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中国运动医学杂志 2013年第12期32卷 1074-1081页

作者：陈薇薇陈嘉勤朱敬生张国华罗赤苗陈锐魏荣林陈伟湖南师范大学体育学院长沙410012 邵阳市中心医院

目的:观察有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素对小鼠皮下移植H22肝肿瘤中PI3K/Akt/mTOR信号通路及相关细胞因子差异表达的影响及其分子机制。方法:40只雄性KM小鼠随机均分为模型组(M组)、有氧运动组(E组)、负重有氧运动组(OE组)和有氧运动联合... 详细信息

目的:观察有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素对小鼠皮下移植H22肝肿瘤中PI3K/Akt/mTOR信号通路及相关细胞因子差异表达的影响及其分子机制。方法:40只雄性KM小鼠随机均分为模型组(M组)、有氧运动组(E组)、负重有氧运动组(OE组)和有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素组(E+MR组)。采用小鼠颈部皮下移植成瘤模型,各干预组于建模成功后第3天进行雷氏大疣蛛毒素和运动干预。尾静脉注射0.3 ml雷氏大疣蛛毒素(药剂浓度为2μg/g体重)连续20天;运动干预采用有氧游泳训练,每周6次,共5周。4组动物每4天测量1次肿瘤体积,并绘制肿瘤生长曲线。实验结束后小鼠禁食过夜,随后分离出肿瘤组织。采用HE染色对其进行显微结构形态学观察;免疫组化法检测肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR、PTEN、IGF-1因子蛋白表达;实时荧光定量(Realtime-PCR)技术检测肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR、PTEN、IGF-1mRNA表达。结果:①肿瘤体积测量结果显示:模型组肿瘤体积生长速度最快,有氧运动组肿瘤体积生长速度次之,负重有氧运动组肿瘤生长速度较有氧运动组生长速度慢,有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素组生长速度最慢;②HE染色结果显示:模型对照组肿瘤细胞排列紧密、规整,有氧运动组细胞排列疏松欠规则,负重有氧运动组细胞出现坏死区,有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素干预组细胞可见较大坏死区域。③免疫组织化学染色结果显示:三个干预组小鼠肿瘤组织PTEN阳性表达均高于模型非干预组,而PI3K、Akt、mTOR、IGF-1阳性表达较模型组低(P雷氏大疣蛛毒素组PTEN mRNA表达水平最高。结论:有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素与有氧运动、负重有氧运动,能提高PTEN的含量,降低促肝癌细胞增殖的有关因子以及上调肿瘤细胞凋亡和诱导细胞周期阻滞,从而发挥抗H22小鼠肝脏肿瘤增殖的作用。

关键词： PI3K Akt mTOR信号通路有氧运动雷氏大疣蜘蛛毒素小鼠H22肝脏肿瘤

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有氧运动与雷氏蛛毒对小鼠肾移植癌及其P53信号通路干预效果的实验研究

有氧运动与雷氏蛛毒对小鼠肾移植癌及其P53信号通路干预效果的实...

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作者：李文敏湖南师范大学

学位级别：硕士

研究目的:探索有氧运动和雷氏大疣蛛毒素对小鼠H22移植肿瘤肾脏侵袭转移的干预效应,观测P53介导的细胞凋亡信号相关因子(P53、Bcl-2、Bax、P21、Survivin)的表达变化,初步探讨其可能的分子机制。研究方法:雄性KM小鼠,建立小鼠H22肾移植... 详细信息

研究目的:探索有氧运动和雷氏大疣蛛毒素对小鼠H22移植肿瘤肾脏侵袭转移的干预效应,观测P53介导的细胞凋亡信号相关因子(P53、Bcl-2、Bax、P21、Survivin)的表达变化,初步探讨其可能的分子机制。研究方法:雄性KM小鼠,建立小鼠H22肾移植在体肿瘤模型,建模成功后小鼠随机分为5组(n=10):模型对照组、跑台干预组、蛛毒干预组、联合干预组(跑台+蛛毒)、阳性对照组。术后第一天开始蛛毒干预治疗,尾静脉注射,剂量6μg/μL,0.3mL/次*天,连续用药3周,阳性对照组进行替加氟治疗;手术第六天后开始有氧运动干预,采用有氧跑台运动(坡度为零,跑速10m/min),每周六次,第一周为适应性运动阶段,前三天每次运动时间为30min,后三天依次增加10min,最终运动时间维持在60min。实验结束称取瘤重,计算抑瘤率;HE染色观察肾移植瘤组织病理形态学改变;免疫组化观测瘤周组织mt-P53、BCL-2、BAX、P21、SURVIVIN的阳性表达强度;实时荧光定量(Real-time PCR)技术检测相应因子mRNA水平的表达。研究结果:(1)抑瘤率:联合干预组64.82%,蛛毒干预组45.43%,阳性干预组24.65%,跑台干预组9.76%。(2)HE染色:首先,镜下可见肿瘤细胞侵润生长,证明造模成功。其次,模型对照组瘤区相对较大,肿瘤细胞排列无序而密集,呈巢状侵袭性生长,细胞间质较少,胞体明显较大,核大而深染,异型性显著;蛛毒干预组与联合干预组可见肿瘤组织边界较完整,密度降低,分布疏松,细胞皱缩,核固缩,胞质浓缩、空泡样改变;跑台干预组未见典型的细胞凋亡形态改变。(3)免疫组化:从模型对照组、蛛毒干预组到联合干预组,mt-P53、BCL-2、SURVIVIN阳性染色强度分别依次降低,BAX、P21依次增强。(4)Real-time PCR:从模型对照组、蛛毒干预组到联合干预组,Bcl-2、Survivin mRNA表达量分别依次降低,P53、P21分别依次增强。研究结论:雷氏蛛毒及有氧运动蛛毒联合干预对小鼠肾移植癌的侵润生长具有一定抑制作用;通过正向调控P53介导的细胞凋亡信号,达到了抑制肿瘤细胞增殖及瘤周组织分子层恶变,促进肿瘤细胞凋亡的效果。

