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霍乱弧菌o139实时荧光PCR检测方法的建立及应用

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军事医学科学院院刊 2005年第6期29卷 509-511页

作者：陈苏红张政张敏丽杨宁敏姚军朱水荣程苏云丁雨王升启军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 浙江省疾病预防与控制中心杭州310009

目的:建立检测霍乱弧菌o139的实时荧光PCR检测方法,为霍乱弧菌o139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段。方法:用复合探针法荧光PCR检测技术,检测o139特异基因———编码糖基转移酶的基因。结果:本方法特异性好,检测非o139肠道菌均无... 详细信息

目的:建立检测霍乱弧菌o139的实时荧光PCR检测方法,为霍乱弧菌o139的检测提供快速、敏感、特异的检测手段。方法:用复合探针法荧光PCR检测技术,检测o139特异基因———编码糖基转移酶的基因。结果:本方法特异性好,检测非o139肠道菌均无响应;灵敏度高,可检测低至10 CFU的细菌;重复性较好,批间批内变异系数均小于3%。对采自浙江省o139霍乱弧菌感染患者的335份标本进行检测,共有133份为阳性,而采用常规细菌培养法,仅检测出90份阳性。结论:本方法的建立为霍乱的诊断提供了又一有效手段。

关键词：实时荧光PCR 复合探针法霍乱弧菌o139

棘阿米巴原虫对霍乱弧菌o139的生存影响研究

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中华流行病学杂志 2006年第4期27卷 339-342页

作者：李勤学姜庆五陈洪友沈洁陈政邵月琴谈家弟李子华复旦大学公共卫生学院上海200032 上海市嘉定区疾病预防控制中心

目的观察棘阿米巴原虫对霍乱弧菌o139的环境生存影响。方法采用共培养方法, 通过染色和电镜超薄切片来观察霍乱弧菌o139在多噬棘阿米巴的滋养体和包囊内生存情况,经包囊传代及低温下生存耐受实验来观察阿米巴包囊能否提高霍乱弧菌o139... 详细信息

目的观察棘阿米巴原虫对霍乱弧菌o139的环境生存影响。方法采用共培养方法, 通过染色和电镜超薄切片来观察霍乱弧菌o139在多噬棘阿米巴的滋养体和包囊内生存情况,经包囊传代及低温下生存耐受实验来观察阿米巴包囊能否提高霍乱弧菌o139的环境生存能力。结果与多噬棘阿米巴共培养8 h后,霍乱弧菌o139就能进入阿米巴滋养体内并在空泡内增殖。霍乱弧菌 o139可生存于胞浆空泡内和(或)包囊内壁间,经包囊传代培养能再分离培养出此菌。在30℃时,在棘阿米巴环境下120 d仍能检测出霍乱弧菌o139,而在阿米巴生理盐水液中45 d后就检测不出霍乱弧菌o139。在4℃时,实验组和对照组培养液30 d后均未能培养出霍乱弧菌o139;而被感染包囊分别在30、45、60和75 d后复苏培养能再检测出霍乱弧菌o139;被感染包囊90 d后发育成滋养体能力下降,未能再培养出活的霍乱弧菌o139,在电镜下可见包囊被裂解死亡。结论霍乱弧菌o139能在棘阿米巴的滋养体内繁殖和包囊内生存;阿米巴包囊能够提高霍乱弧菌o139的低温下生存能力;棘阿米巴包囊可能成为霍乱弧菌o139越冬的环境宿主。

关键词：棘阿米巴原虫霍乱弧菌o139 共生关系

基因芯片技术鉴定出血性大肠杆菌o157∶H7和霍乱弧菌o139

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军事医学科学院院刊 2006年第2期30卷 122-126,130页

作者：徐晓静文思远陈苏红马学恩王华王升启军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 内蒙古农业大学动物科学与医学学院呼和浩特010018

目的:建立一种同时快速检测肠出血性大肠杆菌(EHEC)o157∶H7和霍乱弧菌o139的基因芯片,并验证该芯片的特异性和敏感性。方法:选择EHEC o157∶H7的产志贺样毒素基因stx1、stx2和β-葡糖醛酸糖苷酶基因(u idA);霍乱弧菌o139的肠毒素A亚单... 详细信息

