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青紫颗粒对实验性过敏性紫癜皮肤损害的保护作用及机制研究

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青紫颗粒对实验性过敏性紫癜皮肤损害的保护作用及机制研究

作者：丰晨然北京中医药大学

学位级别：硕士

过敏性紫癜(Henoch-Schonlein Purpura,HSP)是一种由自身免疫反应介导的全身性血管炎,是儿童时期最常见的系统性血管炎,其发病率呈逐年上升趋势。本病病因及发病机制尚未完全明确。HSP以小血管炎为病理基础,除皮肤损害外,可累及关节、... 详细信息

过敏性紫癜(Henoch-Schonlein Purpura,HSP)是一种由自身免疫反应介导的全身性血管炎,是儿童时期最常见的系统性血管炎,其发病率呈逐年上升趋势。本病病因及发病机制尚未完全明确。HSP以小血管炎为病理基础,除皮肤损害外,可累及关节、消化道、腹腔及肾脏,其中过敏性紫癜肾炎是最常见的并发症。HSP属中医“血证”、“葡萄疫”、“发斑”范畴。20世纪70年代,北京儿童医院王鹏飞先生创立“青紫汤”,后经加减化裁制成院内制剂“青紫合剂”,临床具有祛风解毒,凉血消斑的功效,对HSP有确切疗效。青紫颗粒是青紫合剂经改剂型制备的颗粒剂。目前多认为HSP属可溶性免疫复合物引起的Ⅲ型超敏反应,而Arthus反应是一种实验性局部Ⅲ型超敏反应。本研究基于青紫颗粒功效主治及HSP的发病机制,构建以皮肤病变为主的Arthus反应大鼠及兔模型,观察青紫颗粒对皮肤损害的影响并初步探讨其作用机制。1青紫颗粒对过敏性紫癜大鼠的干预作用目的:通过建立大鼠Arthus反应模型,模拟皮肤型过敏性紫癜,观察青紫颗粒对其皮肤反应及相关指标的影响。方法:SPF级SD大鼠,随机分为正常组,模型组,地塞米松组(0.55 mg·kg-1),芦丁片组(12.05 ***-1),青紫颗粒高剂量组(18.32 g·kg-1),青紫颗粒中剂量组(9.16 g-kg-1),青紫颗粒低剂量组(4.58 ***-1)。前3周每只每周肌内注射卵蛋白-弗氏完全佐剂0.5 mL,后3周每只每周肌内注射卵蛋白-弗氏不完全佐剂0.5 mL,正常组注射等量生理盐水。末次致敏当日按照上述分组分别灌胃给药,连续给药14天,正常组给予等量蒸馏水。给药第13天背部备皮,第14天进行抗原攻击,于背部皮内注射1%卵蛋白溶液,每点注射0.2 mL,共3点。抗原攻击后2、4、6、8、24 h观察各点红肿的最大直径及局部反应程度。实验结束时,大鼠腹主动脉取血,检测血清IgA、IgG、CIC、SAA、IL-2、IL-6、TNF-α、NO、BUN、Cr含量。取大鼠皮肤、肾脏,中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,常规切片,HE染色,光镜下观察病理改变。结果:与正常组相比,其余各组大鼠背部均出现红肿斑点,模型组血清IgA、IgG、CIC、SAA、IL-2、IL-6、TNF-α、NO、BUN、Cr 含量均升高(P青紫颗粒低剂量组背部斑点直径小于模型组(P青紫颗粒中、高剂量组斑点直径明显小于模型组(P青紫颗粒中剂量组皮肤反应程度轻于模型组(P青紫颗粒各剂量组血清IgA、IgG、NO含量降低(P青紫颗粒中、高剂量组CIC含量降低(P青紫颗粒高剂量组IL-6、TNF-α含量降低(P青紫颗粒高、低剂量组Cr含量降低(P青紫颗粒各剂量组部分可见表皮增厚,真皮层少量肥大细胞浸润,个别可见细胞成分增多,实质细胞坏死,核碎裂,静脉血管淤血扩张、出血情况较模型组减轻;青紫颗粒各剂量组肾小球形态结构正常,结缔组织增生及炎性细胞浸润较模型组减轻。结论:青紫颗粒可不同程度降低过敏性紫癜大鼠血清IgA、IgG、CIC、IL-6、TNF-α、NO、Cr水平,减轻皮肤反应程度及皮肤、肾脏病理损害。2青紫颗粒对过敏性紫癜兔的干预作用目的:通过建立兔Arthus反应模型,模拟皮肤型过敏性紫癜,观察青紫颗粒对其皮肤反应及相关指标的影响。方法:日本大耳白兔随机分为正常组,模型组,地塞米松组(0.263 mg·kg-1),芦丁片组(5.78 mg·kg-1),青紫颗粒高剂量组(8.79 g·kg-1),青紫颗粒中剂量组(4.39 g·kg-1),青紫颗粒低剂量组(2.20 g·kg-1),青紫合剂组(6.98 ***-1)。每只兔每周肌内注射卵蛋白-弗氏完全佐剂1 mL,正常组注射等量生理盐水,共4次,末次致敏当日按照上述分组分别灌胃给药,连续给药10天,正常组给予等量蒸馏水。给药第9天背部备皮,第10天于背部皮内注射生理盐水配制的1%卵蛋白溶液,每点注射量为0.2 mL,共5点。抗原攻击后2、3、4、5、8、12、24h观察各点红肿的最大直径及局部反应程度。实验结束时取血,检测血清IgA、IgG、CIC、SAA、BUN、Cr的含量。取皮肤,10%多聚甲醛固定,石蜡包埋,常规切片,HE染色,光镜下观察病理改变。结果:与正常组相比,模型组兔背部出现严重的红肿斑点,血清IgA、IgG、CIC、BUN、Cr含量均

