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紫背万年青调控非小细胞肺癌A549细胞凋亡活性成分筛选和含量测定标准研究

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今日药学 2023年第6期33卷 422-424,462页

作者：洪笃云廖锦彬张诚光欧阳炜程良凯广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院) 广东广州510095

目的对紫背万年青中的化学成分进行非小细胞肺癌A549细胞凋亡活性测定,并以筛选出的活性成分为指标建立含量测定方法,用以评价该植物的功效。方法将a549细胞和不同浓度的紫草素、木犀草素、补骨脂素(8、16、32μg·mL^(-1))孵育后,使... 详细信息

目的对紫背万年青中的化学成分进行非小细胞肺癌A549细胞凋亡活性测定,并以筛选出的活性成分为指标建立含量测定方法,用以评价该植物的功效。方法将a549细胞和不同浓度的紫草素、木犀草素、补骨脂素(8、16、32μg·mL^(-1))孵育后,使用Western-Blot法检测caspase-3蛋白表达,对所得结果进行统计分析,研究各成分对a549细胞凋亡的调控活性;选择紫草素为含量测定指标,使用Agilent TC C_(18)(柱长25 cm,内径0.46 cm,填料直径5μm)色谱柱,乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱,程序为0~10 min, 20%~20%A;10~20 min, 20%~80%A;20~30 min, 80%~20%A;30~35 min, 20%~20%A;流速1.0 mL·min^(-1),检测波长274 nm,柱温25℃,进样量10μL;测定10批紫背万年青样品中补骨脂素的含量。结果 3个待测成分中,补骨脂素对caspase-3蛋白表达存在明显的调控效果,提示该成分具有较强的促进a549细胞凋亡活性;10批样品含量测定结果显示,补骨脂素的含量为0.873 7~1.065 4 mg·g^(-1)。结论本文对紫背万年青中的化学成分进行了a549细胞凋亡活性进行了研究,并基于此建立了含量测定标准,能够较为科学、准确地对紫背万年青的活性进行可量化评价。

关键词：非小细胞肺癌A549细胞紫背万年青含量测定标准

HES1基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响

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HES1基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响

作者：董姜慧西华师范大学

学位级别：硕士

肺癌作为致死率和发病率最高的恶性肿瘤,因其转移率高、复发率高、死亡率高和预后率低等特点逐渐成为世界范围内的一个公共卫生问题。肺癌的发生受多基因、多信号通路调控,因此,了解肺癌的发生发展和作用机制对临床治疗肺癌有重要意义... 详细信息

肺癌作为致死率和发病率最高的恶性肿瘤,因其转移率高、复发率高、死亡率高和预后率低等特点逐渐成为世界范围内的一个公共卫生问题。肺癌的发生受多基因、多信号通路调控,因此,了解肺癌的发生发展和作用机制对临床治疗肺癌有重要意义。发状分裂相关增强子1（Hairy and enhancer of split homolog-1,HES1）属于前神经元碱性螺旋-环-螺旋（proneural basic helix-loop-helix,bHLH）转录因子家族的成员之一,多项研究表明HES1作为癌基因,不仅在多种实体瘤中表达异常,还与多种恶性肿瘤细胞的增殖和转移相关,并且在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中也存在HES1蛋白高表达,但是关于HES1对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭的影响还缺乏有效的研究。本实验通过慢病毒质粒感染法敲降HES1基因的表达,探讨HES1基因对人NSCLC增殖、迁移和侵袭等生物学过程的影响及作用机制。本文进行了如下研究:体外合成一条无关的shRNA和两条靶向HES1基因的shRNA,分别插入pLKO.1质粒中构成3个shRNA表达载体。RT-PCR和Western blot筛选出干扰HES1基因最有效的shRNA并检测HES1基因的敲降效率。MTT检测对a549细胞活性的影响。伤口愈合实验和Transwell迁移实验检测对a549细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验检测对a549细胞侵袭能力的影响。RT-PCR检测E-cadherin、Vimentin、SLUG、ZEB1、MMP2转录水平的表达量变化。Western blot检测E-cadherin、Vimentin、SLUG、ZEB1、MMP2、MMP9、PTEN、p-AKT、AKT蛋白水平的表达量变化。本文的研究结果如下:（1）成功构建靶向HES1基因的shRNA,与sh-TRC组相比,sh-HES1-2组中HES1-mRNA敲低了约80%。（2）sh-HES1-2组的a549细胞增殖显著低于sh-TRC组。（3）sh-HES1-2组的a549细胞的迁移距离低于sh-TRC组。（4）sh-HES1-2组的a549细胞经变形穿过Transwell聚碳酸酯膜的细胞数量少于sh-TRC组。（5）sh-HES1-2组的a549细胞降解matrigel胶后穿过聚碳酸酯膜的细胞数量少于sh-TRC组。（6）敲降HES1基因后E-cadherin mRNA表达升高,SLUG、Vimentin、MMP2和ZEB1 mRNA的表达降低。（7）敲降HES1基因后PTEN、E-cadherin蛋白的表达升高,而Vimentin、SLUG、ZEB1、MMP2和MMP9蛋白的表达降低。由此初步得出,敲降HES1基因能够抑制NSCLC a549细胞的增殖、迁移和侵袭,HES1参与NSCLC a549细胞的分子机制可能是通过下调PI3K/AKT信号通路及抑制EMT进程。因此,本文可为寻找有效的肺癌靶点提供理论依据。

