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作者：谭彬重庆医科大学

学位级别：硕士

人类多种遗传病和肿瘤的发生均与细胞染色体非整倍性畸变相关。染色体分离行为主要由动粒(Kinetochore)和纺锤体检查点(Spindle assemble checkpoint, SAC)等功能结构和分子机制所调控。本研究将从kinetochore上DNA分子突变和蛋白复合... 详细信息

人类多种遗传病和肿瘤的发生均与细胞染色体非整倍性畸变相关。染色体分离行为主要由动粒(Kinetochore)和纺锤体检查点(Spindle assemble checkpoint, SAC)等功能结构和分子机制所调控。本研究将从kinetochore上DNA分子突变和蛋白复合物变异两个角度来探讨细胞非整性畸变的发生机制。Kinetochore位于染色体着丝粒区,是由着丝粒蛋白(CENPs)和α卫星DNA共同组成的三层盘状结构[1],是支持染色体分离的重要元件。在细胞分裂过程中,染色体的移动、姐妹染色单体分离都通过附着在kinetochore上的纺锤丝牵引来完成。Kinetochore的缺失或者其上的结构、成分发生变化,均可导致纺锤丝的附着失败或者附着不均一,进而引起染色体分离行为的异常。Kinetochore上的CENPs的功能一直受到人们的关注,CENPs表达或结构异常,将影响kinetochore的组装、激活、自我复制等,并对染色体的正常分离产生影响。CENP-B是着丝粒蛋白家庭中关键蛋白之一,它通过与着丝粒区α卫星DNA序列上特定的17bp序列(称为CENP-B框)结合而行使功能。已有研究证实:具有功能活性的着丝粒需要完整的CENP-B框与CENP-B蛋白结合,两者缺一不可,并且两者的结合能力对CENP-A、CENP-C和CENP-E在着丝粒的聚集起着主导作用。因此,结构完整的CENP-B框对于CENP-B蛋白行使其在kinetochore上的各种功能,以及kinetochore在细胞分裂中是否正常发挥其功效起着决定性的作用。通过特殊的银染色方法或抗着丝粒抗体间接免疫荧光技术,可以清晰显示染色体着丝粒区Kinetochore蛋白复合体(即kinetochore-CENPs复合体) [2] ,其结构和成分的变异匀可影响kinetochore的功能。现已证实Kinetochore蛋白复合体上蛋白分子(CENPs)缺乏是诱发染色体不分离的潜在根源[3]。本研究从染色体着丝粒区α卫星DNA上CENP-B框突变的角度,探索唐氏综合征患儿21号染色体不分离的分子基础。此外,利用kinetochore-NOR同步银染技术分析恶性肿瘤细胞(HEP-2、SW626)Kinetochore蛋白复合体变异,以探讨恶性肿瘤细胞染色体非整倍性畸变发生的原因。本实验将会为进一步探索细胞非整倍性畸变发生机制奠定理论和实验基础。第一部分Down’s患儿着丝粒区αI型卫星DNA和CENP-B框序列分析目的:分析Down’s患儿和正常儿童21号染色体着丝粒区αI型卫星DNA(Accession:D29750)上4个CENP-B框及其临近序列是否存在变异,以及这些变异是否与Down’s患儿21号染色体不分离存在一定关系。方法:提取150例Down’s患儿和100例正常儿童外周血DNA,分两段PCR扩增21号染色体着丝粒区αI型卫星序列(覆盖4个CENP-B框),所得产物采用专门设计的测序引物直接测序,并采用DNAssist 2.0软件与NCBI数据库上序列进行对比。结果:1.成功提取150例Down’s患儿和100例正常儿童外周血DNA,琼脂糖电泳和紫外分光光度计检测显示DNA片断完整,纯度高。2.完成21号染色体着丝粒区αI型卫星DNA的PCR分段扩增,琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物条带分明,无错误扩增片段。3.完成所有标本21号染色体着丝粒区αI型卫星DNA的分段测序,测序图谱上4个CENP-B框序列完整,清晰,无杂峰。4.所得结果与NCBI数据库对比分析发现:○1 Down’s患儿和正常儿童的CENP-B框序列高度保守;○2所有患者和正常人的αI型卫星DNA区段的部分位点和NCBI公布的标准序列存在差异,主要为:661位点C缺失,670位点T→G,1035和1036位点之间插入A,1076和1077位点之间插入C,1239位点A→T,1343位点T→C;○3在αI型卫星DNA上发现大量国内外尚未见报道的SNPs位点。结论:1.染色体着丝粒区αI型卫星DNA是一类高度重复的非编码序列,这类高度重复的非编码序列对维持DNA序列保守起到了保护作用。虽然体外实验证实,人工合成带有突变的CENP-B框不能与CENP-B蛋白结合而影响动粒蛋白复合体的形成,但我们在中国人群Down’s患儿和正常儿童染色体着丝粒区的CENP-B框匀未检测到DNA突变,这表明这类高度重复的非编码序列的存在能够有效抑制CENP-B框DNA突变而预防染色体非整倍性畸变的发生。因此,我们认为人类Down’

