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安徽省稻田千金子对氰氟草酯和噁唑酰草胺的抗性及其靶标分子机制

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植物保护学报 2023年第4期50卷 1089-1095页

作者：韩云静孟紫为武健张勇周凤艳安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所合肥230031

为明确安徽省稻田杂草千金子Leptochloa chinensis对氰氟草酯和噁唑酰草胺的抗性,从安徽省12个市38个县(市、区)稻区千金子发生较严重的田块中共采集72个千金子种群,采用整株生物测定法检测其对氰氟草酯和噁唑酰草胺的抗性,筛选同时对... 详细信息

为明确安徽省稻田杂草千金子Leptochloa chinensis对氰氟草酯和噁唑酰草胺的抗性,从安徽省12个市38个县(市、区)稻区千金子发生较严重的田块中共采集72个千金子种群,采用整株生物测定法检测其对氰氟草酯和噁唑酰草胺的抗性,筛选同时对噁唑酰草胺和氰氟草酯有疑似抗性的千金子种群并测定其对这2种药剂的抗性水平,同时利用分子生物学技术检测千金子高抗种群的乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACCase)基因是否发生抗性位点氨基酸突变。结果显示,在72个千金子种群中,13个千金子种群已对氰氟草酯产生抗性,5个千金子种群已对噁唑酰草胺产生抗性;AH-1、AH-3、AH-7、AH-34和AH-72这5个千金子种群同时高抗氰氟草酯和噁唑酰草胺,其中对氰氟草酯的抗性指数介于21.98~65.52之间,对噁唑酰草胺的抗性指数介于11.76~27.19之间;这5个种群的ACCase基因片段均在2027位点发生氨基酸突变,色氨酸突变为半胱氨酸;此外AH-3和AH-72这2个种群在1999位点也由色氨酸突变为半胱氨酸,表明安徽省千金子已经对氰氟草酯和噁唑酰草胺产生交互抗性,且ACCase基因突变可能是产生抗性的主要原因。

关键词：千金子氰氟草酯噁唑酰草胺抗性突变位点靶标抗性

玉米田反枝苋对烟嘧磺隆的抗性水平及靶标抗性分子机理

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农药学学报 2018年第5期20卷 595-600页

作者：葛鲁安王豪赵宁张乐乐刘伟堂王金信山东农业大学植物保护学院

为明确玉米田主要杂草反枝苋对烟嘧磺隆的抗性水平及靶标抗性分子机理,采用整株水平测定法检测了黑龙江省玉米田反枝苋对烟嘧磺隆的抗性水平,通过靶标酶离体活性测定,分析了抗性和敏感种群反枝苋乙酰乳酸合成酶（ALS）对烟嘧磺隆的敏感... 详细信息

为明确玉米田主要杂草反枝苋对烟嘧磺隆的抗性水平及靶标抗性分子机理,采用整株水平测定法检测了黑龙江省玉米田反枝苋对烟嘧磺隆的抗性水平,通过靶标酶离体活性测定,分析了抗性和敏感种群反枝苋乙酰乳酸合成酶（ALS）对烟嘧磺隆的敏感性,并通过靶标ALS基因克隆测序进行了序列比对分析。结果显示：黑龙江省反枝苋疑似抗性种群（HLJ-R）对烟嘧磺隆已产生较高水平抗性,其抗性倍数达13.7;酶活性测定结果表明：烟嘧磺隆对HLJR种群ALS活性的抑制中浓度（IC50）值是对敏感种群（TA-S） IC50值的43.9倍;与TA-S种群相比,HLJ-R种群ALS基因205位丙氨酸突变为缬氨酸,574位色氨酸突变为亮氨酸。研究表明,黑龙江省玉米田反枝苋对烟嘧磺隆已产生较高水平抗性,且靶标ALS基因的突变可能是其抗性产生的主要原因之一。

关键词：玉米反枝苋烟嘧磺隆抗药性靶标抗性乙酰乳酸合成酶基因突变

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看麦娘对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测

农药学学报 2018年第2期20卷 178-184页

作者：郭文磊白霜池艳艳冯莉王金信山东农业大学植物保护学院山东泰安271018 广东省农业科学院植物保护研究所/广东省植物保护新技术重点实验室广州510640

甲基二磺隆是防除小麦田看麦娘Alopecurus aequalis等禾本科杂草的主要除草剂品种之一,但目前中国山东、江苏及安徽等地已有部分看麦娘种群对其产生了抗性。ALS基因197位点突变是看麦娘对甲基二磺隆产生抗性的重要机理,根据突变型和野... 详细信息