关键词：非小细胞肺癌A549细胞 HES1 增殖迁移侵袭

厚朴酚联合吉非替尼对a549非小细胞肺癌细胞的干预作用

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中国应用生理学杂志 2021年第5期37卷 506-510页

作者：任吉莲崔灵芝郝小夏李晓颜常彦祥山西医科大学汾阳学院医学检验系汾阳032200 山西省肿瘤医院干部诊疗科太原030013 山西省汾阳医院检验科汾阳032200 西安医学院第一附属医院陕西西安710077

目的:探讨厚朴酚与吉非替尼协同影响非小细胞肺癌A549细胞的作用。方法:以浓度为6.25~500μmol/L厚朴酚、0.625~100μmol/L吉非替尼分别处理a549细胞24 h,CCK-8实验检测细胞活力(n=3),选24 h及100μmol/L厚朴酚与5μmol/L吉非替尼作后... 详细信息

目的:探讨厚朴酚与吉非替尼协同影响非小细胞肺癌A549细胞的作用。方法:以浓度为6.25~500μmol/L厚朴酚、0.625~100μmol/L吉非替尼分别处理a549细胞24 h,CCK-8实验检测细胞活力(n=3),选24 h及100μmol/L厚朴酚与5μmol/L吉非替尼作后续处理(n=3);采用对照组、厚朴酚组、吉非替尼组和厚朴酚+吉非替尼组的析因分析设计;克隆形成检测细胞增殖;蛋白印迹测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡及分选CD44^(+)和CD133^(+)细胞。结果:与对照组比,厚朴酚和吉非替尼组的克隆形成率显著降低(P细胞数量显著减少(P细胞标记蛋白SOX2和OCT4表达显著下调(P非替尼组比较,厚朴酚+吉非替尼组进一步促进了上述改变(P非替尼的交互作用(P非替尼促进a549细胞凋亡和抑制其干细胞样特性,且联合用药效果优于单一给药。二者对a549细胞的抑癌作用有交互影响。

关键词：厚朴酚干细胞样特性吉非替尼非小细胞肺癌A549细胞

UPLC-MS测定紫背万年青水提和醇提物给药后a549细胞中的乳酸含量

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今日药学 2023年

作者：洪笃云程良凯广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院)

目的建立紫背万年青水提和醇提物给药后非小细胞肺癌A549细胞中的乳酸含量的超高效液相色谱-质谱法测定方法，评价上述提取物的治疗活性。方法超高效液相色谱-质谱分析使用ESI离子源，正离子扫描，MRM模式，色谱柱为WatersACQUITYUPLCBE... 详细信息

