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非洲绿猴IFITM3基因的克隆及其组织特异性表达差异

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中国比较医学杂志 2020年第4期30卷 19-26页

作者：邢焕微叶莉李昌张素花白杰英河北工业大学理学院天津300401 北京大学分子医学研究所非人灵长类动物研究中心北京100871 军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 军事医学研究院军事兽医研究所长春130122

目的为研究非洲绿猴(African green monkeys,AGM)干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein,IFITMs)的功能,以及其发挥抗病毒作用的机制及作用方式,从非洲绿猴的不同组织器官中克隆了IFITM3基因,并对基因的表达特... 详细信息

目的为研究非洲绿猴(African green monkeys,AGM)干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-induced transmembrane protein,IFITMs)的功能,以及其发挥抗病毒作用的机制及作用方式,从非洲绿猴的不同组织器官中克隆了IFITM3基因,并对基因的表达特性进行了分析。方法用RT-PCR方法从非洲绿猴的心、肝、肺、肾、脑等组织器官中克隆IFITM3的全长c DNA。用DNAMAN软件比较不同物种来源IFITM3 c DNA的核苷酸差异,对AGM IFITM3的遗传多样性进行分析;用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测了非洲绿猴各组织器官中IFITM3基因的表达情况;用病理学和免疫组化方法,检测非洲绿猴不同组织器官中IFITM3蛋白的表达差异。结果非洲绿猴的淋巴细胞、皮肤、心脏、脑、肝、肾、肺和脾中均检测到IFITM3的表达,所获IFITM3 c DNA大约为440 bp(442~448 bp),在基因进化方面与猕猴的相似性达到93%。软件预测AGM IFITM3蛋白含有高度保守的五个跨膜结构域和特异性位点。Real-time PCR结果显示,非洲绿猴IFITM3基因在脾中的表达量最高,在脑中表达量最低;而免疫组化结果显示,皮脂腺、脾和淋巴细胞中IFITM3蛋白含量最高,而脑组织、肺部等蛋白含量较低。结论基于IFITM3在非洲绿猴组织器官中的广泛存在,并在其重要免疫器官脾和淋巴中的高丰度表达,推测IFITM3在非洲绿猴健全的免疫系统和较强的免疫能力建成过程中发挥着重要作用,与非洲绿猴对重要人兽共患病毒感染的免疫力和适应性有重要关系。

关键词：非洲绿猴干扰素诱导的跨膜蛋白3 抗病毒

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非洲绿猴血液学和血清生化指标的测定及分析

中国比较医学杂志 2017年第11期27卷 6-9页

作者：周小军袁菊芳定明王进叶华虎法云智军事医学科学院实验动物中心北京100071

目的检测50只健康非洲绿猴血液学、血清生化指标,分析不同性别、不同年龄段(青幼年组:1~3岁,成年组:4~6岁)非洲绿猴的血液学、血清生化指标的差异。方法应用全自动血细胞分析仪及血液生化分析仪分别测定清醒状态下健康非洲绿猴血液学及... 详细信息

目的检测50只健康非洲绿猴血液学、血清生化指标,分析不同性别、不同年龄段(青幼年组:1~3岁,成年组:4~6岁)非洲绿猴的血液学、血清生化指标的差异。方法应用全自动血细胞分析仪及血液生化分析仪分别测定清醒状态下健康非洲绿猴血液学及血清生化指标。结果血液学指标中青幼年组与成年组差异显著的指标有红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、血细胞压积(HCT)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、淋巴细胞百分比(LYMPH%)、单核粒细胞百分比(MONO%)、嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)(P猴与雄猴差异显著的指标有白细胞数(WBC)、RBC、HGB、HCT、NEUT%、LYMPH%、MONO%(P猴与雄猴差异显著的指标有HCT(P猴与雄猴差异显著的指标有CREA(P猴与雄猴差异显著的指标有总蛋白(TP)、胆固醇(CHOL)(P非洲绿猴的常规生物学数据,为评价其生物学特性及相关应用提供一定的数据基础,可供参考。