关键词： Arthus反应过敏性紫癜 JAK2-STAT3信号通路 PI3K-AKT1信号通路青紫颗粒

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青紫颗粒对过敏性紫癜肾损害的保护作用

青紫颗粒对过敏性紫癜肾损害的保护作用

作者：苗丰北京中医药大学

学位级别：硕士

过敏性紫癜（Henoch-Schonlein Purpura,HSP）是一种由IgA免疫复合物沉积介导的小血管炎症性疾病,常见于儿童。本病病因学尚不完全清楚,过敏性紫癜性肾炎是其常见并发症。HSP属中医“血证”、“葡萄疫”、“发斑”范畴。青紫合剂是北京... 详细信息

过敏性紫癜（Henoch-Schonlein Purpura,HSP）是一种由IgA免疫复合物沉积介导的小血管炎症性疾病,常见于儿童。本病病因学尚不完全清楚,过敏性紫癜性肾炎是其常见并发症。HSP属中医“血证”、“葡萄疫”、“发斑”范畴。青紫合剂是北京儿童医院院内制剂,由青黛、紫草、绵马贯众、丹参、白芷、寒水石、威灵仙、茵陈等中药组成,具有祛风解毒,凉血消斑的功效,对HSP有确切疗效。青紫颗粒是青紫合剂经改剂型制备的颗粒剂。本研究基于其功效主治及过敏性紫癜可能的发病机制,建立卵蛋白（Ovalbumin,OVA）所致过敏性紫癜大鼠模型和麦胶蛋白所致过敏性紫癜小鼠模型,观察青紫颗粒对过敏性紫癜肾脏损害的影响并初步探讨其作用机制。1青紫颗粒对卵蛋白所致过敏性紫癜大鼠肾脏损伤的影响目的:观察青紫颗粒对卵蛋白（OVA）所致肾型过敏性紫癜大鼠血清免疫球蛋白A（IgA）、循环免疫复合物（CIC）、血清淀粉样蛋白A（SAA）、白介素-6（IL-6）、内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）水平及皮肤、肾脏组织病理学影响。方法:SPF级SD大鼠,随机分为正常组,模型组,青紫颗粒低剂量组（4.58g·kg-1）、中剂量组（9.16 g·kg-1）、高剂量组(18.32 g·kg-1地塞米松组（0.55 mg·kg-1）,芦丁片组（12.05 mg·kg-1）。采用中西医结合方法,复制过敏性紫癜病证结合模型。除正常组外,其余各组以胡椒、干姜、荜茇=1:1:1的水煎液（0.125 g·kg-1）1.2 ml灌胃,每日两次,连续灌胃21日,模拟中医血热证造模。第22日大鼠腹腔注射含OVA、氢氧化铝凝胶、LPS及伊文思蓝的生理盐水溶液每只1 ml,并于当日按剂量灌服药液,正常组、模型组灌服等量溶媒,连续7日。第29日大鼠腹腔注射上述生理盐水溶液10 min内,皮肤外涂含OVA、氢氧化铝凝胶及LPS的生理盐水溶液1 ml以激发过敏反应。30 min后取血,ELISA法检测血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平;取皮肤、肾脏,HE染色法观察组织病理学变化。结果:与正常组比较,模型组血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平升高（P＜0.05或P＜0.01）,肾组织病理损伤明显。青紫颗粒可降低OVA所致过敏性紫癜大鼠血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平（与模型组比较,P＜0.05或P＜0.01）,减轻肾脏病理损伤。