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脂多糖修饰对革兰阴性菌毒力及外膜囊泡生物学特性影响的研究进展

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动物医学进展 2020年第2期41卷 98-103页

作者：杨君李冰蔡汝健宋帅勾红潮楚品品卞志标王令闫鹤李春玲广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东广州510640 华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640 茂名市动物疫病预防控制中心广东茂名525000 广州市动物防疫监督所广东广州510640

脂多糖(LPS)是革兰阴性(G^-)菌的内毒素,刺激机体引发炎症反应,为细菌的一种毒力因子,主要存在于细菌细胞壁外膜上,也是外膜囊泡(OMVs)的主要成份。OMVs是细菌从膜上脱落下来的一种囊状结构,含有大量的LPS、外膜蛋白及其他成分,具有良... 详细信息

脂多糖(LPS)是革兰阴性(G^-)菌的内毒素,刺激机体引发炎症反应,为细菌的一种毒力因子,主要存在于细菌细胞壁外膜上,也是外膜囊泡(OMVs)的主要成份。OMVs是细菌从膜上脱落下来的一种囊状结构,含有大量的LPS、外膜蛋白及其他成分,具有良好的免疫原性,被认为是最具潜力的亚单位疫苗。大多数LPS由类脂A、核心寡糖和O抗原多糖组成,这3个组分的合成影响着LPS的结构,继而影响细菌的毒力和细菌分泌OMVs的产量、毒性及免疫原性等生物学特性。论文主要对LPS的合成转运过程中结构修饰对G^-菌毒力及其OMVs生物学特性的影响进行综述,为革兰阴性菌致病机理研究及开发新型亚单位疫苗提供新思路。

关键词：脂多糖结构革兰阴性菌毒力外膜囊泡生物学特性

CRISPR/Cas9介导TLR5敲除猪肺泡巨噬细胞系建立及对革兰阴性菌黏附能力的影响

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第2期42卷 32-39页

作者：许超郜重丞毕祯彬吴圣龙包文斌扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 江苏现代农业(生猪)产业技术体系良种繁育创新团队江苏扬州225009

Toll样受体5 (TLR5)是Toll-like受体家族中的重要成员,在革兰阴性菌引起的炎症反应中发挥着重要的调控作用。通过CRISPR/Cas9基因敲除技术对猪肺泡巨噬细胞(PAMS)的TLR5基因进行敲除,然后经菌落计数,检测TLR5基因敲除后对大肠埃希菌F18a... 详细信息

Toll样受体5 (TLR5)是Toll-like受体家族中的重要成员,在革兰阴性菌引起的炎症反应中发挥着重要的调控作用。通过CRISPR/Cas9基因敲除技术对猪肺泡巨噬细胞(PAMS)的TLR5基因进行敲除,然后经菌落计数,检测TLR5基因敲除后对大肠埃希菌F18ab和F18ac以及沙门菌黏附能力的影响。结果表明:设计的2条sgRNAs成功插入CRISPR/Cas9载体中,序列正确,转染猪肺泡巨噬细胞后均能稳定表达,且PCR测序峰图出现套峰,表明敲除载体具有切割活性。利用有限稀释法,最终获得1株缺失15个碱基的单克隆细胞系TLR5-sg1。对TLR5敲除细胞进行qPCR和Western blot验证,结果显示TLR5基因的转录水平极显著下调,其蛋白质水平也明显降低。细菌黏附试验结果显示,TLR5敲除细胞中黏附的大肠埃希菌F18ab、F18ac和沙门菌(ATCC13312)的数量均极显著低于对照组。这一研究成功建立了猪TLR5基因敲除的3D4/21细胞系,且TLR5基因的敲除会降低大肠埃希菌和沙门菌对3D4/21细胞的黏附能力,为进一步探究TLR5基因的生物学功能建立了细胞模型,为深入探讨TLR5基因在炎症反应中的免疫调控作用提供了试验素材。

关键词：猪 TLR5基因 CRISPR/Cas9 细菌黏附革兰阴性菌

2016—2018年11家儿童医院血流感染革兰阴性菌分布及耐药性分析

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中国抗生素杂志 2021年第6期46卷 584-588页

作者：景春梅许红梅赵瑞秋王传清俞蕙陈学军邓慧玲曹清重庆医科大学附属儿童医院检验科儿童发育疾病研究教育部重点实验室国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地儿科学重庆市重点实验室重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院感染科重庆400014 复旦大学附属儿科医院临床检验中心细菌室上海201102 复旦大学附属儿科医院感染科上海201102 浙江大学医学院附属儿童医院检验科杭州310003 陕西省西安市儿童医院感染科西安710003 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心感染科上海200127