关键词：非洲绿猴血液学指标血清生化指标

非洲绿猴肾细胞株AGMr(HindⅢ)-1高度重复顺序的克隆及初步应用

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中国病毒学 1997年第2期12卷 119-124页

作者：陈宇光卫生部上海生物制品研究所上海200052

从非洲绿猴肾细胞株分离高度重复顺序AGMr（HindⅢ）－1基因，以pUC18质粒为载体构建重组质粒pUC18／AGMr（HindⅢ）－1，转化***83。酶切分析、SouthernBlot分析和序列分析均证明克隆成功，但所用的第165代Vero细胞株与另一非洲绿猴肾... 详细信息

从非洲绿猴肾细胞株分离高度重复顺序AGMr（HindⅢ）－1基因，以pUC18质粒为载体构建重组质粒pUC18／AGMr（HindⅢ）－1，转化***83。酶切分析、SouthernBlot分析和序列分析均证明克隆成功，但所用的第165代Vero细胞株与另一非洲绿猴肾BSC－1细胞株的序列相比较，172个碱基中有6个位点突变。用该重组质粒作探针，对Vero细胞培养的狂犬疫苗作SouthernBlot分析表明，未经纯化的半成品中残余细胞DNA长度约400～5000bp。斑点杂交分析表明，杂交特异性良好，残余细胞DNA最小检出量约4pg。提示AGMr（HindⅢ）－1高度重复顺序可特异地应用于Vero细胞残余DNA检测。

关键词：狂犬病毒疫苗非洲绿猴肾细胞株重复顺序

放线菌素D诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡模型的建立

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中国细胞生物学学报 2013年第6期35卷 842-847页

作者：钟菲菲杨慧兰吕芳彪樊建勇华南理工大学生物科学与工程学院广州510006 广州军区广州总医院皮肤科广州510010

用不同剂量(0,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)的放线菌素D(actinomycin D,ActD)诱导Vero细胞凋亡不同时间(0,12,24,36,48,60 h)。MTT法和流式细胞术的结果显示,以未处理的细胞作为对照组,各剂量ActD处理Vero细胞不同时间后,细胞的活力均下... 详细信息

用不同剂量(0,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0 mg/L)的放线菌素D(actinomycin D,ActD)诱导Vero细胞凋亡不同时间(0,12,24,36,48,60 h)。MTT法和流式细胞术的结果显示,以未处理的细胞作为对照组,各剂量ActD处理Vero细胞不同时间后,细胞的活力均下降,凋亡率均升高,且呈剂量和时间依赖效应。当ActD浓度为1 mg/L、作用时间为36 h,细胞的存活率为(0.55±0.01),凋亡率为(34.83±1.13)%。Gimesa染色、Hoechst33258染色表明,经ActD(1 mg/L)诱导36 h后Vero细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;Real-time PCR结果显示,诱导组Bax/Bcl-2 mRNA相对含量明显大于正常对照组,且差异有统计学意义;分光光度法结果表明,与正常对照组相比较,凋亡诱导组caspase-3和caspase-8活性明显升高且差异具有统计学意义,caspase-9活性与对照组相比较,差异无统计学意义。用1 mg/L ActD诱导Vero细胞36 h时,细胞存活率和凋亡率都很高,可作为ActD诱导Vero细胞的最佳剂量。在该剂量及作用时间下,caspase-3和caspase-8活性明显升高,表明ActD诱导Vero细胞凋亡是通过caspase-8相关的途径。该实验成功建立了ActD诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。

关键词：非洲绿猴肾细胞细胞凋亡 ActD

抗菌肽葛佬素在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其活性的初步分析

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中华烧伤杂志 2003年第2期19卷 86-88页

作者：周红郑江鲁永玲秦孝建肖光夏第三军医大学基础部药理学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院综合实验研究中心第三军医大学全军烧伤研究所重庆400038