关键词：小鼠有氧运动雷氏大疣蜘蛛毒素 P53信号通路

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作者：陈薇薇湖南师范大学

学位级别：硕士

研究目的：本课题拟以KM种小鼠为研究对象,观察有氧运动以及雷氏大疣蛛毒素,对小鼠皮下移植H22肝肿瘤组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路及相关细胞因子的表达差异及其分子机制初探。研究方法：40只雄性KM小鼠,采用小鼠颈部皮下注射成瘤模型,... 详细信息

研究目的：本课题拟以KM种小鼠为研究对象,观察有氧运动以及雷氏大疣蛛毒素,对小鼠皮下移植H22肝肿瘤组织中PI3K/Akt/mTOR信号通路及相关细胞因子的表达差异及其分子机制初探。研究方法：40只雄性KM小鼠,采用小鼠颈部皮下注射成瘤模型,建模成功后,随机均分为模型组(M组),有氧运动组(E组),负重有氧运动组(OE组),有氧运动组联合雷氏大疣蛛毒素(E+MR组),每组10只。各干预组于建模成功后第三天进行雷氏大疣蛛毒素和有氧运动干预。雷氏大疣蛛毒素采用尾静脉注射0.3m1(药剂浓度为0.2μg/g体重),连续用药20d;有氧运动干预采用游泳训练,时间为Pm17-18时,每周6次,共5周。四组动物每4天测量1次肿瘤体积,并绘制肿瘤生长曲线。实验结束后小鼠禁食过夜,随后分离出肿瘤组织并取材。HE染色对各组小鼠肿瘤组织进行显微结构形态学观察;免疫组化法检测肿瘤组织中PI3K、Akt、mTOR、PTEN、IGF-1细胞因子蛋白表达水平;实时荧光定量(Realtime-PCR)技术检测肿瘤组织中PI3K、Akt、mTOR、PTEN、IGF-1mRNA表达水平。研究结果：①肿瘤体积测量结果显示：模型组肿瘤体积生长速度最快,有氧运动组肿瘤体积生长速度次之,负重有氧运动组肿瘤生长速度较有氧运动组生长速度慢,有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素组生长速度最慢;②HE染色显示结果：模型对照组肿瘤细胞排列紧密、规整,有氧运动组细胞排列疏松欠规则,负重有氧运动组细胞出现坏死区,有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素干预组细胞可见较大坏死区域。③免疫组织化学染色结果显示：三个干预组小鼠肿瘤组织PTEN阳性表达均高于模型非干预组,而PI3K、Akt、mTOR、IGF-1蛋白阳性表达较模型组显著性降低(P雷氏大疣蛛毒素组较有氧运动、负重有氧运动组低(P雷氏大疣蛛毒素组PTENmRNA表达水平最高,负重有氧组高于有氧运动组(P>0.05)。结论：有氧运动、负重有氧运动以及雷氏大疣蛛毒素均能抑制肿瘤的生长,且有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素效果最好,负重有氧运动组优于有氧运动组。其可能机制是提高PTEN细胞因子的含量,降低了PI3K/Akt/mTOR信号通路中促肝癌细胞增殖的有关因子,诱导细胞周期阻滞,限制了肿瘤细胞的迁移、侵袭从而发挥抗H22小鼠肝脏肿瘤增殖的作用。

关键词： PI3K/Akt/mTOR信号通路有氧运动雷氏大疣蜘蛛毒素小鼠H22肝脏肿瘤

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雷氏蛛毒及中药干预小鼠H22皮下移植肝肿瘤后RhoA/ROCK信号通路蛋白表达的变化

雷氏蛛毒及中药干预小鼠H22皮下移植肝肿瘤后RhoA/ROCK信号通路蛋...