目的建立紫背万年青水提和醇提物给药后非小细胞肺癌A549细胞中的乳酸含量的超高效液相色谱-质谱法测定方法，评价上述提取物的治疗活性。方法超高效液相色谱-质谱分析使用ESI离子源，正离子扫描，MRM模式，色谱柱为WatersACQUITYUPLCBEHC18(100mm×2.1 mm，1.7 μm)，流动相为含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的乙腈溶液；细胞实验使用非小细胞肺癌A549细胞，分别加入不同浓度(20～80 μg·mL-1)的紫背万年青水提和醇提物，培养24 h后进UPLC-MS测定乳酸浓度。结果乳酸的UPLC-MS检测方法线性良好，能够对2～1 000 μg·mL-1浓度的乳酸进行准确测定，最低定量限为1 ng·mL-1，回收率为92.79%～108.57%，RSD为4.48%～10.05%，实测样本结果显示，与对照组比较，醇提物对乳酸含量影响较水提物更大。结论本研究阐明了不同溶剂制备的紫背万年青提取物对非小细胞肺癌A549细胞中的乳酸含量的影响，并建立了快速、灵敏、大通量的UPLC-MS测定方法。

关键词：紫背万年青 UPLC-MS 乳酸非小细胞肺癌A549细胞

UPLC-MS测定紫背万年青提取物给药后a549细胞中的乳酸含量

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今日药学 2023年第12期33卷 911-913,927页

作者：洪笃云程良凯广东省第二中医院(广东省中医药工程技术研究院) 广东广州510095

目的建立紫背万年青水提和醇提物给药后非小细胞肺癌A549细胞中的乳酸含量的超高效液相色谱-质谱法测定方法,评价上述提取物的治疗活性。方法超高效液相色谱-质谱分析使用ESI离子源,正离子扫描,MRM模式,色谱柱为Waters ACQUITY UPLC B... 详细信息

目的建立紫背万年青水提和醇提物给药后非小细胞肺癌A549细胞中的乳酸含量的超高效液相色谱-质谱法测定方法,评价上述提取物的治疗活性。方法超高效液相色谱-质谱分析使用ESI离子源,正离子扫描,MRM模式,色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的乙腈溶液;细胞实验使用非小细胞肺癌A549细胞,分别加入不同浓度(20~80μg·mL^(-1))的紫背万年青水提和醇提物,培养24 h后进UPLC-MS测定乳酸浓度。结果乳酸的UPLC-MS检测方法线性良好,能够对2~1 000μg·mL^(-1)浓度的乳酸进行准确测定,最低定量限为1 ng·mL^(-1),回收率为92.79%~108.57%,RSD为4.48%~10.05%,实测样本结果显示,与对照组比较,醇提物对乳酸含量影响较水提物更大。结论本研究阐明了不同溶剂制备的紫背万年青提取物对非小细胞肺癌A549细胞中的乳酸含量的影响,并建立了快速、灵敏、大通量的UPLC-MS测定方法。

关键词：紫背万年青 UPLC-MS 乳酸非小细胞肺癌A549细胞

白桦脂酸衍生物的合成及体外抗肿瘤活性的初步探究

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白桦脂酸衍生物的合成及体外抗肿瘤活性的初步探究

作者：叶淑柯郑州大学

学位级别：硕士

目的:癌症是现阶段在全球范围内发病率和死亡率都处于较高水平的一类疾病,它的发生和发展严重危害着人类的生命健康。据报道,在全球范围内每年至少有一千万以上的人身患癌症,其发病率和死亡率也在呈逐年上升的趋势。目前临床上治疗癌症... 详细信息