甲基二磺隆是防除小麦田看麦娘Alopecurus aequalis等禾本科杂草的主要除草剂品种之一,但目前中国山东、江苏及安徽等地已有部分看麦娘种群对其产生了抗性。ALS基因197位点突变是看麦娘对甲基二磺隆产生抗性的重要机理,根据突变型和野生型看麦娘在197位点处碱基序列的不同,本研究设计出了一种衍生性酶切扩增多态性序列（d CAPS）分子标记方法,可用于197位点突变的快速检测。通过在引物D197F序列的3′端引入一个错配碱基,扩增所得不同种群看麦娘的ALS片段经限制性内切酶Bam H I酶切后表现出多态性：野生敏感型分别产生了200和36 bp的2个条带;纯合突变型因无法被切开,只有236 bp的一个条带;而杂合突变型则同时产生了上述3个条带。该d CAPS检测结果准确、可靠,与经典的整株水平测定结果一致,并且可同时检测197位点上任一形式的突变。研究结果可为看麦娘等禾本科杂草对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测提供理论依据。

关键词：看麦娘甲基二磺隆靶标抗性 ALS基因突变 dCAPS

两种转Bt基因水稻品系在浙江田间的靶标抗性及其非靶标影响

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浙江农业学报 2013年第6期25卷 1304-1308页

作者：韩海亮杨亚军包斐王桂跃谭禾平吕仲贤浙江省农业科学院东阳玉米研究所浙江东阳322100 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所浙江杭州310020

研究了浙江田间转cry1C基因水稻T1c-19和转cry2A基因水稻T2A-1对靶标害虫二化螟和稻纵卷叶螟的抗性及对主要非靶标生物的影响。结果表明,与非转基因亲本对照明恢63相比,这两种转Bt基因水稻在整个生育期对稻纵卷叶螟、二化螟都具有极强... 详细信息

研究了浙江田间转cry1C基因水稻T1c-19和转cry2A基因水稻T2A-1对靶标害虫二化螟和稻纵卷叶螟的抗性及对主要非靶标生物的影响。结果表明,与非转基因亲本对照明恢63相比,这两种转Bt基因水稻在整个生育期对稻纵卷叶螟、二化螟都具有极强的抗性,稻纵卷叶螟卷叶率减少98%以上,二化螟枯心/白穗率减少87%以上;而对非靶标害虫稻飞虱以及稻田主要捕食性天敌蜘蛛和黑肩绿盲蝽数量均无显著性影响。

关键词：转Bt基因水稻节肢动物靶标抗性非靶标浙江田间

二化螟越冬种群特点及其对三唑磷靶标抗性突变频率分析

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中国水稻科学 2012年第4期26卷 481-486页

作者：罗光华张志春韩光杰韩召军方继朝江苏省农业科学院植物保护研究所江苏南京210014 南京农业大学植物保护学院教育部农作物病虫害综合管理重点实验室江苏南京210095

调查分析了我国长江流域以及南方稻区20个地区的二化螟越冬代种群的龄期结构、个体体质量及其对三唑磷的靶标抗性突变频率。结果表明,在20个采集地中有18个以6龄幼虫所占比例最高,其中,广东广宁和安徽桐城均达到80%以上;在所有的采集地... 详细信息

调查分析了我国长江流域以及南方稻区20个地区的二化螟越冬代种群的龄期结构、个体体质量及其对三唑磷的靶标抗性突变频率。结果表明,在20个采集地中有18个以6龄幼虫所占比例最高,其中,广东广宁和安徽桐城均达到80%以上;在所有的采集地中,4龄、5龄和6龄个体的总数在整个采集样本中占的百分率均达90%以上,表明我国长江流域以及南方稻区二化螟种群均以高龄幼虫越冬。二化螟对三唑磷的靶标抗性突变频率检测结果显示,不同地区二化螟种群的靶标抗性基因突变频率存在很大差异,其中,处于我国二化螟主发生区的浙江(100%、31.3%)、福建(77.1%、66.7%)、江西(68.8%、43.8%)、湖南(35.4%、33.3%)以及接近二化螟主发生区的广西阳朔(72.9%)和广东广宁(33.3%)的突变频率较高;其他地区抗性突变频率较低(抗性突变。

