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pDC315-SPA-mCLCA3载体的构建及其在气道上皮细胞系的靶向表达分析

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中国病理生理杂志 2011年第6期27卷 1240-1244页

作者：何丽梅丽马经平张惠兰张波熊维宁赵建平华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科卫生部重点呼吸病研究室湖北武汉430030 荆州市中心医院呼吸内科湖北荆州434020

目的:构建腺病毒穿梭质粒(pDC315)-肺表面活性蛋白A基因启动子(SPA)-小鼠钙激活氯通道3(mCLCA3)融合基因表达载体,分析其在气道上皮细胞系的靶向表达。方法:PCR法从PGL-SPA和pCR-Blunt Ⅱ-TOPO载体中克隆全长2 948 bp的SPA-mCLCA3基因... 详细信息

目的:构建腺病毒穿梭质粒(pDC315)-肺表面活性蛋白A基因启动子(SPA)-小鼠钙激活氯通道3(mCLCA3)融合基因表达载体,分析其在气道上皮细胞系的靶向表达。方法:PCR法从PGL-SPA和pCR-Blunt Ⅱ-TOPO载体中克隆全长2 948 bp的SPA-mCLCA3基因序列并将其亚克隆入pDC315-EGFP载体,构建pDC315-SPA-mCLCA3靶向表达载体。测序鉴定正确后分别转染气道上皮细胞系(H441细胞)和非气道上皮细胞系(HEK293细胞)。每种细胞分pDC315-EGFP组(EGFP阳性,mCLCA3阴性)和pDC315-SPA-mCLCA3组(mCLCA3阳性),分析mCLCA3在不同上皮细胞的表达水平。结果:测序结果证实成功构建含有气道上皮细胞特异性启动子SPA的mCLCA3重组质粒。靶向表达分析表明mCLCA3 mRNA在高表达SPA的H441细胞中表达显著高于其在HEK293细胞的表达(P表达阳性而pDC315-EGFP组表达阴性,HEK293细胞两种质粒转染组mCLCA3蛋白均阴性。结论:成功构建气道上皮细胞靶向表达mCLCA3基因的重组腺病毒穿梭载体pDC315-SPA-mCLCA3,为后续构建腺病毒靶向载体Ad-SPA-mCLCA3及研究mCLCA3在气道上皮缺陷中的作用提供实验基础。

关键词：肺表面活性物质相关蛋白A启动子 CLCA3蛋白,小鼠气道上皮细胞靶向表达

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靶向表达的逆转录病毒载体***的构建

现代消化病及内镜杂志 1998年第3期3卷 235-236页

作者：刘思德袁爱力赖卓胜张兰兰周殿元广州市南方医院消化科 510515

目的:构建出在肝细胞中具靶向表达潜能的逆转录 TK 基因载体。方法:用 p2335A-1中的一段2.0Kb的人白蛋白组织特异性转录调节序列(ALBTRS)取代 pSTK 中的 SV40启动子,所构建的载体命名为 ***。结果:载体 *** 的结构中,含有 ALBTRS 启动子... 详细信息

目的:构建出在肝细胞中具靶向表达潜能的逆转录 TK 基因载体。方法:用 p2335A-1中的一段2.0Kb的人白蛋白组织特异性转录调节序列(ALBTRS)取代 pSTK 中的 SV40启动子,所构建的载体命名为 ***。结果:载体 *** 的结构中,含有 ALBTRS 启动子,具有在肝细胞中特异表达白蛋白的潜能,载体经酶切鉴定表明结构符合要求。结论:成功地构建出具靶向表达潜能的逆转录载体 ***。

关键词：靶向表达逆转录病毒病毒载体LN ALBTRS TK 胸苷激酶基因逆转录载体

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靶向表达的逆转录病毒载体***的构建

现代消化病及内镜杂志 1998年第2期3卷 130-131页

作者：刘思德袁爱力赖卓胜张兰兰周殿元广州南方医院消化科 510515

目的构建出在肝细胞中具靶向表达潜能的逆转录TK基因载体。方法用p2335A-1中的一段2.0kb的人白蛋白组织特异性转录调节序列(ALBTRS)取代pSTK中的SV40启动子,所构建的载体命名为***。结果载体***的结构中,含有ALBTRS启动子,具有在表达白... 详细信息

目的构建出在肝细胞中具靶向表达潜能的逆转录TK基因载体。方法用p2335A-1中的一段2.0kb的人白蛋白组织特异性转录调节序列(ALBTRS)取代pSTK中的SV40启动子,所构建的载体命名为***。结果载体***的结构中,含有ALBTRS启动子,具有在表达白蛋白的肝细胞中特异表达的潜能,载体经酶切鉴定表明结构符合要求。结论成功地构建出具靶向表达潜能的逆转录载体***。