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作者：陈继新南华大学

学位级别：硕士

目的:本文拟采用雷氏大疣蛛毒及中药干预手段,探讨Rho A/Rock信号通路及相关细胞因子,在小鼠H22皮下移植肝肿瘤中的差异表达和可能分子机制。方法:参照皮下注射法,将配置好浓度为5×106个/ml小鼠H22肝癌细胞悬液,皮下接种于每只实验KM... 详细信息

目的:本文拟采用雷氏大疣蛛毒及中药干预手段,探讨Rho A/Rock信号通路及相关细胞因子,在小鼠H22皮下移植肝肿瘤中的差异表达和可能分子机制。方法:参照皮下注射法,将配置好浓度为5×106个/ml小鼠H22肝癌细胞悬液,皮下接种于每只实验KM小鼠后颈部建模。建模成功后,将小鼠随机分为3组:模型对照组(M),中药经验方组(A)和雷氏大疣蛛毒素组(R),每一组各10只。三天后,各干预组动物成功建模,然后分别进行中药和雷氏大疣蛛毒素干预。(M)组每只小鼠在尾静脉注射生理盐水0.3ml,(R)组每只小鼠在尾静脉注射药剂浓度为0.2μg/μl的雷氏大疣蛛毒素0.3ml,(A)组每天灌胃一次(0.4ml/次),每天一次,均连续给药20d。每2天给各三组实验动物测量肿瘤体积1次,并绘制出每次肿瘤的生长曲线。到期后各小鼠禁食过夜处死,并仔细分离出其肿瘤组织,然后进行组织取材。肿瘤体积测量法计算出肿瘤体积的大小;HE染色观察肿瘤细胞形态结构的变化;免疫组织化技术检测各组肿瘤组织中RhoA/ROCK信号通路及相关细胞因子蛋白水平的表达情况。结果:①肿瘤体积测量法计算出肿瘤体积生长速度:(R)组生长速度最慢;(A)组次之;(M)组最快。②HE染色显示:(R)组小鼠::肿瘤IV细胞排列稀疏、不规则,肿瘤细胞核固缩,可见异型细胞。并见片状空泡样变性、出现大面积坏死区。(A)组小鼠:肿瘤细胞排列松散、无序,出现坏死区,胞核较小、破坏不明显,可见少量空泡样变性。(M)组小鼠:肿瘤细胞排列规整、紧密、核染色深且异型性明显,核质比较大,实质和间质分界不清,无明显坏死组织。③免疫组织化学染色结果显示:(A)组及(R)组二个干预组中小鼠肿瘤组织p21阳性表达率均明显高于(M)组,而其中的RhoA、ROCK阳性表达却较(M)组低(P雷氏大疣蛛毒素及中药,对小鼠皮下移植的H22肝肿瘤生长和增殖有明显的抑制作用。它们下调了RhoA、ROCK的表达和上调了p21蛋白表达,其效果雷氏大疣蛛毒组最明显。雷氏大疣蛛毒素和中药可能通过调节RhoA/ROCK信号通路中RhoA、ROCK和p21等相关细胞因子的表达,从而抑制了肿瘤细胞的增殖。

关键词： Rho A/ROCK信号通路 H22皮下移植肝肿瘤雷氏大疣蜘蛛毒素 KM小鼠中药

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中药及雷氏大疣蛛毒干预小鼠皮下移植肝肿瘤细胞后RhoA/ROCK信号通路蛋白表达的变化

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中南医学科学杂志 2014年第6期42卷 558-562页

作者：陈继新刘天云罗赤苗张国华陈嘉勤郑核贺小平南华大学湖南衡阳421001 邵阳市第一人民医院外科邵阳市中心医院湖南师范大学体育学院

目的探讨Rhoa/Rock信号通路相关细胞因子在昆明小鼠H22皮下移植肝肿瘤中的差异表达和机制。方法以昆明小鼠颈部皮下移植H22肝肿瘤细胞建立肿瘤模型,采用雷氏大疣蛛毒及抗癌中药作为干预手段,将小鼠随机均分为模型对照(M)组,雷氏大疣蛛毒... 详细信息

