检索结果-南通市图书馆

扩增片段长度多态性分析用于霍乱弧菌分子分型的方法建立和应用评价

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中华流行病学杂志 2007年第6期28卷 580-585页

作者：娄静刁保卫王洪霞崔志刚祁国明阚飙中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的建立霍乱弧菌的基于红外荧光标记引物的扩增片段长度多态性（AFLP）分型方法，评价脉冲场凝胶电泳（PFGE）和AFLP对霍乱弧菌的分型能力。方法选择PFGE带型均不相同的47株霍乱弧菌作为评价菌株，建立AFLP对于霍乱弧菌的分型方法；确... 详细信息

目的建立霍乱弧菌的基于红外荧光标记引物的扩增片段长度多态性（AFLP）分型方法，评价脉冲场凝胶电泳（PFGE）和AFLP对霍乱弧菌的分型能力。方法选择PFGE带型均不相同的47株霍乱弧菌作为评价菌株，建立AFLP对于霍乱弧菌的分型方法；确定操作程序后选择83株分离自1962—2005年11个省的霍乱弧菌，进行AFLP和PFGE对于霍乱弧菌分型能力的比较。AFLP分型方法采用了红外荧光标记PCR引物，利用LI—COR4300自动测序仪完成电泳、Saga^MX软件对电泳图谱进行编辑。PFGE采用PulseNet提供的标准化程序。结果AFLP用于霍乱弧菌分型时选择性引物携带碱基数为1，最优引物组合为EcoRI—G／MseI—T，AFLP分型实验的重复性达到99．2％。AFLP将83株霍乱弧菌分为52个型别，D值为0．9545；PFGE将此83株菌分为44种带型，D值为0．9251。结论优化固定了AFLP对于霍乱弧菌的分型程序，重复性好；AFLP比PFGE具有更好的分型能力，能够用于分离菌株的分子分型。结合已成为实验室网络监测标准分析方法的PFGE，可对分离株做更细致的分型比较。

关键词：霍乱弧菌扩增片段长度多态性脉冲场凝胶电泳分子分型

实时聚合酶链反应检测O1群和O139群霍乱弧菌方法的建立及应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华流行病学杂志 2007年第8期28卷 768-771页

作者：王晓梅王多春谭海玲钟豪杰陈经雕李柏生柯昌文闫梅英张静阚飙中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室广东省疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心

目的建立检测O1群和O139群霍乱弧菌的实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)方法并进行水体标本的检测评价。方法根据O1群和O139群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb序列设计引物,利用SYBR Green染料,建立同时检测霍乱弧菌O1群和O139群的RT-PCR方法,对... 详细信息

目的建立检测O1群和O139群霍乱弧菌的实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)方法并进行水体标本的检测评价。方法根据O1群和O139群霍乱弧菌O抗原编码基因rfb序列设计引物,利用SYBR Green染料,建立同时检测霍乱弧菌O1群和O139群的RT-PCR方法,对所建立的方法分别进行实验室内的灵敏度、特异性及重复性评价。采集河口水标本增菌后进行RT-PCR检测,与分离培养方法比较评价实际应用价值。结果建立了检测O1群和O139群霍乱弧菌的双重RT-PCR方法,根据扩增产物的溶解温度能有效区分O1群和O139群霍乱弧菌两种目标片段的扩增;对其他10种弧菌染色体DNA没有扩增;RT-PCR检测524份河口水体标本的增菌液,与常规分离方法相比显示了明显的灵敏性,并且所有常规分离方法阳性标本其荧光PCR检测亦为阳性。结论以O1群和O139群rfb基因为目标检测片段建立的霍乱弧菌RT-PCR方法可用于环境水体样本中霍乱弧菌常规分离前的快速筛查。

关键词：霍乱弧菌实时聚合酶链反应编码基因

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

霍乱弧菌检测技术研究进展

微生物学报 2019年第10期59卷 1855-1863页

作者：方微微王恒樑李晓晖卢瑛上海海洋大学食品学院上海201306 上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306 农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海201306 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100091

随着社会的发展,公共卫生及水体质量已得到明显提升,但到目前为止在发展中国家由霍乱疫情导致的死亡率依旧非常高,而霍乱弧菌即为霍乱疫情爆发的病原菌,且霍乱在我国被列为甲类传染病。目前国内外针对霍乱弧菌已经建立了多种有效的检测... 详细信息

