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非洲猪瘟病毒结构蛋白与宿主蛋白相互作用研究进展

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畜牧兽医学报 2025年第1期56卷 95-106页

作者：张素孙丽芳李兰兰吴琳娇陈磊清吴允昆福建师范大学生命科学学院福州350108

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染所引起的一种家猪和各种野猪急性出血的传染性疾病,由于高发病率和高致死性的特性对全球家猪养殖产业造成严重的经济损失。ASFV编码蛋白高达... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染所引起的一种家猪和各种野猪急性出血的传染性疾病,由于高发病率和高致死性的特性对全球家猪养殖产业造成严重的经济损失。ASFV编码蛋白高达150多种,而ASFV结构蛋白作为病毒粒子的主要组成部分,在协助病毒吸附入侵宿主细胞、促进子代病毒颗粒复制、组装以及释放等过程发挥着重要作用。研究表明,病毒结构蛋白可通过与宿主蛋白的相互作用,促进病毒入侵、增殖、影响病毒毒力以及拮抗宿主免疫反应等。因此,本文通过概述ASFV结构蛋白与宿主蛋白的相互作用及其机制,为研究ASFV的致病机制以及ASF的防治提供参考。

关键词：非洲猪瘟病毒结构蛋白宿主蛋白蛋白相互作用

非洲猪瘟病毒R298L基因缺失毒株的构建及其致病性与免疫原性评价

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中国兽医科学 2025年第3期55卷 285-290页

作者：范许许李伟伟朱兆宇裴丹诗王一卓何路李熙忠任青峰郑海学朱紫祥中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室

为了探究非洲猪瘟病毒（ASFV）R298L基因的功能，解析ASFV的致病机制，为基因缺失减毒疫苗的研发提供候选毒株，首先利用同源重组技术构建R298L基因缺失的非洲猪瘟病毒株ASFV-ΔR298L，随后通过动物实验在猪体内比较ASFV-ΔR298L与亲本... 详细信息

为了探究非洲猪瘟病毒（ASFV）R298L基因的功能，解析ASFV的致病机制，为基因缺失减毒疫苗的研发提供候选毒株，首先利用同源重组技术构建R298L基因缺失的非洲猪瘟病毒株ASFV-ΔR298L，随后通过动物实验在猪体内比较ASFV-ΔR298L与亲本毒株ASFV CN/GS/2018致病性和免疫应答水平的差异。结果表明，感染亲本毒株的动物发热严重，在感染后13 d内全部死亡，解剖学观察显示多器官发生严重的病变，而感染ASFV-ΔR298L重组病毒的动物发热水平显著下降，在观察期内全部存活，组织器官未发生病变，并且在后期产生较高水平的中和抗体。以上数据为解析R298L病毒蛋白的功能和阐明非洲猪瘟病毒的致病机制提供了理论依据，为基因缺失候选疫苗的研制提供了参考。

关键词：非洲猪瘟病毒 R298L基因缺失毒株致病性免疫保护

非洲猪瘟病毒p15蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性评价

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中国兽医科学 2025年

作者：党海迷杨洋茹毅郝荣增蒋成辉赵陇和卢炳州李亚军胡馨予韩盛楠伍国强郑海学兰州理工大学生命科学与工程学院中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心

本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因序列克隆至载体pFastBac1中，构建重组质粒pFastBac-p15，将该质粒与DH1... 详细信息

本研究旨在利用昆虫杆状病毒表达系统制备非洲猪瘟病毒(ASFV) p15蛋白，并对其免疫原性进行评价，为非洲猪瘟亚单位疫苗研究提供试验基础。首先把编码p15蛋白的基因序列克隆至载体pFastBac1中，构建重组质粒pFastBac-p15，将该质粒与DH10Bac同源重组后转染昆虫细胞收获重组杆状病毒rBac-p15，将rBac-p15感染sf9细胞进行重组蛋白的表达；然后利用亲和层析纯化获得目的蛋白，并利用SDS-PAGE、Western-blot和IFA鉴定重组蛋白的表达及反应性；再将p15蛋白免疫小鼠，评估其体液和细胞免疫应答水平。结果表明，在感染重组杆状病毒rBac-p15的sf9细胞中，p15蛋白获得高效表达，并可被ASFV康复猪血清特异性识别。p15蛋白免疫小鼠诱导产生高水平的特异性抗体和细胞因子，有利于刺激脾脏CD4+、CD8+ T淋巴细胞的增殖。综上，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统成功制备了p15蛋白，该蛋白能够同时诱导很好的体液和细胞免疫应答，有助于非洲猪瘟疫苗的进一步研究。