关键词：靶向表达逆转录病毒载体 LN.ALBTRS.TK 基因序列

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基因治疗中目的基因靶向表达的研究

生命的化学 1994年第5期14卷 8-10页

作者：王立群陈诗书郑仲承上海第二医科大学中国科学院上海生化研究所

基因治疗中目的基因靶向表达的研究王立群，陈诗书（上海第二医科大学，上海２０００２５）郑仲承（中国科学院上海生化研究所，上海２０００３１）关键词基因治疗，靶向表达基因治疗在近几年取得了许多进展。基因治疗并不单是治疗措施... 详细信息

基因治疗中目的基因靶向表达的研究王立群，陈诗书（上海第二医科大学，上海２０００２５）郑仲承（中国科学院上海生化研究所，上海２０００３１）关键词基因治疗，靶向表达基因治疗在近几年取得了许多进展。基因治疗并不单是治疗措施问题，其中有许多基础研究工作还有待...

关键词：基因治疗靶向表达

重组***腺病毒载体构建及对EBV阳性鼻咽癌C666-1细胞株的靶向表达

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数理医药学杂志 2011年第3期24卷 266-270页

作者：林峰苗北平卢永田深圳市第二人民医院深圳大学附属第一医院耳鼻咽喉科深圳518035

目的:构建腺病毒载体***,观察其对EBV阳性鼻咽癌C666-1细胞株的靶向表达。方法:采用p△EIsp1A穿梭质粒系统,酶切、定向克隆方法构建含HRP自杀基因的p△EIsp1A/oriP-HRP重组质粒,在293细胞中进行重组腺病毒***包装、扩增、纯化与病毒滴... 详细信息

目的:构建腺病毒载体***,观察其对EBV阳性鼻咽癌C666-1细胞株的靶向表达。方法:采用p△EIsp1A穿梭质粒系统,酶切、定向克隆方法构建含HRP自杀基因的p△EIsp1A/oriP-HRP重组质粒,在293细胞中进行重组腺病毒***包装、扩增、纯化与病毒滴度测定,体外转染EBV阳性鼻咽癌C666-1细胞株与EBV阴性鼻咽癌CNE-2Z细胞株,RT-PCR法检测不同细胞系中***的表达,Western blot法检测经不同浓度***转染后细胞中HRP蛋白的表达。结果:p△EIsp1A/oriP-HRP在293细胞中包装扩增后的病毒滴度为528@1012TCID50/L;体外转染鼻咽癌C666-1细胞株与CNE-2Z细胞株后,RT-PCR检测到C666-1细胞系1229bp处得明亮条带,而CNE-2Z细胞几乎未检测到重组基因mRNA的表达,Western blot可见随着MOI的增加C666-1细胞中HRP蛋白表达逐渐增多,而在CNE-2细胞中HRP蛋白的表达几乎呈阴性,两组间差别有统计学意义(P靶向性转染和表达。

关键词：腺病毒 HRP 鼻咽癌 EBV 靶向表达

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hTERT启动子介导自杀基因在肿瘤细胞中的靶向表达

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现代医药卫生 2007年第3期23卷 353-354页

作者：李军蔡绍皙杨应斌重庆大学生物工程学院重庆400044

肿瘤的基因治疗中，如何保证自杀基因只在特异性组织或细胞中表达而不在人正常组织细胞中表达是一个亟待解决的问题。与特异性组织来源的启动子如CEA启动子、AFP启动子、Tyr启动子等启动子相比，运用hTERT启动子能够驱动自杀基因在端粒... 详细信息

肿瘤的基因治疗中，如何保证自杀基因只在特异性组织或细胞中表达而不在人正常组织细胞中表达是一个亟待解决的问题。与特异性组织来源的启动子如CEA启动子、AFP启动子、Tyr启动子等启动子相比，运用hTERT启动子能够驱动自杀基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中靶向表达，更具广谱性，因此在肿瘤治疗中成为一个有广阔前景的新方法。

关键词： hTERT启动子肿瘤细胞自杀基因靶向表达介导 CEA启动子 AFP启动子组织细胞

TNFa在血管内皮细胞ECV304中的靶向表达研究

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分子科学学报 2001年第3期17卷 145-149页

作者：赵显玲黄百渠东北师范大学生命科学学院遗传与细胞研究所吉林长春130024

在缺失了 3’LTRU3 区内病毒的启动子 /增强子序列的逆转录病毒载体pLXSNd 中 ,用血管内皮生长因子受体KDR的特异性启动子调控了TNFa在血管内皮细胞ECV30 4中的靶向表达 .将构建的载体 pLXSN - TNFa ,pLXSNd-KDRp-TNFa和空载体 pLXSN用P... 详细信息