关键词：唐氏综合征 21号染色体染色体不分离 αI型卫星DNA CENP-B框单核苷酸多态性 HEP-2细胞 SW626细胞 Kinetochore 非整倍性畸变

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BGC823和A549细胞染色体着丝粒点变异

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遗传 2005年第6期27卷 877-881页

作者：何俊琳曹波王应雄重庆医科大学遗传优生教研室重庆400016

癌细胞的一个显著细胞遗传学特征是染色体非整倍性畸变,但其畸变的机制至今仍然不清。因此,从与染色体分离直接相关的着丝粒点变异的角度,采用Cd-NOR同步银染技术对BGC823细胞和A549细胞染色体Cd变异进行了分析,以探索癌细胞非整倍性畸... 详细信息

癌细胞的一个显著细胞遗传学特征是染色体非整倍性畸变,但其畸变的机制至今仍然不清。因此,从与染色体分离直接相关的着丝粒点变异的角度,采用Cd-NOR同步银染技术对BGC823细胞和A549细胞染色体Cd变异进行了分析,以探索癌细胞非整倍性畸变的发生机制。结果表明:(1)BGC823细胞染色体Cd缺失率为1.75%、迟滞复制率为0.28%、小Cd率为1.82%、Cd-NOR融合率为0.95%,与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,BGC823细胞染色体Cd缺失和Cd-NOR融合显著升高(P性差异。(2)A549细胞染色体Cd缺失率为2.73%、迟滞复制率为0.94%、小Cd率为1.73%、Cd-NOR融合率为0.71%,与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,A549细胞染色体Cd缺失和Cd迟滞复制显著升高(P性差异。提示BGC823细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失和Cd-NOR融合,而A549细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失和Cd迟滞复制。

关键词： BGC823细胞 A549细胞着丝粒点非整倍性畸变

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肝癌、肝硬化患者淋巴细胞染色体着丝粒点结构的变化

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临床肝胆病杂志 1999年第3期15卷 149-150页

作者：唐南洪王小众福建医科大学附属协和医院肝胆外科研究所福州350001 福建医科大学附属协和医院消化科

目的探讨染色作着丝位点结构（Cd）的变化在肝癌发生过程的意义。方法采用杂色体Cd带技术检测28例肝癌、25例肝硬化及26例正常人染色体Cd结构丢失频率。结果肝癌组Cd结构在总消失率、A和C组染色体中明显高于肝硬化和正常对照组（P＜0．0... 详细信息

目的探讨染色作着丝位点结构（Cd）的变化在肝癌发生过程的意义。方法采用杂色体Cd带技术检测28例肝癌、25例肝硬化及26例正常人染色体Cd结构丢失频率。结果肝癌组Cd结构在总消失率、A和C组染色体中明显高于肝硬化和正常对照组（P＜0．01），在D、E组染色体中亦高于正常组（P＜0．05）。结论肝癌患者外周血细胞染色体Cd结构丢失有增高趋势，提示Cd结构消失率增加是引起肝癌细胞染色体非整倍性畸变的途径之一。

关键词：肝细胞癌肝硬化染色体着丝粒点非整倍性畸变

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AN3CA和BMDC1细胞染色体着丝粒点变异的研究

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中国优生与遗传杂志 2014年第6期22卷 28-30,F0004页

作者：曹波四川省攀枝花市妇幼保健院四川617000

目的探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与AN3CA细胞和BMDC1细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究AN3CA细胞和BMDC1细胞染色体Cd的... 详细信息