关键词：二化螟越冬代种群三唑磷靶标抗性突变频率

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靶标抗性点突变基因型检测技术

农药学学报 2005年第3期7卷 193-200页

作者：尚金燕唐振华张传溪浙江大学应用昆虫学研究所浙江杭州310029 中国科学院上海植物生理生态研究所上海200032

杀虫剂的不合理使用导致害虫的抗药性日趋严重。抗药性是一种涉及一个或几个昆虫基因的遗传特征。靶标抗性通常与点突变相关,对抗性相关的点突变的快速检测诊断是抗性治理的基础之一。评述了5种基因型检测技术———单链构象多态性、固... 详细信息

杀虫剂的不合理使用导致害虫的抗药性日趋严重。抗药性是一种涉及一个或几个昆虫基因的遗传特征。靶标抗性通常与点突变相关,对抗性相关的点突变的快速检测诊断是抗性治理的基础之一。评述了5种基因型检测技术———单链构象多态性、固相微型测序、双向等位特异PCR扩增、实时荧光定量PCR和焦磷酸测序的优缺点及其在突变检测中的应用。

关键词：靶标抗性点突变基因型检测技术

异型莎草（Cyperus difformis）对乙酰羟酸合酶抑制剂的抗性及靶标机制

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异型莎草（Cyperus difformis）对乙酰羟酸合酶抑制剂的抗性及靶...

作者：李政中国农业科学院

学位级别：硕士

异型莎草(Cyperus difformis L.)是莎草科(Cyperaceae)莎草属(Cyperus)一年生杂草,分布在我国东北、华北、华中、华东、宁夏、甘肃等,主要危害水稻生产。AHAS抑制剂可以有效防除稻田异型莎草,但因其作用位点单一,连续多年使用,导致严重... 详细信息

异型莎草(Cyperus difformis L.)是莎草科(Cyperaceae)莎草属(Cyperus)一年生杂草,分布在我国东北、华北、华中、华东、宁夏、甘肃等,主要危害水稻生产。AHAS抑制剂可以有效防除稻田异型莎草,但因其作用位点单一,连续多年使用,导致严重的抗药性问题。本研究以采自湖北、湖南、江西、江苏、安徽、辽宁和黑龙江共7个省水稻田的38个异型莎草种群为研究对象,采用单剂量甄别法初步明确了这38个异型莎草种群对吡嘧磺隆的抗性;克隆异型莎草AHAS全长,并比对分析了不同抗药性种群AHAS突变位点;在此基础上,提取和比较了不同突变类型AHAS在离体条件下对4类AHAS抑制剂的敏感性差异;并通过整株生物测定明确了不同突变生物型对4类AHAS抑制剂的抗性水平差异。主要研究结果如下:(1)通过吡嘧磺隆单剂量甄别法测定异型莎草抗药性情况,结果显示,采自7个省的38个异型莎草种群中,采自湖南、江苏、江西和安徽4个省的16个种群在30 g a.***.ha吡嘧磺隆推荐剂量处理下有植株存活,存活率在25%-100%,初步确定了这些种群已对吡嘧磺隆产生抗性。(2)通过染色体步移等技术克隆异型莎草AHAS全序列,结果显示,AHAS全序列包括2个外显子和1个内含子,内含子在2个外显子之间,两段外显子长度分别为498bp和1428bp,内含子长度为1228-1233bp。(3)设计三对引物扩增AHAS基因与抗药性有关的八个突变位点,比较抗药性与敏感种群保守区位点的差异。结果显示,与敏感种群相比,16个抗药性种群AHAS保守区域均有突变发生,突变类型分别为197位脯氨酸(Pro)突变为精氨酸(Arg)、丝氨酸(Ser)、亮氨酸(Leu),376位天冬氨酸(Asp)突变为谷氨酸(Glu),574位色氨酸(Trp)突变为亮氨酸(Leu);在同一种群的不同植株中存在多种突变类型,如种群YX12-14中包括Pro-197-Arg和Asp-376-Glu突变类型,YX12-15中包括Pro-197-Arg和Trp-574-Leu突变类型,YX15-22中包括Pro-197-Arg、Ser、Leu突变类型,YX15-32中包括Pro-197-Ser和Trp-574-Leu突变类型。(4)通过提取不同突变类型的AHAS,检测其在离体条件下对4类AHAS抑制剂的敏感性差异。结果表明,在4类AHAS抑制剂吡嘧磺隆、五氟磺草胺、甲咪唑烟酸和双草醚处理下,敏感种群YX15-30的I值分别为0.06、0.01、3.29和0.04μM,与敏感种群相比,YX12-10(Asp-376-Glu)抗性倍数分别为91.6、34.0、4.3和8.0,YX15-22(Pro-197-Arg、Ser、Leu)的抗性倍数分别为310.0、10.0、1.2和1.3,YX15-38(Trp-574-Leu)的抗性倍数分别为4462.0、831.0、260.7和52.3。(5)通过整株生物测定法检测不同突变种群对AHAS抑制剂的交互抗性水平,结果表明,在4类AHAS抑制剂吡嘧磺隆、五氟磺草胺、甲咪唑烟酸和双草醚处理下,敏感种群YX15-30的GR值分别为1.10、3.10、3.31和6.53 g a.***.ha,抗药性种群YX12-10(Asp-376-Glu)的抗性倍数为328.3、16.3、6.6和5.8,YX15-22(Pro-197-Arg、Ser、Leu)的抗性倍数分别为827.4、6.6、1.0和1.0,YX15-38(Trp-574-Leu)的抗性倍数分别为3321.9、382.4、1293.8和154.3。综上所述,本研究首次克隆了异型莎草AHAS全序列,明确了抗药性种群中靶标基因的5种突变类型,通过靶标酶的检测,明确了靶标基因不同位点突变造成其对AHAS抑制剂的敏感性差异,明确了不同突变类型对AHAS抑制剂的交互抗性水平。