在缺失了 3’LTRU3 区内病毒的启动子 /增强子序列的逆转录病毒载体pLXSNd 中 ,用血管内皮生长因子受体KDR的特异性启动子调控了TNFa在血管内皮细胞ECV30 4中的靶向表达 .将构建的载体 pLXSN - TNFa ,pLXSNd-KDRp-TNFa和空载体 pLXSN用PA317细胞包装后获得重组病毒 ,并用重组病毒分别感染NIH3T3细胞和ECV30 4细胞 .培养物上清的ELISA结果证明 ,KDR启动子指导的TNFa在KDR阳性细胞ECV30 4中的表达量为在KDR阴性细胞NIH3T3中的表达量的 8倍 ;而LTR指导的TNFa在这两种细胞中的表达无明显差异 ,实现了TNFa在血管内皮细胞中的靶向表达 .

关键词： TNFa 靶向表达血管内皮细胞 ECV304 靶向基因治疗肿瘤坏死因子肿瘤逆转录病毒载体

KDR启动子驱动的TNFR逆转录病毒载体构建及其靶向表达

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军医进修学院学报 2002年第3期23卷 220-222页

作者：袁栎刘丽孙晓文王烨曹颖空军总医院空军临床分子生物学中心实验室北京100036

目的 :为进行TNFR的靶向基因治疗研究打基础。方法 :将人TNFR55和TNFR75基因序列分别与KDR启动子 (KDRp)及灭活自身启动子的逆转录病毒载体RV D2 99重组 ,构建RV D2 99 KDRp TNFR55及RV D2 99 KDRp TNFR75逆转录病毒载体 ,分别转染包装... 详细信息

目的 :为进行TNFR的靶向基因治疗研究打基础。方法 :将人TNFR55和TNFR75基因序列分别与KDR启动子 (KDRp)及灭活自身启动子的逆转录病毒载体RV D2 99重组 ,构建RV D2 99 KDRp TNFR55及RV D2 99 KDRp TNFR75逆转录病毒载体 ,分别转染包装细胞PA31 7,获得稳定的产病毒细胞系。结果 :获得的TN FR55和TNFR75产毒细胞系病毒滴度分别为 1× 1 0 5CFU ml和 2× 1 0 5CFU ml。感染RV D2 99 KDRP TNFR55病毒的ECV30 4细胞与TNF孵育后的培养上清 ,对L92 9细胞的细胞毒活性比相同条件下的NIH3T3细胞低约2 6倍 ,而感染RV TNFR55病毒的ECV 30 4与相同条件下的NIH3T3细胞无明显差异。结论 :建立了TNFR55和TNFR75逆转录病毒高产毒细胞系 ,构建的RV D2 99 KDRP TNFR55和RV D2 99 KDRP

关键词：载体构建靶向表达受体肿瘤坏死因子逆转录病毒启动区

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癌胚抗原启动子控制基因靶向表达研究

现代临床医学生物工程学杂志 2006年第6期12卷 484-487页

作者：邱源何建行李富骊刘启才陈汉章钟琰广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所胸外科 510120

目的构建由癌胚抗原(CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的重组表达质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP。了解CEA启动子靶向驱动的含目的基因的重组质粒的效率。方法构建重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP,以PCR,DNA测序及酶切进行鉴... 详细信息

目的构建由癌胚抗原(CEA)启动子控制报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达的重组表达质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP。了解CEA启动子靶向驱动的含目的基因的重组质粒的效率。方法构建重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP,以PCR,DNA测序及酶切进行鉴定。通过脂质体介导重组质粒CMVE-pCEA-IRES-EGFP体外分别转染A549细胞(CEA阳性)和16HBE(CEA阴性)细胞,进行绿色荧光蛋白检测分析基因表达的靶向性。结果CMVE-pCEA-IRES-EGFP分别用VSPⅠ,VSPⅠ/NheⅠ酶切后电泳分别出现大小约405bp,372bp和4110bp的片断,与预计各片断大小相符。以CMVE-pCEA-IRES-EGFP为模板PCR扩增得到CMV和CEA片段,分别连于T载体(pMD18-T)并测序,结果正确。嵌合启动子CMVE-pCEA能特异地驱动下游报告基因在CEA阳性肺癌细胞株绿色荧光表达阳性,而CEA阴性细胞株16HBE表达阴性。结论成功构建了嵌合启动子CMVE-pCEA驱动的CMVE-pCEA-IRES-EGFP重组质粒,并能在转染的CEA阳性细胞株中表达,为靶向启动双基因表达载体构件提供了实验依据。

关键词：癌胚抗原启动子肿瘤靶向表达巨细胞病毒增强子