目的探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与AN3CA细胞和BMDC1细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究AN3CA细胞和BMDC1细胞染色体Cd的变异。结果 ***3CA细胞染色体Cd缺失率为1.87%、Cd迟滞复制率为0.19%、小Cd率为1.52%、Cd-NOR融合率为1.88%、与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,AN3CA细胞染色体Cd缺失、Cd-NOR融合显著升高(P非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失、Cd-NOR融合;***1细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失、Cd迟滞复制。

关键词：肿瘤细胞着丝粒点非整倍性畸变

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宫颈癌CasKi细胞和绒癌Bewo细胞染色体着丝粒点变异的研究

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现代肿瘤医学 2012年第12期20卷 2470-2472页

作者：曹波四川攀枝花市妇幼保健院妇产科四川攀枝花617000

目的:探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与宫颈癌CasKi细胞和绒癌Bewo细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法:肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究CasKi细胞和Bewo细胞... 详细信息

目的:探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与宫颈癌CasKi细胞和绒癌Bewo细胞染色体非整倍性畸变的关系。方法:肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究CasKi细胞和Bewo细胞染色体Cd的变异。结果:与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,CasKi细胞染色体Cd缺失显著升高(P性差异。与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,Bewo细胞染色体Cd缺失显著升高(P性差异。结论:CasKi细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失、Cd迟滞复制和Cd-NOR融合。Bewo细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失和Cd-NOR融合。

关键词：肿瘤细胞着丝粒点非整倍性畸变

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人绒癌细胞JEG-3和人卵巢畸胎瘤细胞PA-1染色体着丝粒点变异的研究

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癌变．畸变．突变 2008年第1期20卷 64-67页

作者：曹波温沙洛四川省攀枝花市妇幼保健院四川攀枝花617000

背景与目的:探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与人绒癌细胞JEG-3和人卵巢畸胎瘤细胞PA-1染色体非整倍性畸变的关系。材料与方法:肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛细胞染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究... 详细信息

背景与目的:探讨染色体着丝粒点(Cd)的变异与人绒癌细胞JEG-3和人卵巢畸胎瘤细胞PA-1染色体非整倍性畸变的关系。材料与方法:肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛细胞染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究JEG-3细胞和PA-1细胞染色体Cd的变异。结果:JEG-3细胞染色体Cd缺失率为1.43%、Cd迟滞复制率为0.21%、小Cd率为1.52%、Cd-NOR融合率为1.16%、与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,JEG-3细胞染色体Cd缺失、Cd-NOR融合率显著升高(P0.0125)。PA-1细胞染色体Cd缺失率为1.22%、Cd迟滞复制率为0.95%、小Cd率为1.81%、Cd-NOR融合率为1.03%、与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd相比较,PA-1细胞染色体Cd缺失率、Cd迟滞复制率、Cd-NOR融合率均显著升高(P0.0125)。结论:JEG-3细胞染色体非整倍性畸变可能主要与Cd缺失、Cd-NOR融合有关;PA-1细胞染色体非整倍性畸变可能主要与Cd缺失、Cd迟滞复制和Cd-NOR融合有关。

关键词：肿瘤细胞着丝粒点非整倍性畸变

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人子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞染色体着丝粒点变异的研究

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肿瘤预防与治疗 2008年第2期21卷 133-135,139,233页

作者：曹波温沙洛四川攀枝花市妇幼保健院攀枝花617000

目的:探讨人子宫内膜癌细胞HEC-1B染色体着丝粒点(Cd)的变异与其非整倍性畸变的关系。方法:用Cd-NOR同步银染分析技术研究HEC-1B细胞染色体Cd的变异。结果:HEC-1B细胞染色体Cd缺失率为1.94%、Cd迟滞复制率为0.99%、Cd-NOR融合率为1.35%... 详细信息

目的:探讨人子宫内膜癌细胞HEC-1B染色体着丝粒点(Cd)的变异与其非整倍性畸变的关系。方法:用Cd-NOR同步银染分析技术研究HEC-1B细胞染色体Cd的变异。结果:HEC-1B细胞染色体Cd缺失率为1.94%、Cd迟滞复制率为0.99%、Cd-NOR融合率为1.35%、小Cd率为1.73%、;与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd变异相比较,HEC-1B细胞染色体Cd缺失、Cd迟滞复制和-NOR融合显著升高(P非整倍性畸变的途径可能主要涉及Cd缺失、Cd迟滞复制和-NOR融合。