目的分析2016—2018年11家儿童医院血流感染革兰阴性菌的分布及对常用抗菌药物的耐药性。方法根据全国细菌耐药监测网技术要求,对血流感染分离革兰阴性菌进行鉴定和药敏试验,药敏结果按2018年CLSI标准判读。结果 2016—2018年自血标本... 详细信息

目的分析2016—2018年11家儿童医院血流感染革兰阴性菌的分布及对常用抗菌药物的耐药性。方法根据全国细菌耐药监测网技术要求,对血流感染分离革兰阴性菌进行鉴定和药敏试验,药敏结果按2018年CLSI标准判读。结果 2016—2018年自血标本中共分离病原菌14078株,革兰阴性菌4937株,占35.1%,前5位分离菌依次为大肠埃希菌、嗜麦芽寡养单胞菌、肺炎克雷伯菌、木糖氧化无色杆菌和铜绿假单胞菌。大肠埃希菌对哌拉西林/三唑巴坦、头孢替坦、美罗培南、厄他培南和亚胺培南的耐药率菌对替加环素、妥布霉素和阿米卡星的耐药率菌和鲍曼不动杆菌对左氧氟沙星、美罗培南和亚胺培南的耐药率分别为12.5%、13.0%、0.4%和40.8%、37.7%和20.0%。结论引起儿童血流感染的革兰阴性菌对常用抗菌药物有不同程度耐药,应高度重视,合理使用抗菌药物。

关键词：血培养儿童革兰阴性菌中国儿童细菌耐药监测组

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我国革兰阴性菌耐药态势及其机制

中华结核和呼吸杂志 2017年第8期40卷 573-577页

作者：俞云松浙江大学医学院附属邵逸夫医院肝病感染科杭州310016

细菌耐药问题是全球共同面临的挑战,革兰阴性菌的耐药问题尤为突出,针对耐药革兰阴性菌的新型抗菌药物种类少,且对新型抗菌药物耐药的问题不断被报道,广泛耐药（extensive drug resistance,XDR）菌、全耐药（pandrug resistance,PDR）... 详细信息

细菌耐药问题是全球共同面临的挑战,革兰阴性菌的耐药问题尤为突出,针对耐药革兰阴性菌的新型抗菌药物种类少,且对新型抗菌药物耐药的问题不断被报道,广泛耐药（extensive drug resistance,XDR）菌、全耐药（pandrug resistance,PDR）菌不断出现,甚至在少部分医院、少数地区出现局部流行,需引起临床医生的高度重视.

关键词：革兰阴性菌细菌耐药抗菌药物耐药药物种类 drug 局部流行临床医生泛耐药

55例耐碳青霉烯类革兰阴性菌新生儿败血症临床特征和病原菌分布及其耐药性

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中华医院感染学杂志 2019年第16期29卷 2500-2504页

作者：李小霞王燕朱琳李琴朱逸清卢金淼张旭晖王广飞刘晓辰李智平复旦大学附属儿科医院临床药学部

目的分析耐碳青霉烯类革兰阴性菌新生儿败血症的病原菌分布及抗菌药物的使用,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据。方法回顾性分析复旦大学附属儿科医院新生儿重症监护病房(Neonatal intensive care unit,NICU)2013年1月-2017年12月血... 详细信息

目的分析耐碳青霉烯类革兰阴性菌新生儿败血症的病原菌分布及抗菌药物的使用,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据。方法回顾性分析复旦大学附属儿科医院新生儿重症监护病房(Neonatal intensive care unit,NICU)2013年1月-2017年12月血及脑脊液培养确诊为耐碳青霉烯类革兰阴性菌败血症新生儿的临床资料及抗菌药物使用情况。结果共收集血及脑脊液培养阳性的耐碳青霉烯类革兰阴性菌59株,其中碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)35株,耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(Carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)13株,耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(Carbapenem-resistant Enterobacter cloacae, CREC)4株;CRKP对阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星敏感率较高,为100.00%;对磷霉素敏感率较高,为96.30%;但CRKP对头孢菌素类及β内酰胺类抗菌药物的敏感率较低;13例占23.64%患儿选用美罗培南和磷霉素联合治疗,9例占16.36%患儿选用美罗培南和氨苄西林钠舒巴坦钠联合治疗,6例占10.91%患儿使用美罗培南治疗,治愈率达到80.00%。结论美罗培南联合磷霉素可用于血培养耐碳青霉烯类革兰阴性菌败血症新生儿的治疗,临床医生应结合实验室药敏结果、临床疗效及最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration, MIC)值合理使用抗菌药物,以减少或延缓耐碳青霉烯类细菌的产生。

关键词：耐碳青霉烯类革兰阴性菌新生儿败血症美罗培南磷霉素

ICU患者耐碳青霉烯类革兰阴性菌感染的危险因素及耐药性分析

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中华医院感染学杂志 2020年第9期30卷 1335-1339页