结论:青紫颗粒能降低OVA所致过敏性紫癜大鼠血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平,改善肾脏组织病理损伤。2青紫颗粒对麦胶蛋白所致过敏性紫癜小鼠肾脏损伤的影响目的:观察青紫颗粒对麦胶蛋白所致过敏性紫癜小鼠血清晚期氧化蛋白产物（AOPPs）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）水平,皮肤、肾脏IgA沉积和IgA1异常糖基化,补体C3、C4、TGF-β1表达及组织病理学的影响。方法:SPF级KM小鼠,随机分为正常组,模型组,青紫颗粒低剂量组（4.11 g·kg-1）、中剂量组（8.22 g·kg-1）、高剂量组（16.44 g·kg-1）,地塞米松组（0.63 mg·kg-1）,芦丁片组（12.54 mg-kg-1）。采用口服麦胶蛋白抗原法,复制过敏性紫癜小鼠模型。除正常组外,其余各组以0.4 mg/10g尾静脉注射印度墨水3周,每周1次,正常组尾静脉注射等量生理盐水。3周后模型小鼠灌胃6 mmol/LHCl酸化水溶解的0.1%麦胶蛋白0.5ml/只,连续至14周末,隔日1次,正常组以相同溶媒处理。造模的最后3日,用1 mg麦胶蛋白加入5 mmol/LHCl酸化的pH7.4的PBS液中,尾静脉注射,0.2 ml/只,每日1次,连续3日。正常组小鼠尾静脉注射等量PBS溶液。从第15周开始,各给药组每日灌胃1次,连续3周,正常组、模型组灌胃相同体积蒸馏水。各组摘眼球取血,ELISA法检测血清AOPPs、CIC、BUN、Cr水平;取皮肤及肾脏,免疫荧光法检测单纯IgA沉积,PAS染色法观察组织IgA1异常糖基化情况,免疫荧光法检测小鼠皮肤及肾脏补体C3、补体C4及TGF-β1的表达,HE染色法观察组织病理学变化。结果:与正常组相比,模型组血清AOPPs、CIC、BUN、Cr水平均升高（P＜0.05或P＜0.01）,模型组皮肤补体C3、TGF-β1表达增加（P＜0.05或P＜0.01）,肾脏IgA、补体C4表达增加（P＜0.05或P＜0.01）,皮肤及肾脏均有IgA1异常糖基化发生,肾组织病理损伤明显。青紫颗粒可降低麦胶蛋白所致的过敏性紫癜小鼠血清AOPPs、CIC、BUN、Cr水平,降低麦胶蛋白所致过敏性紫癜小鼠皮肤补体C3、TGF-β1表达及肾脏IgA、补体C3、补体C4、TGF-β1表达,减轻

关键词：过敏性紫癜青紫颗粒肾脏病变实验研究

青紫颗粒对Arthus反应动物模型皮肤损害的保护作用及机制研究

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中南药学 2022年第4期20卷 785-792页

作者：丰晨然赵一颖苗丰董琳琳畅洪昇张艳菊靳钰媛尹纪元藏晨晨孙文燕王晓玲北京中医药大学中药学院中药药理系北京102488 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院北京100045

目的观察青紫颗粒对Arthus反应大鼠、兔皮肤损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法通过肌内注射卵蛋白-弗氏完全或不完全佐剂,皮内注射1%卵蛋白溶液,复制Arthus反应大鼠和家兔模型。采用卵蛋白-弗氏完全佐剂致敏,1%卵蛋白溶液攻击,复制A... 详细信息