目的探讨Rhoa/Rock信号通路相关细胞因子在昆明小鼠H22皮下移植肝肿瘤中的差异表达和机制。方法以昆明小鼠颈部皮下移植H22肝肿瘤细胞建立肿瘤模型,采用雷氏大疣蛛毒及抗癌中药作为干预手段,将小鼠随机均分为模型对照(M)组,雷氏大疣蛛毒素(R)组和抗癌中药(A)组,每组10只。测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。6周后禁食过夜,进行肿瘤组织取材。做病理切片,观察肿瘤细胞形态结构;检测肿瘤组织中RhoA/ROCK信号通路及相关细胞因子蛋白水平的差异表达。结果通过观察肿瘤的生长速度发现,在三组中,雷氏大疣蛛毒素组生长速度最慢。肿瘤细胞形态结构显示模型对照组小鼠肿瘤细胞排列紧密、规整。雷氏大疣蛛毒素小鼠:细胞排列稀疏、片状空泡样变性、坏死。抗癌中药组:肿瘤细胞排列松散、出现坏死区。抗癌中药组小鼠肿瘤组织p21阳性表达均高于模型非干预组,而RhoA、ROCK阳性表达较模型组低(P雷氏大疣蛛毒及中药通过有效改变RhoA/ROCK信号通路及相关细胞因子的表达水平,从而抑制或减慢肝肿瘤增殖与侵袭速度。

关键词： RhoA/ROCK信号通路 H22肝肿瘤细胞雷氏大疣蜘蛛毒素小鼠抗癌中药

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湖南省生理科学会2013年度学术年会

作者：陈薇薇朱敬生陈嘉勤罗赤苗张国华杨华王茂材李林湖南师范大学体育学院邵阳市中心医院

目的:观察有氧运动联合雷氏大疣蛛毒素,对小鼠皮下移植H

关键词： PI3K/Akt/mTOR信号通路有氧运动雷氏大疣蜘蛛毒素小鼠H22肝脏肿瘤

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RhoA/ROCK信号通路在小鼠H22皮下移植肝肿瘤及干预中的差异表达研究

RhoA/ROCK信号通路在小鼠H22皮下移植肝肿瘤及干预中的差异表达研...

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湖南省生理科学会2013年度学术年会

作者：毛海峰陈继新刘天云罗赤苗张国华陈嘉勤郑核朱敬生王茂材李林湖南师范大学体育学院南华大学附属邵阳医院

目的:本文以KM小鼠为研究对象,采用雷氏大疣蛛毒及抗癌中药干预手段,探讨Rhoa/Rock信号通路相关细胞因子,在小鼠H皮下移植肝肿瘤及干预中的差异表达和可能分子机制。方法:参照皮下注射法,将浓度为1×10个/ml小鼠H肝癌细胞培养悬液,接种... 详细信息

目的:本文以KM小鼠为研究对象,采用雷氏大疣蛛毒及抗癌中药干预手段,探讨Rhoa/Rock信号通路相关细胞因子,在小鼠H皮下移植肝肿瘤及干预中的差异表达和可能分子机制。方法:参照皮下注射法,将浓度为1×10个/ml小鼠H肝癌细胞培养悬液,接种于KM小鼠后颈部皮下。建模成功鼠随机分为3组:模型对照组,雷氏大疣蛛毒素用药组和抗癌中药组,每组10只。各干预组于动物建模成功后第三天,进行雷氏大疣蛛毒素和中药干预。雷氏大疣蛛毒素尾静脉注射0.3ml(药剂浓度为0.2μg/μl)连续用药20d;中药每天灌胃一次(2ml/次),给药12周。三组动物每4天测量1次肿瘤体积,并绘制肿瘤的生长曲线。停药后第二天禁食过夜,分离出肿瘤组织进行小鼠组织取材。肿瘤体积测量法计算其增殖的速度;HE染色法观察肿瘤细胞形态结构变化;免疫组化技术检测肿瘤组织中Rhoa/Rock信号通路及相关细胞因子蛋白水平的差异表达;结果:①肿瘤体积测量结果显示:肿瘤体积生长速度:模型对照组最快,中药干预组次之;雷氏大疣蛛毒素组生长速度最慢。②HE染色显示:模型对照组大鼠在整个实验阶段中肝细胞大量纤维化,可见大片状肝细胞变性、坏死,乃至肝细胞索结构紊乱;中药组均可见肝细胞少量点、片状坏死,肝小叶结构改变,肝索排列欠整齐;雷氏大疣蛛毒组无明显组织坏死,肝小叶结构基本正常,肝索排列较整齐。③免疫组织化学染色结果显示:二个干预组小鼠肿瘤组织p21阳性表达均高于模型非干预组,而RhoA、ROCK阳性表达较模型组低(P雷氏大疣蛛毒及中药干预手段,能有效改变RhoA/ROCK信号通路及相关细胞因子的表达水平,从而抑制或减慢肝肿瘤增殖与侵袭速度。其具体机制还有待进一步研究证实。

关键词： RhoA/ROCK信号通路 H22皮下移植肝肿瘤雷氏大疣蜘蛛毒素 KM小鼠抗癌中药

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