关键词：非洲猪瘟病毒 p15蛋白昆虫杆状病毒表达系统免疫原性评价

非洲猪瘟病毒D205R蛋白单克隆抗体的制备和抗原表位鉴定

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河南农业科学 2025年第2期54卷 124-130页

作者：林志钊赵燕燕任豪杰史赛燕韩世充何文瑞万博张雨杭张改平河南农业大学国家动物免疫学国际联合研究中心河南郑州450002

非洲猪瘟(ASF)是一种致命的传染病,迄今为止,还没有开发出有效的疫苗或药物用于预防或控制ASF。为提供诊断非洲猪瘟病毒(ASFV)的重要材料,利用大肠杆菌系统表达ASFV重组D205R蛋白,制备D205R蛋白的单克隆抗体(mAb),鉴定mAb识别的抗原表... 详细信息

非洲猪瘟(ASF)是一种致命的传染病,迄今为止,还没有开发出有效的疫苗或药物用于预防或控制ASF。为提供诊断非洲猪瘟病毒(ASFV)的重要材料,利用大肠杆菌系统表达ASFV重组D205R蛋白,制备D205R蛋白的单克隆抗体(mAb),鉴定mAb识别的抗原表位。结果显示,成功构建pET32a-D205R表达质粒,并纯化大小约为44 ku的重组D205R蛋白。蛋白质免疫印迹(Western blot)检测结果表明,重组D205R蛋白与ASFV阳性血清发生特异性反应,有良好的免疫原性。利用杂交瘤细胞融合、筛选的方法,得到mAb 19A5。Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测结果表明,mAb 19A5能特异性识别真核表达的重组D205R蛋白,并能检测到野生型D205R蛋白。用丙氨酸扫描法鉴定出167-SDPPVVWLGGRPGD-180是mAb 19A5的抗原表位,S167、W173、L174、G175、P178和D180是与mAb19A5结合的关键氨基酸。保守性和结构分析表明,抗原表位高度保守,且位于蛋白质表面,是线性表位。综上,成功制备mAb 19A5,并鉴定了mAb 19A5识别的抗原表位。

关键词：非洲猪瘟病毒 D205R蛋白单克隆抗体抗原表位

非洲猪瘟病毒蛋白pS183L的原核表达及多克隆抗体制备

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 112-117页

作者：余群邹艳丽陈欢刘珊苗雨润任炜杰王振忠何佳依高晓宇钱莺娟吴晓东郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后... 详细信息

旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后获得重组蛋白pS183L,免疫小鼠并制备抗pS183L的多克隆抗体。通过ELISA鉴定多克隆抗体效价大于1∶128000;Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明,该多克隆抗体能识别293T和PK15细胞外源表达蛋白及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)内源表达蛋白。综上,本研究成功制备抗pS183L多克隆抗体,为深入研究ASFV pS183L的功能提供了关键生物材料。

关键词：非洲猪瘟病毒 pS183L 多克隆抗体

非洲猪瘟病毒pK205R蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立

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畜牧与兽医 2025年第2期57卷 105-111页

作者：王燕邹艳丽何佳依刘珊苗雨润任炜杰王振忠白昀陈欢钱莺娟贾红吴晓东冯志新郑龙三南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266000 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、... 详细信息

旨在建立可以检测非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pK205R抗体的血清学检测方法。基于杆状病毒表达系统构建重组杆粒BacmidpK205R,以纯化的pK205R蛋白为包被抗原,优化各项反应条件,建立间接ELISA抗体检测方法,验证方法的特异性、灵敏性、重复性,并对临床血清样品进行检测。结果显示:pK205R蛋白可以与ASFV阳性血清发生发应,ELISA方法的抗原包被浓度为50 ng/孔,4℃过夜包被,封闭液为2%牛血清白蛋白(BSA),37℃封闭1 h,待检血清以5%脱脂乳进行1∶200稀释,37℃孵育0.5 h;二抗工作浓度为1∶5000,37℃孵育0.5 h,37℃下显色10 min;该方法的阳性临界值为0.186(≥0.186为阳性,非洲猪瘟间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制非洲猪瘟抗体的快速检测试剂盒提供了参考。

关键词：非洲猪瘟病毒 pK205R蛋白间接ELISA 杆状病毒表达

非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定

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中国畜牧兽医 2025年第2期52卷 781-791页

作者：王小格司煊瑛闫志伟王飞尤龙琪刘梗蔡茂梁珺珹梁玉秀杜永坤张改平河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心郑州450046 河南省动物生物制品工程研究中心郑州450046 陕西省府谷县农业农村局动物疫病预防控制中心榆林719499

[目的]采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白,并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。[方法]采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22,并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重... 详细信息