随着社会的发展,公共卫生及水体质量已得到明显提升,但到目前为止在发展中国家由霍乱疫情导致的死亡率依旧非常高,而霍乱弧菌即为霍乱疫情爆发的病原菌,且霍乱在我国被列为甲类传染病。目前国内外针对霍乱弧菌已经建立了多种有效的检测技术,对控制霍乱暴发作用显著。本文综述了近年来霍乱弧菌检测技术研究新进展,包括微生物学、免疫学、分子生物学等较成熟的检测方法,生物传感器、快速检测技术等新兴检测方法,并总结各种技术优缺点,展望未来霍乱弧菌检测的市场需求。

关键词：霍乱弧菌检测 RDT 生物传感器

霍乱弧菌减毒活疫苗候选株IEM109的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第1期25卷 21-26页

作者：闫梅英刁保卫邱海燕刘延清高守一阚飙中国疾病预防控制中心传染病预防控制所卫生部医学分子细菌学重点实验室北京102206

目的　构建保护性抗原基因整合于染色体上的霍乱弧菌活疫苗候选株 ,减弱毒力和增强其遗传稳定性。方法　以我们筛选的天然不含霍乱毒素的疫苗候选株IEM1 0 1为出发株 ,通过基因重组技术将IEM1 0 1染色体上与噬菌体复制整合有关的TLC因子... 详细信息

目的　构建保护性抗原基因整合于染色体上的霍乱弧菌活疫苗候选株 ,减弱毒力和增强其遗传稳定性。方法　以我们筛选的天然不含霍乱毒素的疫苗候选株IEM1 0 1为出发株 ,通过基因重组技术将IEM1 0 1染色体上与噬菌体复制整合有关的TLC因子、attRS位点及具细胞毒作用的RTX基因簇同时进行缺失 ,并插入具免疫原性的ctxB基因及介导噬菌体免疫的rstR基因 ,构建疫苗候选株IEM1 0 9。GM1 ELISA法检测IEM1 0 9中ctxB基因的表达情况。细胞培养观察候选株对哺乳动物细胞Hep 2的毒性作用。结果　PCR及原位杂交均证实霍乱弧菌疫苗候选株IEM1 0 9中TLC因子、attRS位点、rtxA、rtxC基因被缺失 ,而ctxB、rstR基因整合入染色体DNA。GM1 ELISA示ctxB基因表达良好。IEM1 0 9对Hep 2细胞的毒性作用消失。结论　构建了出发株染色体上毒力相关基因簇被保护性抗原基因替换的重组改造菌株 ,可作为候选株进行进一步的免疫效果考核。

关键词： IEM 候选株霍乱弧菌 B基因 GM1 减毒活疫苗 TLC 原基基因簇哺乳动物细胞

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

霍乱弧菌HutX蛋白的晶体结构

第二军医大学学报 2012年第9期33卷 969-973页

作者：李君巩晶杨勇骥黄琰第二军医大学基础部生物物理学教研室上海200433 山东大学医学院癌症研究中心济南250012 山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室济南250100

目的获取纯化的霍乱弧菌HutX蛋白晶体和衍射数据。方法通过基因克隆和蛋白表达得到HutX蛋白,通过镍柱亲和层析、Source Q阴离子交换柱层析和Superdex 200分子筛柱层析等纯化所得蛋白,并用蛋白质印迹法进行验证。将所获蛋白进行结晶条件... 详细信息

目的获取纯化的霍乱弧菌HutX蛋白晶体和衍射数据。方法通过基因克隆和蛋白表达得到HutX蛋白,通过镍柱亲和层析、Source Q阴离子交换柱层析和Superdex 200分子筛柱层析等纯化所得蛋白,并用蛋白质印迹法进行验证。将所获蛋白进行结晶条件筛选及悬滴优化,X线衍射分析所得晶体的结构。结果蛋白质印迹分析间接证明所得到的蛋白为HutX蛋白,并得到HutX蛋白的晶体及衍射数据。结论为进一步研究HutX的蛋白结构及其在霍乱弧菌亚铁血红素利用机制中发挥的作用提供了参考。