关键词：异型莎草 AHAS抑制剂靶标抗性交互抗性

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蚊虫两种靶标抗性机制的研究进展

寄生虫与医学昆虫学报 2014年第2期21卷 138-146页

作者：赵明惠李春晓赵彤言安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对蚊虫抗性机制的研究在其抗性监测和环境治理方面具有重要的意义。人们经过多年的研究发现，蚊虫对杀虫剂的抗性与其行为、生理功能的改变、解毒功能的增强以及靶标位点的不敏感性均有关系。随着分子生物学的发展，基因芯片技术的普及... 详细信息

对蚊虫抗性机制的研究在其抗性监测和环境治理方面具有重要的意义。人们经过多年的研究发现，蚊虫对杀虫剂的抗性与其行为、生理功能的改变、解毒功能的增强以及靶标位点的不敏感性均有关系。随着分子生物学的发展，基因芯片技术的普及和后基因组时代的到来，人们对蚊虫抗性形成和进化的研究已经从分子水平全面展开，已经发现并克隆出了一些与抗药性相关的靶标基因。本文将对与蚊虫抗性相关的钠离子通道和乙酰胆碱酯酶基因的研究现状作一综合介绍。

关键词：蚊虫靶标抗性钠离子通道乙酰胆碱酯酶

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家蝇和果蝇的靶标抗性研究进展

农药 2008年第11期47卷 785-789页

作者：孙晓琴袁建忠唐振华华东理工大学药学院上海200237 中国科学院上海生命科学院植物生理生态研究所上海200032

杀虫剂不合理的使用导致害虫抗药性日趋严重,害虫对各类杀虫剂产生抗性的一个重要机理是靶标抗性。就家蝇和果蝇两种典型昆虫的靶标抗性研究进展做一综述,其中包括:乙酰胆碱酯酶(AChE)、钠离子通道(SC)、烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)以及γ... 详细信息

杀虫剂不合理的使用导致害虫抗药性日趋严重,害虫对各类杀虫剂产生抗性的一个重要机理是靶标抗性。就家蝇和果蝇两种典型昆虫的靶标抗性研究进展做一综述,其中包括:乙酰胆碱酯酶(AChE)、钠离子通道(SC)、烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)以及γ-氨基丁酸受体(GABAR),分别从这4个靶标的基因突变与抗性的关系,对靶标抗性进行分析。这不但有助于害虫的抗性治理,而且还为基于抗性靶标设计的,并且不易产生抗性的杀虫剂提供理论依据。

关键词：家蝇果蝇靶标抗性乙酰胆碱酯酶钠离子通道烟碱乙酰胆碱受体 γ-氨基丁酸受体