目的　观察自行设计的葛佬素cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS 7中的表达及其表达产物的抗菌作用。　方法　分析同种族蛋白质AttacinAcDNA序列各种遗传密码子的出现频度 ,结合已知的葛佬素蛋白质序列 ,设计、合成其cDNA序列。经测序验证后 ,... 详细信息

目的　观察自行设计的葛佬素cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS 7中的表达及其表达产物的抗菌作用。　方法　分析同种族蛋白质AttacinAcDNA序列各种遗传密码子的出现频度 ,结合已知的葛佬素蛋白质序列 ,设计、合成其cDNA序列。经测序验证后 ,将葛佬素基因插入真核细胞表达载体pCDSI中 ,构建载体pBZHG。随后以脂质体为载体 ,对COS 7细胞进行质粒pBZHG和空载体pCDSI的转染 ,72h后收集细胞培养上清液 ,进行杀菌活性的检测 (以正常COS 7细胞培养上清作对照 )。　结果　人工设计的葛佬素cDNA序列在COS 7中得到表达。与转染空载体的细胞和正常细胞比较 ,转染pBZHG的COS 7细胞培养上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性。　结论　笔者所设计的葛佬素cDNA序列是正确的 ,由此可为深入研究葛佬素的抗菌及抗内毒素作用提供实验依据。

关键词：抗菌肽葛佬素非洲绿猴肾细胞株COS-7 cDNA 转染杀菌活性烧伤

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氯仿对非洲绿猴肾细胞损伤机理的研究

中国实验动物学报 2003年第2期11卷 117-119页

作者：张锦周申治国庄志雄杨湘霞黄海雄吴丽明庾蕾深圳市疾病预防控制中心深圳518020 深圳市罗湖区卫生防疫站

目的　实验研究氯仿染毒 2 4h对非洲绿猴肾细胞的损伤及其机理。方法　运用显微荧光术测定了非洲绿猴肾细胞 (Vero细胞 )内活性氧 (ROS)含量及游离Ca2 + 浓度 ,同时 ,测定Vero细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力用于检查Vero细胞受损情... 详细信息

目的　实验研究氯仿染毒 2 4h对非洲绿猴肾细胞的损伤及其机理。方法　运用显微荧光术测定了非洲绿猴肾细胞 (Vero细胞 )内活性氧 (ROS)含量及游离Ca2 + 浓度 ,同时 ,测定Vero细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力用于检查Vero细胞受损情况。结果　接触浓度为 4 0mmol L氯仿的Vero细胞内ROS含量及游离Ca2 +浓度与对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,同时 ,表示Vero细胞受损指标 (LDH活力 )也无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;而接触浓度为 8 0mmol L、12 0mmol L氯仿的Vero细胞内ROS含量显著高于对照组 (P <0 0 1) ,其Vero细胞受损也显著增加 (P <0 0 5、P <0 0 1)。结论　较高浓度的氯仿能损伤Vero细胞。

关键词：氯仿非洲绿猴肾细胞损伤机理氯仿中毒

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非洲绿猴TRIM3基因的克隆与序列分析

现代牧业 2023年第1期7卷 26-32页

作者：曾贤婷朱庆阁曾丁蕾杨智羽赵孟孟佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528231

对非洲绿猴三基序结合蛋白3的基因(TRIM3基因)进行克隆并进行序列分析。扩增非洲绿猴TRIM3基因编码区域(CDS),应用在线软件进行生物信息学分析。非洲绿猴TRIM3基因CDS序列全长2235 bp,编码744个氨基酸。核苷酸相似性分析结果显示,非洲... 详细信息