关键词：霍乱弧菌 HutX蛋白 X线结晶学血红素利用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

霍乱弧菌H2C全基因组测序及序列分析

中国卫生检验杂志 2022年第15期32卷 1807-1810页

作者：温娟张建梅陈泽辉沈惠燕张荣秋厦门市疾病预防控制中心福建厦门361000

目的了解霍乱弧菌产毒株的基因序列,为霍乱基因组学研究提供资料,对可能发生的公共卫生突发事件提供保障。方法利用Illumina Hiseq测序平台对1株霍乱弧菌(Vibrio cholerae)H2C进行了全基因组测序,对基因组进行组装、基因预测和功能注... 详细信息

目的了解霍乱弧菌产毒株的基因序列,为霍乱基因组学研究提供资料,对可能发生的公共卫生突发事件提供保障。方法利用Illumina Hiseq测序平台对1株霍乱弧菌(Vibrio cholerae)H2C进行了全基因组测序,对基因组进行组装、基因预测和功能注释。结果 H2C基因组大小为4.09 Mb,GC含量为47.34%,预测编码基因3 642个。在H2C基因组中注释到3 252个基因具有直系同源蛋白簇分类,共查到111个tRNA和9个rRNA基因。与代谢通路相关基因2 366个,与毒力相关基因417个。通过KEGG定位到RTX、CTX和TCP毒力相关基因簇。结论霍乱弧菌H2C携带多种毒力相关基因,对该菌致病性及环境适应性起到关键作用。

关键词：霍乱弧菌全基因组测序基因功能毒力基因

霍乱弧菌O1群有毒株和无毒株的蛋白质谱特征分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2008年第11期28卷 963-966页

作者：陈守义刘俊华张欣强胡玉山李钏华王鸣广州市疾病预防控制中心 510080

目的利用双向电泳和质谱鉴定技术探讨环境和人体中霍乱弧菌蛋白表达的差异。方法利用适当的裂解液处理霍乱弧菌，提取全菌蛋白；采用pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳；考马斯亮蓝染色后获得双向电泳图谱，并利用ImageMaster 2D El... 详细信息

目的利用双向电泳和质谱鉴定技术探讨环境和人体中霍乱弧菌蛋白表达的差异。方法利用适当的裂解液处理霍乱弧菌，提取全菌蛋白；采用pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳；考马斯亮蓝染色后获得双向电泳图谱，并利用ImageMaster 2D Elite5．0图像分析软件进行分析，所得的数据采用SPSS15．0进行统计分析，找出差异蛋白；在此基础上，胰蛋白酶消化这些特殊差异蛋白，并进行质谱（MALDI—TOF—MS）分析。结果获得1032±22个蛋白斑点，蛋白主要集中在等电点（PI）4．00—7．20之间，重复胶的匹配点数为1025±24，匹配率为96．30％；发现了有明显差异的21个蛋白点，并用质谱鉴定了其中4种蛋白。结论获得了环境和人体中霍乱弧菌蛋白的差异表达蛋白。

关键词：霍乱弧菌双向电泳基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱蛋白质组学

深圳市1993—2002年霍乱弧菌的脉冲场凝胶电泳分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华流行病学杂志 2007年第5期28卷 491-494页

作者：兰全学扈庆华石晓路王冰林一曼张顺祥程锦泉阚飙徐建国深圳市疾病预防控制中心 518020 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所

目的分析深圳市1993—2002年霍乱弧菌菌株的相关性。方法 60株霍乱弧菌基因组DNA经Not Ⅰ酶切，通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱，利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果 60株霍乱弧菌被分为39种脉冲场凝胶电泳图谱，聚类分析... 详细信息

目的分析深圳市1993—2002年霍乱弧菌菌株的相关性。方法 60株霍乱弧菌基因组DNA经Not Ⅰ酶切，通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱，利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果 60株霍乱弧菌被分为39种脉冲场凝胶电泳图谱，聚类分析将大部分菌株分为A、B两群。结论深圳地区霍乱弧菌存在紧密相关的流行克隆群。霍乱弧菌的脉冲场凝胶电泳分析，有助于霍乱的主动监测和传染来源追踪。

关键词：霍乱弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型

霍乱弧菌RAA-LFD可视化检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

霍乱弧菌RAA-LFD可视化检测方法的建立