关键词：人子宫内膜癌细胞着丝粒点非整倍性畸变

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A 2780细胞染色体着丝粒点变异的研究

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当代医学 2012年第33期18卷 2-3页

作者：曹波四川省攀枝花市妇幼保健院产科 617000

目的探讨染色体着丝粒点(centromeric dots,Cd)的变异与A2780细胞非整倍性畸变的关系。方法肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究A2780细胞染色体Cd的变异。结果 A... 详细信息

目的探讨染色体着丝粒点(centromeric dots,Cd)的变异与A2780细胞非整倍性畸变的关系。方法肿瘤细胞株传代后用常规方法制备染色体,用直接法制备胚胎绒毛组织染色体标本,采用Cd-NOR同步银染分析技术研究A2780细胞染色体Cd的变异。结果 A2780细胞染色体Cd缺失率、Cd迟滞复制率、小Cd率和Cd-NOR融合率分别为1.41%、0.21%、1.48%和1.61%;A2780细胞染色体Cd缺失率、Cd-NOR融合率明显高于人胚胎绒毛细胞;而小Cd率、Cd迟滞复制率两者间没有明显差异。结论 A2780细胞染色体非整倍性畸变可能主要源于Cd缺失、Cd-NOR融合。

关键词：肿瘤细胞着丝粒点非整倍性畸变

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肺癌患者外周血细胞染色体着丝粒点（cd）研究

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重庆医科大学学报 1994年第3期19卷 217-218页

作者：温剑虎李良彬吴庆琛王应雄翁亚光郑增淳吴春英重庆医科大学第一医院胸外科

采用染色体ｃｄ带技术对１７例肺癌患者和１０例肺部良性病变患者外周血细胞染色体ｃｄ结构丢失作了初步分析，结果发现肺癌患者ｃｄ结构丢失频率显著高于肺部良性病变患者和正常人对照组（Ｐ＜０．０１），而肺部良性病变组和正常人对... 详细信息

采用染色体ｃｄ带技术对１７例肺癌患者和１０例肺部良性病变患者外周血细胞染色体ｃｄ结构丢失作了初步分析，结果发现肺癌患者ｃｄ结构丢失频率显著高于肺部良性病变患者和正常人对照组（Ｐ＜０．０１），而肺部良性病变组和正常人对照组之间无显著差异（Ｐ＞０．０５）。本研究结果提示肺场患者外周血细胞染色体ｃｄ结构丢失有增高的趋势。本文对ｃｄ结构丢失与癌患病人细胞非整倍性畸变的关系进行了讨论。

关键词：癌着丝粒点非整倍性畸变肺肿瘤

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HepG2细胞染色体着丝粒点变异的研究

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癌变．畸变．突变 2004年第6期16卷 335-337页

作者：曹波王应雄重庆医科大学遗传优生教研室重庆400016

背景与目的:探讨HepG2瘤细胞染色体着丝粒点(Cd)的变异与其非整倍性畸变的关系。材料与方法:用Cd-NOR同步银染分析技术研究HepG2细胞染色体Cd的变异。结果:HepG2细胞染色体Cd缺失率为2.30％、Cd迟滞复制率为1.02％、小Cd率为2.58％、Cd... 详细信息

背景与目的:探讨HepG2瘤细胞染色体着丝粒点(Cd)的变异与其非整倍性畸变的关系。材料与方法:用Cd-NOR同步银染分析技术研究HepG2细胞染色体Cd的变异。结果:HepG2细胞染色体Cd缺失率为2.30％、Cd迟滞复制率为1.02％、小Cd率为2.58％、Cd-NOR融合率为0.64％;与正常人胚胎绒毛细胞染色体Cd变异相比较,HepG2细胞染色体Cd缺失、Cd迟滞复制和小Cd升高,而Cd-NOR融合差异无显著性。结论:HepG2细胞染色体非整倍性畸变的途径可能主要涉及Cd缺失、Cd迟滞复制、小Cd。

关键词： HepG2细胞着丝粒点非整倍性畸变

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