[目的]采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白,并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。[方法]采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22,并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重组蛋白免疫小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合制备单克隆抗体。通过Western blotting鉴定单克隆抗体特异性,通过ELISA方法测定腹水效价;利用在线软件预测p22蛋白抗原表位分布情况并合成重叠多肽,通过Dot blotting鉴定抗体识别的抗原表位。[结果]本研究成功构建了p22重组蛋白的原核表达质粒,获得原核系统表达的p22重组蛋白,分子质量约为22 ku。用纯化后p22蛋白作为免疫原免疫小鼠,成功筛选到4株阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别为1G3D7G11、2G5H6H8、6D10G7D6和8F6F8B9,其腹水效价均达到1∶500 000。Western blotting结果显示,4株单克隆抗体均能与p22蛋白发生特异性反应。单克隆亚型鉴定结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8和6D10G7D6株单克隆抗体的重链均为IgG1类,8F6F8B9株单克隆抗体的重链为IgG2a类,4株单克隆抗体轻链均为Kappa型。Dot blotting检测结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8株单克隆抗体识别抗原表位位于第58—89位氨基酸处;8F6F8B9株单克隆抗体识别抗原表位位于第126—150位氨基酸处。[结论]本研究成功制备了4株ASFV p22蛋白的单克隆抗体,并初步鉴定了单克隆抗体所识别的B细胞表位区间。研究结果为p22蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供了参考依据。

关键词：非洲猪瘟病毒 p22蛋白单克隆抗体抗原表位

非洲猪瘟病毒CP312R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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畜牧与兽医 2025年第4期57卷 101-106页

作者：司安琪王淑娟张永强王筱真任炜杰郑龙三包静月王志亮南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部细菌学重点实验室江苏南京210095 中国动物卫生与流行病学中心/国家非洲猪瘟参考实验室山东青岛266032

为了深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,为血清学诊断技术研究和疫苗研发提供材料,制备了CP312R蛋白的单克隆抗体。将原核表达质粒pGEX-6p-CP312R转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中,用IPTG诱导CP312R蛋白表达并纯化... 详细信息

为了深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的生物学特性,为血清学诊断技术研究和疫苗研发提供材料,制备了CP312R蛋白的单克隆抗体。将原核表达质粒pGEX-6p-CP312R转化至大肠杆菌感受态BL21(DE3)细胞中,用IPTG诱导CP312R蛋白表达并纯化,利用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定重组蛋白表达产物的抗原性,用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,在进行4次免疫后,取加强免疫后的小鼠脾脏进行细胞融合,经阳性克隆筛选后,获得了2株能够稳定分泌抗CP312R蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blot和间接免疫荧光(IFA)等试验对所获得的单克隆抗体的特异性进行鉴定,Western blot结果显示,制备的2株单克隆抗体均能与CP312R蛋白发生特异性反应;IFA结果显示,2株单克隆抗体均能与ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞(PAM)产生特异性绿色荧光。综上,本研究制备的2株单克隆抗体,为非洲猪瘟血清学诊断方法及疫苗的研究奠定了基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 CP312R蛋白单克隆抗体原核表达

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非洲猪瘟病毒蛋白的结构和功能研究进展

畜牧与兽医 2025年第3期57卷 125-134页

作者：罗梦郭子强李佳乐帅文娜李丽薇周艳君姜一峰童武童光志韦祖樟高飞中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 扬州大学/江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 上海市兽医生物技术重点实验室上海200240

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是一种在家猪和野猪之间传播的高度传染性和致死性的病毒性疾病,该病的病原体是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV),致死率高达100%。近年来,ASF疫情严重威胁着我国生猪产业的健康发展... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是一种在家猪和野猪之间传播的高度传染性和致死性的病毒性疾病,该病的病原体是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV),致死率高达100%。近年来,ASF疫情严重威胁着我国生猪产业的健康发展。与之前相比,我国的ASFV流行毒株逐渐由ASFVⅡ型强毒株转变为ASFVⅡ型和Ⅰ型的重组毒株。因此,迫切需要开发具有交叉保护效力的有效疫苗来预防ASFV的感染。ASFV的结构复杂,其基因组是一种大型双链DNA分子,大小在170~193 kb,包含150~167个开放阅读框,编码近200种蛋白。这些蛋白具有复杂的结构、功能以及免疫逃逸机制,使ASF疫苗研发困难重重。截止目前,尚未有针对ASF的有效疫苗或治疗药物问世,仍需要全面解析非洲猪瘟病毒蛋白的结构和功能,深入了解病毒感染机制以及病毒蛋白和宿主蛋白的相互作用。本文旨在综述当前关于ASFV相关蛋白的结构和功能的研究进展,以期为有效预防和控制ASF提供科学依据。

关键词：非洲猪瘟病毒结构蛋白非结构蛋白免疫逃避