目的:建立一种同时快速检测肠出血性大肠杆菌(EHEC)o157∶H7和霍乱弧菌o139的基因芯片,并验证该芯片的特异性和敏感性。方法:选择EHEC o157∶H7的产志贺样毒素基因stx1、stx2和β-葡糖醛酸糖苷酶基因(u idA);霍乱弧菌o139的肠毒素A亚单位(ctxA)、毒力协调菌毛A亚单位(tcpA)、糖基转移酶(glycosotransferaseLPSgt)基因序列分别设计引物和探针,反向引物用荧光素Cy3标记,探针在3′端氨基修饰。在优化的PCR和杂交反应条件下,分别进行三重PCR扩增,产物混合后与芯片进行杂交,产生特异性荧光信号,进一步筛选探针。随后将筛选出的探针制备芯片用于检测临床样本。结果:PCR产物在相应探针处均产生特异性杂交信号,临床样本检测结果表明,此芯片比常规细菌学检测方法灵敏。结论:所研制的同时定性检测EHEC o157∶H7和霍乱弧菌o139的基因芯片是特异、灵敏而且快速的,为这两种肠道致病菌感染的快速诊断提供了新的方法。

关键词：基因芯片多重PCR 大肠杆菌o157:H7 霍乱弧菌o139

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霍乱弧菌o139多糖荚膜的研究进展

疾病监测 1996年第7期11卷 265-268页

作者：刘端中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所

霍乱弧菌Ｏ１３９多糖荚膜的研究进展中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所（１０２２０６）刘端综述张树波审校由霍乱弧菌Ｏ１３９（ＶＣＯ１３９）引起的新型霍乱，自１９９２年起在印度和孟加拉等严重流行，目前已波及亚、欧、... 详细信息

霍乱弧菌Ｏ１３９多糖荚膜的研究进展中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所（１０２２０６）刘端综述张树波审校由霍乱弧菌Ｏ１３９（ＶＣＯ１３９）引起的新型霍乱，自１９９２年起在印度和孟加拉等严重流行，目前已波及亚、欧、美三大洲的十余个国家和地区［１］，...

关键词：弧菌霍乱弧菌o139 多糖荚膜

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霍乱弧菌o139多糖抗原的提取方法及优化

生物技术通讯 2010年第4期21卷 558-560页

作者：王远朱晓辉崔艳刘萱李平彭莉马清钧曹诚军事医学科学院生物工程研究所北京100850

目的:研究霍乱弧菌o139多糖抗原的提取方法,以获得高纯度的多糖抗原。方法:采用热酚水法提取霍乱弧菌o139的脂多糖(LPS),并增加了DNaseⅠ、RNase消化步骤,以去除DNA及RNA的污染;进一步采用酸水解法获得脱毒的o特异性多糖(o-SP)。结果:... 详细信息

目的:研究霍乱弧菌o139多糖抗原的提取方法,以获得高纯度的多糖抗原。方法:采用热酚水法提取霍乱弧菌o139的脂多糖(LPS),并增加了DNaseⅠ、RNase消化步骤,以去除DNA及RNA的污染;进一步采用酸水解法获得脱毒的o特异性多糖(o-SP)。结果:经生化方法检测,证实提纯的LPS和o-SP纯度较高,能满足进行霍乱免疫研究的要求。结论:该方法简便可行,值得推广。

关键词：霍乱弧菌o139 脂多糖提取纯化

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霍乱弧菌o139脂多糖基因的克隆表达

生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 182-182页

作者：曲殿波刘传暄马清钧军事医学科学院生物工程研究所北京100071

霍乱弧菌脂多糖作为一种保护性抗原,其抗血清可以抑制霍乱弧菌在小肠粘膜上的粘附并且可以破坏霍乱弧菌,因此在研制霍乱疫苗时可以作为一种有用的成分。同时,脂多糖作为基因代谢的二级产物,是由多基因协同作用经酶促合成的。这些基因以... 详细信息

霍乱弧菌脂多糖作为一种保护性抗原,其抗血清可以抑制霍乱弧菌在小肠粘膜上的粘附并且可以破坏霍乱弧菌,因此在研制霍乱疫苗时可以作为一种有用的成分。同时,脂多糖作为基因代谢的二级产物,是由多基因协同作用经酶促合成的。这些基因以串联体的形式集中在一起,这为我们的克隆表达提供了便利条件。本研究首先用粘粒pCoS5构建了o139霍乱弧菌基因组粘粒文库。

关键词：脂多糖霍乱弧菌o139 基因的克隆基因组文库保护性抗原免疫印迹免疫反应酶促合成粘粒文库霍乱疫苗

我国某地首株o139霍乱弧菌某些特征的研究

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疾病监测 1997年第2期12卷 45-49页

作者：朱勇刘松青李子怀刘彩莲刘延清广东省珠海市卫生防疫站中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所