作者：马纯芳李新鹏赵群潍坊医学院附属寿光市人民医院药学部山东潍坊262700 淄博市中心医院药学部山东淄博255000

目的观察ICU患者耐碳青霉烯类革兰阴性菌感染的病原菌分布及耐药性,分析感染的危险因素。方法选取山东省潍坊医学院附属寿光市人民医院2015年2月-2019年2月ICU收治并感染耐碳青霉烯类革兰阴性菌患者210例作为研究组,分析患者感染部位与... 详细信息

目的观察ICU患者耐碳青霉烯类革兰阴性菌感染的病原菌分布及耐药性,分析感染的危险因素。方法选取山东省潍坊医学院附属寿光市人民医院2015年2月-2019年2月ICU收治并感染耐碳青霉烯类革兰阴性菌患者210例作为研究组,分析患者感染部位与病原菌分布及耐药性。另选取同期ICU收治的未感染耐碳青霉烯类革兰阴性菌患者210例作为对照组。单因素及多因素Logistic回归分析患者耐碳青霉烯类革兰阴性菌感染的危险因素。结果210株耐碳青霉烯类革兰阴性菌,主要包括鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌等;标本类型主要为痰液,其次为血液、尿液;鲍氏不动杆菌除对左氧氟沙星、阿米卡星、替加环素、头孢哌酮-舒巴坦、多黏素耐药率相对较低外,对其他药物耐药率均较高;而阿米卡星、左氧氟沙星、多黏菌素、替加环素等则对肺炎克雷伯菌表现出高抗菌活性;铜绿假单胞菌对头孢替坦、头孢唑林、氨曲南与哌拉西林的耐药率均>90.0%。多因素Logistic分析结果,二次插管、抗菌药物联用、应用碳青霉烯类抗菌药物、白蛋白水平低、脑血管病是发生感染的危险因素。结论鲍氏不动杆菌、肺炎克雷伯菌是ICU主要耐碳青霉烯类革兰阴性菌,病原菌多药耐药情况严重,感染与二次插管、低蛋白血症、碳青霉烯类抗菌药物使用、多联抗菌药物使用、合并脑血管病等因素有关,这类患者应引起临床重视。

关键词：重症监护室碳青霉烯革兰阴性菌危险因素耐药性

金诺芬与伏立诺他联合对革兰阴性菌抗菌活性的影响及金诺芬作用位点的研究

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中华传染病杂志 2019年第3期37卷 149-154页

作者：陈昊然刘周李家斌安徽医科大学第一附属医院感染病科合肥230022 安徽医科大学第二附属医院检验科合肥230601

目的明确金诺芬对革兰阴性菌抗菌活性的作用靶点,探究金诺芬与伏立诺他联合对革兰阴性菌抗菌活性的影响。方法采用缺失硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)菌株明确靶点基因,通过药物敏感试验,棋盘微量稀释法,以及时间-杀菌... 详细信息

目的明确金诺芬对革兰阴性菌抗菌活性的作用靶点,探究金诺芬与伏立诺他联合对革兰阴性菌抗菌活性的影响。方法采用缺失硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)菌株明确靶点基因,通过药物敏感试验,棋盘微量稀释法,以及时间-杀菌动力学试验来观察金诺芬与伏立诺他的联合对大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和多耐药鲍曼不动杆菌是否具有协同作用。分别观察大肠埃希菌BW25113 (wild type,WT)菌株敲除表达Trx的相关基因(trxA、trxB、trxC),表达谷胱甘肽(glutathione, GSH)的基因(gor),对金诺芬药物的敏感结果,以及金诺芬对ΔtrxC、Δgor的时间-杀菌动力学影响,并使用回补菌株(C-trxA、C-trxB、C-trxC、C-gor)来验证,明确基因目标。结果药物敏感试验结果显示,金诺芬对大肠埃希菌BW25113和肺炎克雷伯菌ATCC 43816菌株的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)均为64 mg/L,对铜绿假单胞菌PA14的MIC为128 mg/L,对鲍曼不动杆菌ATCC 17978和AB5075的MIC为32 mg/L;伏立诺他对所有菌株的MIC均为512 mg/L。金诺芬联合伏立诺他对大肠埃希菌BW25113、鲍曼不动杆菌ATCC 17978、多耐药鲍曼不动杆菌AB5075、肺炎克雷伯杆菌ATCC 43816、铜绿假单胞菌PA14的分级抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)分别约为0.313、0.375、0.375、0.375和0.375,所有值均菌株药物敏感结果中显示,金诺芬对ΔtrxC的MIC由64 mg/L上升至256 mg/L,对Δgor的MIC下降至16 mg/L,对ΔtrxA、ΔtrxB的MIC未发生改变。金诺芬对回补菌株(C-trxC, C-gor)与对大肠埃希菌BW25113表现出相同的抗菌活性,细菌数量减少约1.8 lg菌落形成单位(colong formins units, CFU)/mL;而金诺芬对ΔtrxC的抗菌活性明显降低,细菌数量减少菌数量减少4.6 lg CFU/mL,抗菌活性明显增加。结论金诺芬对抗革兰阴性菌的潜在靶点基因可能是trxC,为临床上治疗多耐药的革兰阴性菌提供新的思路和途径。

