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安徽农业科学 2024年第8期52卷 95-99页

作者：孙秀秀王春梅陈加利夏腾飞冯依欣郑道君海南省农业科学院三亚研究院海南三亚572025 海南省农业科学院热带园艺研究所/国家种质资源澄迈观测实验站/海南省农业科学院海南省热带特种经济植物种质资源创新利用重点实验室海南海口571100

[目的]分析DNA、引物,dNTPs、Taq DNA聚合酶4种因素对雷公笋SCoT-PCR扩增结果的影响,通过最优的SCoT-PCR反应体系筛选多态性引物,为雷公笋种质资源分子标记研究提供条件。[方法]以海南雷公笋为材料,采用单因素试验和正交试验方法。[结果... 详细信息

[目的]分析DNA、引物,dNTPs、Taq DNA聚合酶4种因素对雷公笋SCoT-PCR扩增结果的影响,通过最优的SCoT-PCR反应体系筛选多态性引物,为雷公笋种质资源分子标记研究提供条件。[方法]以海南雷公笋为材料,采用单因素试验和正交试验方法。[结果]Taq酶对雷公笋SCoT-PCR扩增的影响最大,其次是模板DNA和dNTPs,最后是引物;最优反应体系为20μL体系中40 ng DNA,0.30μmol/L引物,0.25 mmol/L dNTPs,3.00 U Taq酶。经验证,该体系获得的扩增产物清晰稳定;应用该体系从40条SCoT引物筛选出8条多态性好,且适合雷公笋扩增的引物,多态性条带占62.64%。[结论]该研究为使用SCoT分子标记技术对雷公笋开展深入研究提供了重要的理论基础和技术支持。

关键词：雷公笋 SCoT 反应体系优化有效性引物

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雷公笋SRAP-PCR体系建立及有效引物筛选

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分子植物育种 2023年第17期21卷 5701-5708页

作者：谢秋霞孙秀秀王春梅夏腾飞郑道君陈业光陈加利冯依欣任家乐王健海南省农业科学院热带园艺研究所国家种质资源澄迈观测实验站海口571100 海南大学园艺学院海口571100 海南省农业科学院三亚研究院海口572000 海南大学热带作物学院海口571100

为构建雷公笋最佳SRAP-PCR反应体系以及评价并筛选雷公笋SRAP引物的有效性,本研究通过单因素试验和正交试验相结合的方法,对模板DNA、dNTPs、引物及Taq DNA聚合酶4种影响雷公笋SRAP-PCR扩增结果进行分析。单因素试验结果表明:雷公笋基因... 详细信息

为构建雷公笋最佳SRAP-PCR反应体系以及评价并筛选雷公笋SRAP引物的有效性,本研究通过单因素试验和正交试验相结合的方法,对模板DNA、dNTPs、引物及Taq DNA聚合酶4种影响雷公笋SRAP-PCR扩增结果进行分析。单因素试验结果表明:雷公笋基因组DNA浓度越高扩增效率越好,低浓度d NTPs利于扩增产物,而Taq DNA聚合酶和引物扩增高效率偏于中高浓度。正交试验结果表明:各因素对海南雷公笋SRAP-PCR扩增影响大小先后顺序分别为:引物=dNTPs>模板DNA>TaqDNA聚合酶;最优总体系为25μL时,4种影响扩增效率的因素最佳用量各为:模板DNA 100 ng、TaqDNA聚合酶6.40 U、dNTPs浓度0.12 mmol/L、引物浓度2.0μmol/L。利用SRAP-PCR最佳反应体系,从100对SRAP引物对中筛选出30对条带清晰的多态性引物,多态性比率平均值达到48.77%。研究结果可为海南雷公笋的遗传多样性分析、种质资源鉴定等研究提供参考依据。

关键词：雷公笋 SRAP 反应体系

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