目的:癌症是现阶段在全球范围内发病率和死亡率都处于较高水平的一类疾病,它的发生和发展严重危害着人类的生命健康。据报道,在全球范围内每年至少有一千万以上的人身患癌症,其发病率和死亡率也在呈逐年上升的趋势。目前临床上治疗癌症的主要方法还是通过化疗、放疗等,铂类、烷化剂和抗代谢类化学药物在治疗癌症的同时,也会给机体的正常细胞带来严重且不可逆的伤害,严重影响了癌症的治疗效果,也给患者带来很大的痛苦。因此,研发新型的、有效的且选择性良好的抗肿瘤药物,降低药物的毒副作用,对于临床癌症患者的治疗是刻不容缓的。白桦脂酸是一种存在于自然界多种植物中的五环三萜酸,具有十分广泛的生物学活性,如抗炎、抗疟疾、抗HIV等,近年来,大量的实验研究表明白桦脂酸在抗肿瘤方面也具有良好的药理活性。但是由于其水溶性较差,生物利用度不高,且在治疗癌症时对机体的正常细胞也有所伤害,选择性较差,治疗效果不是特别理想,因此,我们尝试在白桦脂酸的结构基础上进行改造得到新的白桦脂酸衍生物,有望提高其水溶性和生物利用度,降低毒副作用,为临床开发新的抗肿瘤药物提供实验依据。本研究设计并合成白桦脂酸衍生物zx-1和zx-2,体外检测两个化合物的抗肿瘤活性,对其抗肿瘤作用机制做初步探讨。方法:1.白桦脂酸衍生物zx-1和zx-2的设计与合成2.采用MTT法检测化合物zx-1和zx-2对多种癌细胞的抑制作用,设置对照组和空白组。3.在倒置显微镜下观察经化合物zx-1和zx-2作用后,非小细胞肺癌A549细胞的生长状态和形态发生的变化,并拍照。4.通过细胞划痕实验检测化合物zx-1和zx-2对a549细胞迁移的影响,在显微镜下观察,取样并拍照。5.运用流式细胞术（Annexin V-FITC/PI双染法）检测经化合物zx-1和zx-2作用后,a549细胞凋亡率的变化,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。6.运用流式细胞术（PI单染法）检测经化合物zx-1和zx-2作用后,a549细胞周期分布的发生的改变,用流式细胞仪检测细胞的周期分布。7.Western blot方法检测化合物zx-2作用后的a549细胞中的P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3几种蛋白表达的影响。结果:1.合成并得到编号为zx-1和zx-2的白桦脂酸核苷衍生物。2.MTT法检测结果表明,不同浓度的化合物zx-1和zx-2分别作用于非小细胞肺癌（a549）细胞、胃腺癌（SGC-7901）细胞、肝癌（LUC-7721）细胞、乳腺癌（MCF-7）细胞48 h后,对细胞均产生不同程度的抑制作用,其抑制作用具有明显的剂量依赖性。3.通过显微镜下的细胞形态学观察可发现,化合物zx-1和zx-2作用于a549细胞24 h后,细胞的形态发生明显的变化,主要表现为细胞体积变小变圆,边缘模糊化,细胞质发生皱缩,呈现明显的凋亡趋势。4.通过细胞划痕实验,在显微镜下观察可发现,化合物zx-1和zx-2作用后的a549细胞与对照组相比,划痕面积明显增大,细胞向划痕区域迁移的能力显著降低,与对照组相比具有显著性差异（P＜0.05）说明两化合物均可抑制a549细胞的迁移。5.流式细胞术检测结果显示,在化合物zx-1和zx-2作用于48 h后,a549细胞的凋亡率均出现明显的提高,且随着浓度提高,细胞的凋亡率也随之增加,呈现明显的剂量依赖性。由检测结果也可知道,同等浓度条件下,化合物zx-2诱导a549细胞凋亡的作用比zx-1显著。6.流式细胞术检测结果显示,在化合物zx-1和zx-2作用于48h后,a549细胞的细胞周期分布发生了明显的变化,化合物zx-1作用于a549细胞后,可将细胞分裂阻滞于G0/G1期;经化合物zx-2处理后,a549细胞的细胞分裂被阻滞于将S期,且其作用均呈现出明显的剂量依赖性。7.Western blot实验结果表明,化合物zx-2作用于a549细胞48 h后,细胞内P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3几种蛋白的表达均发生了变化。与对照组相比较,zx-2可以促进Bax和Caspase-3蛋白的表达,同时下调Bcl-2和P53蛋白的表达,并且均呈现剂量依赖性。结论:白桦脂酸衍生物zx-1和zx-2能够抑制多种肿瘤细胞的生长和增殖,能够诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡坏死,调节细胞周期,抑制细胞的迁移,化合物zx-2能够促进Bax和Caspase-3蛋白的表达,下调Bcl-2和P53蛋白的表达,这些可能与化合物zx-1和zx-2发挥抗肿瘤作用的机制有关。

关键词：白桦脂酸衍生物非小细胞肺癌A549细胞细胞周期凋亡 Western blot

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北部湾柱状角孔珊瑚水螅体次级代谢产物研究

热带海洋学报 2024年第2期43卷 135-139页

作者：冯广福何洁怡白猛易湘茜刘昕明罗连响高程海广西中医药大学海洋药物研究院广西南宁530200 广西海洋药物重点实验室广西南宁530200 广东医科大学海洋生物医学研究所广东湛江524023 广东湛江海洋生物医学研究所广东湛江524023