关键词：金诺芬革兰阴性菌硫氧还蛋白还原酶伏立诺他协同作用

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革兰阴性菌耐消毒剂基因的研究进展

中国消毒学杂志 2012年第10期29卷 915-917页

作者：阮燕萍浙江省肿瘤医院杭州310022

革兰阴性菌是引起院内感染的主要病原菌，而室内环境和物体表面病原微生物控制主要靠化学消毒处理。有学者担心，医院环境和物体表面长期使用化学消毒剂会不会出现耐消毒剂菌株，这种耐消毒剂菌株是否意味着对常用的化学消毒剂不敏感而... 详细信息

革兰阴性菌是引起院内感染的主要病原菌，而室内环境和物体表面病原微生物控制主要靠化学消毒处理。有学者担心，医院环境和物体表面长期使用化学消毒剂会不会出现耐消毒剂菌株，这种耐消毒剂菌株是否意味着对常用的化学消毒剂不敏感而使消毒失效。为此，近年来很多学者对医院感染常见病原菌耐消毒剂问题进行了大量研究，其中很多研究都集中在对革兰阴性菌耐药基因携带情况与其抗消毒剂关系。本文就有关革兰阴性菌耐消毒剂的研究进展进行综述。

关键词：革兰阴性菌消毒剂耐药基因抗力

多重耐药革兰阴性菌感染对中度重症和重症急性胰腺炎病程和预后的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2018年第12期38卷 1463-1466页

作者：许志伟秦帅李磊瞿洪平毛恩强黄洁上海交通大学医学院附属瑞金医院胰腺外科上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院重症医学科上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院急诊科上海200025

目的·分析中度重症急性胰腺炎(moderately severe acute pancreatitis,MSAP)和重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)继发胰腺/胰周革兰阴性耐药菌感染的来源、菌种特点及其对病程和预后的影响。方法·回顾2013—2017年上海... 详细信息

目的·分析中度重症急性胰腺炎(moderately severe acute pancreatitis,MSAP)和重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)继发胰腺/胰周革兰阴性耐药菌感染的来源、菌种特点及其对病程和预后的影响。方法·回顾2013—2017年上海交通大学医学院附属瑞金医院急诊科、胰腺外科与重症医学科收治的符合研究条件的患者,筛选胰腺/胰周革兰阴性菌(Gram-negative bacteria,GNB)感染的患者,并分为多重耐药(multiple drug resistant,MDR)革兰阴性菌(MDR-GNB)组和非多重耐药革兰阴性菌(non-MDRGNB)组,对比分析基础临床信息、耐药菌的来源、耐药菌感染对病情进展及预后的影响。结果·共收治197例MSAP和SAP患者,胰腺/胰周标本明确GNB感染92例(46.70%),其中MDR-GNB感染患者61例(占66.30%),non-MDR-GNB感染患者31例(占33.70%);胰腺/胰周标本共检出117株GNB,其中MDR-GNB 69株,主要是多重耐药肺炎克雷伯杆菌(Klebsiella pneumoniae,KP)(MDR-KP)(39株,56.52%)和多重耐药鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)(MDR-AB)(22株,31.88%);MDR-GNB组经皮穿刺置管引流(percutaneous catheter drainage,PCD)继发耐药菌感染的发生率显著高于non-MDR-GNB组(36.07%vs 12.90%,P=0.020);耐药菌感染可导致机械通气时间延长[(17.65±11.74) d vs (9.67±9.34) d,P=0.001]、碳青霉烯类和特殊抗菌药物使用增加(P=0.000)、首次开腹手术时间提前[(21.92±11.45) d vs (29.36±21.48) d,P=0.032]、≥2次开腹手术发生率增高(45.90%vs 22.58%,P=0.029)、总住院时间延长(54.44±42.38) d vs (32.51±27.62) d,P=0.011)和病死率增高(34.43%vs 12.90%,P=0.028);死亡患者中MDR-KP的感染率显著高于存活患者(85.71%vs 52.50%,P=0.000),而其他耐药菌在2组中差异均无统计学意义。结论·MSAP和SAP继发胰腺/胰周革兰阴性耐药菌感染的患者中,MDR-KP和MDR-AB占据了主导地位。耐药菌感染的来源中,PCD继发感染的发生率最高。耐药菌感染可导致病程延长、用药和手术增加及预后不良,其中MDR-KP的感染更是与预后不良直接相关。

关键词：急性胰腺炎多重耐药革兰阴性菌预后