上的探针不同,可分为蛋白芯片和基因芯片,如果芯片上固定的分... 详细信息

生物芯片(Biochip)又称微阵列(Microarray)技术,是近年来生命科学与微电子学等学科相互交叉发展起来的一门高新技犬,是随着人类基因组计划(HGP)的研究发展应运而生.根据芯片上的探针不同,可分为蛋白芯片和基因芯片,如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或靶dna,称为基因芯片,如果芯片上固定的是肽或蛋白,则称为肽芯片或蛋白芯片.目前生物芯片技术在临床病原菌、毒力基因、抗药性基因、致病因子的快速检测等方面已取得了突破性进展,显示出诱人的应用前景.

关键词：生物芯片技术病原菌检测临床人类基因组计划寡核苷酸探针蛋白芯片基因芯片生命科学靶dna 毒力基因