为了研究柱状角孔珊瑚(Goniopora columna)水螅体的次级代谢产物,采用硅胶柱层析、凝胶柱层析及半制备高效液相色谱对柱状角孔珊瑚水螅体粗提物中次级代谢产物进行分离纯化,利用现代波谱技术鉴定其结构,并对获得的次级代谢产物进行非小... 详细信息

为了研究柱状角孔珊瑚(Goniopora columna)水螅体的次级代谢产物,采用硅胶柱层析、凝胶柱层析及半制备高效液相色谱对柱状角孔珊瑚水螅体粗提物中次级代谢产物进行分离纯化,利用现代波谱技术鉴定其结构,并对获得的次级代谢产物进行非小细胞肺癌A549细胞(non-small cell lung cancer a549 cells, NSCLC)的抗癌活性筛选。结果表明,从柱状角孔珊瑚水螅体中分离鉴定出8种化合物,分别为alkalgoniopora A (1)、茶碱(2)、胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(3)、尿嘧啶(4)、胸腺嘧啶(5)、pregna-5,20-dien-3β-ol(6)、cinnamicacid(7)和原儿茶酸(8),其中化合物1为新发现的生物碱。初步细胞毒活性测试显示,化合物1、2和6对NSCLC增殖有较弱的抑制活性,其余化合物对NSCLC增殖无明显抑制活性。

关键词：柱状角孔珊瑚水螅体次级代谢产物非小细胞肺癌A549细胞

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虎眼万年青总皂苷提取及其抗肿瘤活性研究

虎眼万年青总皂苷提取及其抗肿瘤活性研究

作者：邓元荣福建农林大学

学位级别：硕士

虎眼万年青（Ornithogalum thyrsoides）为百合科（Liliaceae）虎眼万年青属（Ornithogalum）多年生草本植物,原产于非洲南部,在我国北方多地有种植和栽培,皂苷类化合物是最主要的化学成分,也是其抗肿瘤活性的主要药效物质基础。虎眼万... 详细信息

