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Anti-HER2-ScFv-GFP融合蛋白靶向结合体外乳腺癌细胞表面受体的研究

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中国细胞生物学学报 2011年第5期33卷 485-491页

作者：高国辉黄奇迪王金丹杨纪锋包兵兵胡孝渠温州医学院生命科学院浙江省医学遗传学重点实验室温州325035 温州医学院附属第一医院肿瘤外科温州325035

为了研究不同表达系统获得的携带绿色荧光抗HER2单链抗体(Anti-HER2-ScFv-GFP)是否既可靶向结合HER2阳性乳腺癌细胞表面,也可通过观察绿色荧光变化直接判断抗体结合乳腺癌细胞表面后细胞的动态变化,在前期成功构建两种表达系统的基础上... 详细信息

为了研究不同表达系统获得的携带绿色荧光抗HER2单链抗体(Anti-HER2-ScFv-GFP)是否既可靶向结合HER2阳性乳腺癌细胞表面,也可通过观察绿色荧光变化直接判断抗体结合乳腺癌细胞表面后细胞的动态变化,在前期成功构建两种表达系统的基础上,利用Ni^(2+)-NTA亲和层析法纯化来源于真核表达系统pFAST Bac to Bac HT A/Tn-5B1-4和原核表达系统pBAD His B/TOP10的融合蛋白Anti-HER2-ScFv-GFP,设置HER2阳性细胞SKBR3为实验组、HER2阴性细胞MCF7为对照组,分别与之混合24 h后,1×PBS洗脱细胞3次,激光共聚焦显微镜观察到两种不同表达系统获得的融合蛋白在HER2阳性细胞SKBR3表面分布均有绿色荧光,真核表达的蛋白结合效率明显高于原核表达的蛋白,SKBR3结合高浓度的融合蛋白后细胞表现出皱缩,绿色荧光明显增强,而两种不同来源的融合蛋白与HER2阴性MCF7混合后均易被洗脱。GFP标准品与SKBR3混合后也容易被洗脱。实验表明构建的携带绿色荧光抗HER2单链抗体同时具有靶向结合和报告作用两方面的功能。

关键词：融合蛋Anti—HER2—ScFv—GFP 乳腺癌细胞表面受体靶向结合

miR-20a与ATP结合盒转运体A1的靶向结合作用

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中国动脉硬化杂志 2013年第9期21卷 I0058-I0058页

作者：梁斌白瑞杨振乐边云飞肖传实山西医科大学第二医院山西医科大学第一医院山西省太原市030001

目的探讨miR-20a是否可与ATP结合盒转运体A1（ABCAl）靶向结合。方法利用生物信息学预测网站TargetScan、miRan—da、PieTar、RNAhybrid和miRNAviewerTargetScan进行靶基因预测和保守性及自由能分析；利用荧光素酶报告基因实验分析miR-... 详细信息

目的探讨miR-20a是否可与ATP结合盒转运体A1（ABCAl）靶向结合。方法利用生物信息学预测网站TargetScan、miRan—da、PieTar、RNAhybrid和miRNAviewerTargetScan进行靶基因预测和保守性及自由能分析；利用荧光素酶报告基因实验分析miR-20a是否对ABCAl3’UTR中靶点有直接靶向抑制作用。

关键词： miR-20a ATP结合盒转运体A1 靶向结合

AHPN衍生物的合成及其与RARγ的结合活性研究

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中国药学杂志 2018年第4期53卷 249-257页

作者：张彬山沈宇飞耿春晨王碧燕王海燕韩大雄厦门大学药学院福建厦门361102 国家海洋局第三海洋研究所福建厦门361005

目的本实验以6-{3'-(1-金刚烷基)-4'-羟基苯基}-2-萘甲酸(AHPN)母核为结构基础,设计、合成一系列AHPN衍生物,并对这些衍生物做初步的活性筛选,期望找到活性显著的衍生物。方法以对溴苯酚和1-金刚烷醇为原料经取代、缩合、氧化、还原等... 详细信息

目的本实验以6-{3'-(1-金刚烷基)-4'-羟基苯基}-2-萘甲酸(AHPN)母核为结构基础,设计、合成一系列AHPN衍生物,并对这些衍生物做初步的活性筛选,期望找到活性显著的衍生物。方法以对溴苯酚和1-金刚烷醇为原料经取代、缩合、氧化、还原等反应合成AHPN衍生物,经过1H-NMR、13C-NMR、HR-MS表征,并利用Biacore技术检测衍生物与蛋白质之间的结合能力。结果衍生物7c、6c、6e、6h显示出了显著优于先导化合物AHPN与视黄酸核受体γ(RARγ)的结合能力,亚磷酸二甲酯基与氮杂环的引入提高了该类化合物的活性。结论该类AHPN衍生物与RARγ结合能力显著,有进一步研究的价值。

关键词：视黄酸核受体γ 6-{3’-(1-金刚烷基)-4’-羟基苯基}-2-萘甲酸靶向结合化学合成

蜜蜂球囊菌菌丝和孢子中微小RNA及其靶mRNA的比较分析

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中国农业科学 2020年第17期53卷 3606-3619页

作者：陈华枝祝智威蒋海宾王杰范元婵范小雪万洁琦卢家轩熊翠玲郑燕珍付中民陈大福郭睿福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)