目的观察青紫颗粒对Arthus反应大鼠、兔皮肤损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法通过肌内注射卵蛋白-弗氏完全或不完全佐剂,皮内注射1%卵蛋白溶液,复制Arthus反应大鼠和家兔模型。采用卵蛋白-弗氏完全佐剂致敏,1%卵蛋白溶液攻击,复制Arthus反应兔模型。观察抗原攻击后皮肤反应程度、局部红肿斑点最大直径,检测血清IgA、IgG、CIC等指标的含量,并观察皮肤病理改变。结果在抗原攻击后4 h,青紫颗粒低剂量可减小大鼠背部斑点直径;抗原攻击后24 h,中、高剂量可减小背部斑点直径,中剂量可减轻皮肤反应程度。青紫颗粒各剂量可降低大鼠血清IgA、IgG、NO含量;中、高剂量可降低CIC含量;高剂量可降低血清IL-6、TNF-α含量。青紫颗粒各剂量可减轻大鼠皮肤组织静脉血管淤血扩张、出血情况。在抗原攻击后2、3、4、5 h,青紫颗粒高剂量可减小兔背部皮肤斑点直径;高、低剂量可减轻皮肤反应程度。青紫颗粒中剂量可降低兔血清IgG含量,中、低剂量组可降低血清CIC含量。青紫颗粒各剂量组均可减轻兔皮肤血管扩张,低剂量组可缓解皮肤水肿。结论青紫颗粒对Arthus反应动物模型皮肤损害具有一定保护作用,该作用可能与其降低血清IgA、IgG、CIC、IL-6、TNF-α、NO水平有关。

关键词：青紫颗粒过敏性紫癜 Arthus反应皮肤损伤免疫球蛋白循环免疫复合物

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青紫颗粒对麦胶蛋白致小鼠肾损伤的保护作用

中国药师 2021年第11期24卷 1967-1974页

作者：苗丰丰晨然董琳琳石璐畅洪昇孙文燕王晓玲北京中医药大学中药学院中药药理系北京102488 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院

目的:观察青紫颗粒对麦胶蛋白致小鼠肾损伤的保护作用。方法:84只SPF级KM小鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、青紫颗粒低(4.11 g·kg^(-1))、中(8.22 g·kg^(-1))、高剂量组(16.44 g·kg^(-1))、地塞米松组(0.63 mg·kg^(-1))、芦丁片... 详细信息

目的:观察青紫颗粒对麦胶蛋白致小鼠肾损伤的保护作用。方法:84只SPF级KM小鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、青紫颗粒低(4.11 g·kg^(-1))、中(8.22 g·kg^(-1))、高剂量组(16.44 g·kg^(-1))、地塞米松组(0.63 mg·kg^(-1))、芦丁片组(12.54 mg·kg^(-1)),每组12只。除正常对照组外,其余各组采用口服麦胶蛋白抗原法建立肾损伤小鼠模型。从第15周开始,各给药组灌胃给与相应药物,1次/d,连续3周,正常对照组和模型组灌胃相同体积蒸馏水。采用ELISA法检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、晚期氧化蛋白产物(AOPPs)、循环免疫复合物(CIC)水平;免疫荧光法检测肾脏单纯免疫球蛋白A(IgA)沉积,PAS染色法观察肾组织IgA_(1)异常糖基化情况,免疫荧光法检测小鼠肾脏补体C3、C4及转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))的表达,HE染色法观察肾组织病理学变化。结果:与正常对照组相比,模型组血清BUN、Cr、AOPPs、CIC水平显著升高(P青紫颗粒可降低麦胶蛋白所致肾损伤小鼠血清BUN、Cr、AOPPs、CIC水平(P青紫颗粒对麦胶蛋白所致肾损伤小鼠具有保护作用,该作用可能与其降低AOPPs、CIC水平,下调IgA、补体C4及TGF-β_(1)表达,减轻IgA_(1)异常糖基化有关。