虎眼万年青（Ornithogalum thyrsoides）为百合科（Liliaceae）虎眼万年青属（Ornithogalum）多年生草本植物,原产于非洲南部,在我国北方多地有种植和栽培,皂苷类化合物是最主要的化学成分,也是其抗肿瘤活性的主要药效物质基础。虎眼万年青总皂苷药效显著,通过多靶点、多通道用于治疗肝癌、乳腺癌、白血病等研究已经取得一定的成果,且毒副作用小,继续扩大抗癌谱研究,可有效促进其药用价值的开发与利用。肺癌是我国发病率和死亡率居前五位的肿瘤之一,在男性患者中居首位,虽虎眼万年青对癌症研究较多,但对肺癌效应研究不多,有研究发现OSW-1体外对非小细胞肺癌A549细胞IC50很低,预示有很好抗肺癌作用,但未继续深入研究,且OSW-1无法大规模合成,也就限制了其抗癌应用研究和对肺癌机理的研究。有关虎眼万年青总皂苷对肺癌作用尚未见有研究报道,本研究以非洲南部的安哥拉国丰富的虎眼万年青属O.thyrsoides资源为原料,在国内首次从原产地、原种植物中分离提取得总皂苷,以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,考察其体内、体外抗肿瘤活性,初步探明其作用机制,并对总皂苷安全性作出评价。1.采用80%乙醇加热回流提取、石油醚萃取、水相部以D-101大孔吸附柱分离获得总皂苷,最终产品得率为1.02%。采用香草醛-高氯酸显色和紫外分光光度法测定总皂苷含量为37.0%。本方法较采用类同工艺从国内引种植物中提取总皂苷的得率（0.91%）高,表明安哥拉原种虎眼万年青植物O.thyroides中总皂苷含量较高。2.利用MTT法筛选抗肿瘤细胞,发现虎眼万年青总皂苷对非小细胞肺癌细胞株（a549）、人胃癌细胞株（BGC-823）、人结肠癌细胞株（HT-29）和人肝癌细胞株（HepG-2）4种肿瘤细胞均具有较强的抑制活性,其中对a549细胞的抑制增殖活性最强,呈一定的量效关系与时效关系,在7.81～125μg/mL药物浓度范围内呈较好的线性相关,最高抑制率达到91.6%,作用时间以48h为佳,IC50为 22.28μg/mL。3.以非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,考察虎眼万年青总皂苷体外抗肿瘤作用。随着给药浓度从15.6μg/mL至125.0μg/mL,a549细胞产生数目减少,胞质回缩、折光性增强、细胞体积缩小等形态学改变;Hoechst荧光染色法观察细胞核形态,发现细胞核染色质出现高度固缩凝集、边缘化,呈典型的凋亡细胞形态特征;流式细胞仪检测到细胞凋亡率也随之增高,由15.53%增大至71.05%,细胞Go/G1期和G2/M期DNA含量降低,S期DNA含量明显增加,细胞周期阻滞在S期。结果表明总皂苷可抑制a549细胞增殖,诱导细胞凋亡,从而有效控制肿瘤的发展。4.小鼠体内移植性非小细胞肺癌a549瘤株,考察虎眼万年青总皂苷体内抗肿瘤作用,结果各剂量组（2.4mg/kg、1.2mg/kg、0.6mg/kg,分别为1/10、1/20和1/40 LD50）抑瘤率均＞30%,最高51.61%,可达到抗肿瘤植物药物抑瘤有效的认可标准,剂量以1.2 mg.kg-1为佳;各脏器指数和免疫血细胞,包括脾脏指数、胸腺指数、LYM计数与百分率、MON计数与百分率、中性分叶百分率均未见明显差异;血细胞指标中HB、WBC和PLT计数升高。结果表明总皂苷对体内a549细胞瘤体内具有直接抑制作用,对免疫器官没有明显的抑制影响,不会产生抗肿瘤药物常见的免疫抑制不良反应。5.采用小鼠腹腔注射急性毒性观察,对虎眼万年青总皂苷安全性作出初步评价,Bliss法测定半数致死量LD50值,结果LD50=23.808mg/kg,动物死亡的时间多在8h～48h内,以脏器散在充血表现为主。首次利用原产地原种虎眼万年青植物资源,扩大总皂苷抗肿瘤谱研究,结果表明总皂苷在体内、体外均对非小细胞肺癌A549细胞具有抑制肿瘤作用,且安全性高,副作用小,对免疫器官没有明显的抑制影响,不会产生抗肿瘤药物的不良反应,为虎眼万年青总皂苷治疗肺癌及抗癌新药研发以及后续药效与毒理研究提供一定的理论与实验依据。

关键词：虎眼万年青总皂苷非小细胞肺癌A549细胞抗肿瘤 LD50

金宁方中β-谷甾醇增进槲皮素诱导肺癌a549细胞凋亡作用

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世界临床药物 2024年第3期45卷 276-284页

作者：俞杞泉叶玉涵吕春明张泽良杨扬韩素静上海中医药大学附属龙华医院胸外科上海200032 上海中医药大学科技实验中心上海201203 上海中医药大学附属龙华医院老年医学科上海200032

目的探讨β-谷甾醇联合槲皮素对a549细胞抑制作用以及机制。方法将a549细胞分为对照组、槲皮素组、槲皮素+β-谷甾醇组、雌二醇组、雌二醇+槲皮素组以及雌二醇+槲皮素+β-谷甾醇组。采用细胞存活率检测a549细胞的抑制作用。采用流式细... 详细信息

目的探讨β-谷甾醇联合槲皮素对a549细胞抑制作用以及机制。方法将a549细胞分为对照组、槲皮素组、槲皮素+β-谷甾醇组、雌二醇组、雌二醇+槲皮素组以及雌二醇+槲皮素+β-谷甾醇组。采用细胞存活率检测a549细胞的抑制作用。采用流式细胞技术和免疫荧光法检测肺癌细胞的促凋亡情况。应用免疫印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的调控作用。结果槲皮素可抑制a549细胞生存率且具量效关系(Pa549细胞生长;与槲皮素组或槲皮素+β-谷甾醇比较,雌二醇+槲皮素+β-谷甾醇组更抑制a549细胞增殖,提高细胞凋亡比例及caspase-3的表达水平(Pa549细胞有抑制作用,其机制可能通过PI3K/Akt/mTOR通路对细胞凋亡起促进作用。

关键词： β-谷甾醇槲皮素非小细胞肺癌A549细胞