【目的】蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis,球囊菌)专性侵染蜜蜂幼虫而导致白垩病。本研究旨在通过small RNA-seq(sRNA-seq)技术和生物信息学方法对球囊菌纯化菌丝(AaM)和纯化孢子(AaS)进行深度测序和比较分析,明确球囊菌菌丝miRNA和孢子mi... 详细信息

【目的】蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis,球囊菌)专性侵染蜜蜂幼虫而导致白垩病。本研究旨在通过small RNA-seq(sRNA-seq)技术和生物信息学方法对球囊菌纯化菌丝(AaM)和纯化孢子(AaS)进行深度测序和比较分析,明确球囊菌菌丝miRNA和孢子miRNA的数量、结构和表达谱差异,并揭示菌丝和孢子共有miRNA、特有miRNA和差异表达miRNA(differentially expressed miRNA,DEmiRNA)及其靶mRNA与球囊菌菌丝和孢子生长、发育和病原致病性的潜在关系。【方法】实验室条件下获得纯培养的球囊菌,利用sRNA-seq技术对AaM和AaS分别进行测序,通过对原始读段(raw reads)进行过滤和质控获得有效标签序列(clean tags)。通过Venn分析筛选菌丝和孢子共有miRNA和特有miRNA。根据P≤0.05且|log2 fold change|≥1的标准筛选AaM vs AaS的DEmiRNA。对上述共有miRNA、特有miRNA和DEmiRNA的靶mRNA进行预测,并对靶mRNA进行GO及KEGG数据库注释。根据靶向结合关系构建DEmiRNA和靶mRNA的调控网络。利用RT-qPCR验证测序数据的可靠性。【结果】AaM和AaS中分别得到12 982 320和12 708 832条raw reads,经过滤和质控分别得到10 800 101和9 888 848条clean tags。AaM中miRNA的长度介于18—26 nt,AaS中miRNA的长度介于18—24 nt,分布miRNA数量最多的长度均为18 nt,AaM和AaS中首位碱基为U的miRNA数量最多。AaM和AaS中表达量最高的miRNA均为miR6478-x、miR10516-x和miR482-x。菌丝和孢子共有miRNA靶向结合5 946个mRNA,二者特有miRNA分别靶向结合6 141和6 346个mRNA。共有miRNA的靶mRNA主要参与代谢进程、细胞进程和催化活性等42个功能条目,以及翻译、碳水化合物代谢和能量代谢等120条通路。AaM vs AaS比较组包含93个DEmiRNA,可靶向结合6 090个mRNA,这些靶mRNA可注释到38个功能条目和120条通路。DEmiRNA与靶mRNA之间形成较为复杂的调控网络,miR-4968-y位于调控网络的中心且能够靶向结合多达118个mRNA。RT-qPCR结果显示5个DEmiRNA的表达趋势与测序数据一致,证实了本研究中测序数据的可靠性。【结论】球囊菌菌丝和孢子中的miRNA具有类似的结构特征,但表达谱表现出明显差异;菌丝和孢子可能通过特异性表达和差异表达部分miRNA对其生长、发育和生殖进行调控。

关键词：蜜蜂球囊菌菌丝孢子微小RNA 信使RNA 靶向结合

下调miR-616-3p对补体攻击骨髓间充质干细胞的影响

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中国矫形外科杂志 2021年第1期29卷 69-74页

作者：周建国刘如月韩枫刘一亮商丘市第一人民医院骨一科河南商丘476000 南华大学附属南华医院手足显微外科湖南衡阳421002

[目的]探讨miR-616-3p对补体系统攻击骨髓间充质干细胞(BMSCs)的影响及其机制。[方法]从SD大鼠骨髓腔中分离提取并获得原代BMSCs,将miR-616-3p抑制剂转染到rBMSCs中,再采用大鼠颈静脉血分离的异体血清(ARS)进行干预。采用qRT-PCR法检测... 详细信息

[目的]探讨miR-616-3p对补体系统攻击骨髓间充质干细胞(BMSCs)的影响及其机制。[方法]从SD大鼠骨髓腔中分离提取并获得原代BMSCs,将miR-616-3p抑制剂转染到rBMSCs中,再采用大鼠颈静脉血分离的异体血清(ARS)进行干预。采用qRT-PCR法检测各组rBMSCs细胞中miR-616-3p的表达水平,Western Blot法检测膜补体调节蛋白CD46和凋亡蛋白cleaved Caspase-3的表达水平,MTT法检测各组rBMSCs细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率以及补体攻击复合物(MAC)沉积情况,采用双荧光素酶报告系统验证miR-616-3p与CD46的靶向作用关系。[结果]ARS干预能促进rBMSCs中miR-616-3p表达,抑制CD46蛋白表达,并降低rBMSCs增殖活性,促进rBMSCs凋亡以及增加r BMSCs表面MAC沉积。抑制miR-616-3p能促进ARS干预条件下rBMSCs的存活及CD46蛋白表达,抑制r BMSCs凋亡,减少rBMSCs表面MAC沉积。双荧光素酶报告系统实验证实CD46是miR-616-3p靶基因。[结论]下调miR-616-3p通过靶向结合膜补体调节蛋白CD46可以促进BMSCs细胞增殖,抑制细胞凋亡,进而抑制补体系统对rBMSCs的攻击作用。

关键词：大鼠骨髓间充质干细胞补体系统 miR-616-3p 膜补体调节蛋白靶向结合

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多功能超声造影剂分子显像与治疗研究进展

多功能超声造影剂分子显像与治疗研究进展