关键词：青紫颗粒过敏性紫癜肾损伤晚期氧化蛋白产物循环免疫复合物 IgA 异常糖基化转化生长因子β 补体

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青紫颗粒制备工艺及质量控制方法研究

广东药科大学学报 2021年第2期37卷 18-23页

作者：马葆睿倪健庞琳诺蔡梦如覃柳莹白杰张志勤张萌王晓玲曲昌海北京中医药大学中药学院北京102488 首都医科大学附属北京儿童医院北京100045

目的建立HPLC法用于青紫颗粒制备工艺过程的质量控制,并对中试样品中丹酚酸B和绿原酸含量进行测定。方法丹酚酸B和绿原酸测定条件:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,流速为1 mL/min... 详细信息

目的建立HPLC法用于青紫颗粒制备工艺过程的质量控制,并对中试样品中丹酚酸B和绿原酸含量进行测定。方法丹酚酸B和绿原酸测定条件:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸为流动相梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为30℃,检测波长为286 nm(丹酚酸B)和327 nm(绿原酸);以绿原酸及丹酚酸B转移率为指标,选取提取次数、提取时间、加水倍量为影响因素,采用正交设计优选最佳提取工艺,并优选浓缩温度和干燥温度。结果丹酚酸B和绿原酸分别在0.16~0.63μg(r=1.000 0)、0.03~0.14μg(r=1.000 0)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.05%、103.72%;最优提取工艺为:加12倍水,提取2次,每次1 h,浓缩温度控制在80℃以下,干燥温度控制在70℃以下。所测中试样品中丹酚酸B和绿原酸质量分数分别为(3.04±0.046)mg/g和(0.74±0.006)mg/g。结论建立的液相方法准确稳定,可用于青紫颗粒制备过程的质量控制,优选的提取工艺稳定可行,适合批量生产。

关键词：青紫颗粒丹酚酸B 绿原酸高效液相色谱法

青紫颗粒抑制卵蛋白致过敏性紫癜大鼠血清免疫复合物保护肾组织作用

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中南药学 2020年第5期18卷 756-760页

作者：苗丰董琳琳丰晨然石璐张艳菊孙文燕王晓玲北京中医药大学中药学院中药药理系北京102488 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院北京100045

目的观察青紫颗粒对卵蛋白(OVA)所致过敏性紫癜大鼠血清免疫球蛋白A(IgA)、循环免疫复合物(CIC)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、白介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)水平及肾脏组织病理学的影响。方法SPF级SD大鼠,随机分为正常组,... 详细信息

目的观察青紫颗粒对卵蛋白(OVA)所致过敏性紫癜大鼠血清免疫球蛋白A(IgA)、循环免疫复合物(CIC)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、白介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)水平及肾脏组织病理学的影响。方法SPF级SD大鼠,随机分为正常组,模型组,青紫颗粒低剂量组(4.58 g·kg^-1)、中剂量组(9.16 g·kg^-1)、高剂量组(18.32 g·kg^-1),地塞米松组(0.55 mg·kg^-1),芦丁片组(12.05 mg·kg^-1)。采用中西医结合方法,复制过敏性紫癜病证结合模型。除正常组外,其余各组以胡椒∶干姜∶荜茇=1∶1∶1的水煎液(0.125 g·mL^-1)1.2 mL灌胃,每日两次,连续灌胃21 d,模拟中医血热证模型。第22日大鼠腹腔注射含OVA、氢氧化铝凝胶、脂多糖(LPS)及伊文思蓝的生理盐水溶液,每只1 mL,并于当日按剂量灌服药液,正常组、模型组灌服等量溶媒,连续7 d。第29日大鼠腹腔注射上述生理盐水溶液10 min内,皮肤外涂含OVA、氢氧化铝凝胶及LPS的生理盐水1 mL以激发过敏反应。30 min后取血,ELISA法检测血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平;取肾脏,HE染色法观察组织病理学变化。结果与正常组比较,模型组血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平升高(P青紫颗粒可降低OVA所致过敏性紫癜大鼠血清IgA、CIC、SAA、IL-6、ET-1、NO水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P青紫颗粒能降低OVA所致过敏性紫癜大鼠血清免疫复合物从而改善肾脏组织病理。

关键词：青紫颗粒过敏性紫癜免疫球蛋白A 循环免疫复合物血清淀粉样蛋白A