我国某地１９９６年６月从一名腹泻病人粪便中分离出首例Ｏ１３９霍乱弧菌，并将该菌与国内外菌株形态，生化和遗传学特性进行了比较研究，结果表明此菌株与国内外Ｏ１３９流行菌株具有相似的表型特性（Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ），形态，生... 详细信息

我国某地１９９６年６月从一名腹泻病人粪便中分离出首例Ｏ１３９霍乱弧菌，并将该菌与国内外菌株形态，生化和遗传学特性进行了比较研究，结果表明此菌株与国内外Ｏ１３９流行菌株具有相似的表型特性（Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ），形态，生化特性与Ｏ１群相似，但对弧菌抑制剂（Ｏ／１２９）不敏感，不被Ｏ１多价血清凝集；用已知的几种霍乱弧菌毒素基因探针与被测Ｏ１３９菌株ＤＮＡ杂交，结果显示都具有ｃｔｘ，ｚｏｔ，ａｃｅ基因；ＰＣＲ检测ｃｔｘＡ基因与Ｏ１群霍乱流行株具有相同的扩增产物；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析外膜蛋白所有Ｏ１３９菌株图谱相似；用１６ＳｒＲＮＡ基因探针与ＢｇｌⅠ酶切的染色体ＤＮＡ杂交，结果表明此菌株与中国及国外菌株分属于不同的核糖体基因型（Ｒｉｂｏｔｙｐｅ，ＲＴ），而且与当年的Ｏ１群流行菌株具有相似的ＲＴ型，推测该菌株可能是Ｏ１群的突变株，对新毒株Ｏ１３９的出现应引起我们高度重视。

关键词：病原菌霍乱弧菌o139 毒力

浙江霍乱弧菌o_(139)耐药状况及毒力基因研究

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浙江预防医学 2006年第1期18卷 4-5,12页

作者：朱水荣张政杨仕贵陈恩富莫顺堂浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310009

目的了解浙江霍乱弧菌o139的耐药状况及毒力基因携带情况。方法采用WHo推荐的改良K-B法,进行了14种抗菌药物的耐药性测定;以多重PCR法对6种毒力相关基因(ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot)进行检测分析。结果霍乱弧菌o139主要对SD、AMP... 详细信息

目的了解浙江霍乱弧菌o139的耐药状况及毒力基因携带情况。方法采用WHo推荐的改良K-B法,进行了14种抗菌药物的耐药性测定;以多重PCR法对6种毒力相关基因(ctxA、rtxA、Ace、TcpA、Cri、Zot)进行检测分析。结果霍乱弧菌o139主要对SD、AMP、SM、CoS、CAR、FURX耐药,耐药率均在76.7%以上;对FPA、CF、CIPX、AKN、较为敏感,敏感率均在94.5%以上;而且不同年份菌株的耐药情况有所不同。所有菌株均携带3种以上毒力基因,其中93.2%携带ctxA基因,86.3%携带全部6种毒力基因。结论霍乱的治疗和预防中应首选CF、AKN、FPA、CIPX等敏感抗菌药物;霍乱弧菌o139的毒力基因携带率高,致病性和流行性均强,所以今后的霍乱防制中应加强对霍乱弧菌o139监测与研究,及时发现和控制疫情蔓延。

关键词：霍乱弧菌o139 药敏试验毒力基因

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霍乱流行及防治史研究概况

广西预防医学 2005年第2期11卷 118-121页

作者：董柏青陈娜萦林玫广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530021

霍乱是中规定的国际检疫传染病,在我国中被列为甲类传染病进行管理.近 200年来,全球先后发生过 7次霍乱大流行.霍乱,这个在 19世纪曾被形容为'曾摧毁地球的最可怕的瘟疫之一'的疾病,给人类历史带来了巨大的灾难.随着第 7次大流行向西半... 详细信息

霍乱是中规定的国际检疫传染病,在我国中被列为甲类传染病进行管理.近 200年来,全球先后发生过 7次霍乱大流行.霍乱,这个在 19世纪曾被形容为'曾摧毁地球的最可怕的瘟疫之一'的疾病,给人类历史带来了巨大的灾难.随着第 7次大流行向西半球的扩展和新的霍乱弧菌 o139的出现,其流行特点发生了变化,也给防治工作提出了许多新的问题.现将给人类带来沉重灾难的霍乱流行与防治的历史概况综述如下.

关键词：霍乱流行《传染病防治法》霍乱弧菌o139 甲类传染病卫生检疫 19世纪人类历史流行特点防治工作历史概况大流行西半球国际灾难