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养精胶囊通过Lncrna h19调控StAR促进睾酮合成的作用机制

养精胶囊通过LncRNA H19调控StAR促进睾酮合成的作用机制

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作者：王丹丹东南大学

学位级别：硕士

目的:　　迟发性性腺功能减退症（late-onset hypogonadism，LOh）是男性衰老过程中的常见病，其核心机制在于 Leydig 细胞的功能下降和数目减少，呈现出一系列睾酮相对缺乏的临床症状。外源性补充睾酮是目前治疗LOh的主要手段，但仍存... 详细信息

目的:　　迟发性性腺功能减退症（late-onset hypogonadism，LOh）是男性衰老过程中的常见病，其核心机制在于 Leydig 细胞的功能下降和数目减少，呈现出一系列睾酮相对缺乏的临床症状。外源性补充睾酮是目前治疗LOh的主要手段，但仍存在一定的争议和局限性，故而中医药干预LOh符合临床需要，探索其内在机制具有重要的临床意义。既往已有学者报道，Lncrna h19能够在转录后水平调控类固醇生成急性调节蛋白（ steroidogenic acute regulatory protein ， StAR ）的表达。课题组前期研究也已证实养精胶囊（Yangjing Capsule，YC）能够增强StAR启动子的活性进而促进睾酮合成，但未对养精胶囊调控StAR的上游机制进行阐释。基于上述背景，我们从体内外实验出发，研究养精胶囊是否通过Lncrna h19调控StAR，进而发挥促进睾酮合成的作用。　　方法:　　1.动物实验：将BALB/c老年雄性LOh模型小鼠、BALB/c年轻雄性小鼠作为动物实验对象，分为对照组、养精胶囊混悬液（YCS）处理组（低、中、高剂量）和年轻组，连续灌胃4周。通过hE染色观察小鼠睾丸组织形态;通过石蜡切片免疫组化观察StAR蛋白在小鼠睾丸组织中的定位和表达情况;通过 ELISA 测定小鼠血清睾酮和游离睾酮浓度;通过 qRT-PCR 和Western Blot分别检测小鼠睾丸组织中StAR、Lncrna h19、Microrna Let7b mrna和StAR蛋白的表达。　　2.细胞实验：将小鼠睾丸间质细胞瘤细胞系（MLTC-1）作为体外细胞实验对象，培养至对数生长期，加入低（0.01mg/ml）、中（0.1mg/ml）、高（1mg/ml）剂量养精胶囊水提物（YCWE）处理24小时，通过ELISA测定细胞上清睾酮浓度，通过 qRT-PCR 和 Western Blot 分别检测 MLTC-1 细胞中 StAR、Lncrna h19、Microrna Let7b mrna 和 StAR 蛋白的表达。构建敲低Lncrna h19的慢病毒稳定株，随后加入高剂量YCWE处理24小时，通过qRT-PCR和ELISA分别检测Lncrna h19、StAR mrna和细胞上清睾酮水平。　　结果:　　1.动物实验：YCS能够显著增加LOh模型小鼠血清睾酮和游离睾酮浓度;上调小鼠睾丸组织中Lncrna h19、StAR mrna和StAR蛋白的表达，下调Microrna Let7b mrna的表达;YCS能够增加小鼠Leydig细胞数目。　　2.细胞实验：YCWE能够增加细胞上清睾酮浓度;上调MLTC-1细胞中Lncrna h19、StAR mrna 和 StAR 蛋白的表达，下调 Microrna Let7b mrna的表达。构建敲低Lncrna h19的慢病毒稳定株后，MLTC-1细胞中Lncrna h19、StAR mrna和细胞上清睾酮水平均显著下降;YCWE干预后，Lncrna h19和StAR mrna的表达均上调，细胞上清睾酮浓度显著增加。　　结论:　　1.养精胶囊促进睾酮合成，可能与调控类固醇激素合成中StAR的转录和翻译有关。　　2.养精胶囊可能通过上调Lncrna h19 mrna的表达，从而调控StAR的转录和翻译。　　3.养精胶囊混悬液能够增加小鼠Leydig细胞数目、提高Leydig细胞功能。　　4.养精胶囊水提物能够逆转敲低Lncrna h19的慢病毒稳定株对StAR转录水平和睾酮合成的抑制作用。　　5.Lncrna h19可能是养精胶囊促进睾酮合成的关键基因之一，养精胶囊极可能通过Lncrna h19调控StAR的转录进而促进睾酮合成，本研究为临床上应用养精胶囊治疗LOh提供了理论基础与数据支持。

关键词：迟发性性腺功能减退症养精胶囊非编码rna h19 类固醇生成急性调节蛋白睾酮睾丸间质细胞实验药理

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