对非洲绿猴三基序结合蛋白3的基因(TRIM3基因)进行克隆并进行序列分析。扩增非洲绿猴TRIM3基因编码区域(CDS),应用在线软件进行生物信息学分析。非洲绿猴TRIM3基因CDS序列全长2235 bp,编码744个氨基酸。核苷酸相似性分析结果显示,非洲绿猴与猕猴相似性最高,相似性为99.5%,与石龟的相似性为75.3%。生物信息学分析显示,非洲绿猴三基序结合蛋白3分子质量为80.93 ku,理论等电点为8.03,不稳定系数为40.01,是不稳定蛋白。亲水性分析显示,三基序结合蛋白3为亲水性蛋白,不是分泌蛋白,预测该蛋白有22个磷酸化位点。三基序结合蛋白3二级结构以延伸链为主,占38.84%。

关键词：非洲绿猴 TRIM3基因序列分析进化树生物信息学

非洲绿猴和食蟹猴主要肠道细菌的实时定量PCR检测及分析

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实验动物科学 2020年第5期37卷 31-35页

作者：周小军尚艳姣王进王爽邱业峰军事科学院军事医学研究院实验动物中心北京100071

目的非洲绿猴具有不同于食蟹猴和恒河猴等猕猴的生物学特征,如脂质代谢、自发性高血压、SIV感染不引起获得性免疫缺陷综合症(AIDS)等,本研究拟对食蟹猴和非洲绿猴肠道细菌的相对含量进行比较研究。方法随机选取SIV抗体阴性的成年食蟹猴... 详细信息

目的非洲绿猴具有不同于食蟹猴和恒河猴等猕猴的生物学特征,如脂质代谢、自发性高血压、SIV感染不引起获得性免疫缺陷综合症(AIDS)等,本研究拟对食蟹猴和非洲绿猴肠道细菌的相对含量进行比较研究。方法随机选取SIV抗体阴性的成年食蟹猴和非洲绿猴各12只,排除肥胖和疾病个体,收集其新鲜粪便样本,按200 mg每份等分后进行液氮速冻,-80℃保存。其中1份进行肠道细菌的实时定量PCR分析。结果与食蟹猴相比,非洲绿猴双歧杆菌、乳酸菌以及肠杆菌相对含量显著偏低(P非洲绿猴产丁酸盐的细菌相对含量更高,反映出其肠道免疫细胞稳态和黏膜完整性具有不同于食蟹猴的进化适应特征,为深入研究非洲绿猴对SIV感染不致病的相关机制奠定了基础。

关键词：非洲绿猴食蟹猴肠道菌群 SIV AIDS

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非洲绿猴层黏连蛋白受体的克隆、表达及纯化

生物技术通讯 2006年第4期17卷 500-502页

作者：张清华朱旭东李少林许龙党颖李涛黄培堂军事医学科学院生物工程研究所北京100071 重庆医科大学重庆400016

目的:克隆、表达非洲绿猴层黏连蛋白受体(LR),对该受体蛋白进行纯化、复性研究。方法:采用RT-PCR从Vero-E6细胞总RNA中扩增非洲绿猴LR的cDNA序列,克隆到pGEM-TEasy载体上;将LR编码区插入到表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3);用I... 详细信息

目的:克隆、表达非洲绿猴层黏连蛋白受体(LR),对该受体蛋白进行纯化、复性研究。方法:采用RT-PCR从Vero-E6细胞总RNA中扩增非洲绿猴LR的cDNA序列,克隆到pGEM-TEasy载体上;将LR编码区插入到表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3);用IPTG进行诱导表达;用镍亲和柱进行亲和纯化;采用分部透析方法进行复性。结果:非洲绿猴LR基因序列与人LR的基因编码序列有16个碱基差异,但蛋白序列只有1个氨基酸的改变。LR蛋白以包涵体形式表达。采用分部透析方法可使部分蛋白得到复性。结论:克隆了首个非洲绿猴的相对分子质量为37000的LR的基因,与人LR基因序列有16个碱基差异,但其中15处都为同义突变,所以二者的蛋白质序列只有1个氨基酸改变,即293位D→E,提示LR在进化中具有很大的保守性。

关键词：非洲绿猴层黏连蛋白受体基因克隆蛋白表达纯化