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表达雪花莲外源凝集素基因的油菜转基因植株的获得(英文)

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复旦学报（自然科学版） 2001年第6期40卷 683-687页

作者：唐克轩徐亚男李旭峰孙小芬复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 四川大学生命科学学院四川成都610051

利用农杆菌系LBA44 0 4(pCAMBIA330 0RG)转化优良甘蓝型油菜恢复系W72 3的下胚轴节段 .pCAM BIA330 0RG含有Rss1启动子引导的雪花莲外源凝集素基因 (gna)和CaMV 35S启动子引导的除草剂抗性基因(bar) 经过两轮除草剂 (2 .5mg/Lbialaphos... 详细信息

利用农杆菌系LBA44 0 4(pCAMBIA330 0RG)转化优良甘蓝型油菜恢复系W72 3的下胚轴节段 .pCAM BIA330 0RG含有Rss1启动子引导的雪花莲外源凝集素基因 (gna)和CaMV 35S启动子引导的除草剂抗性基因(bar) 经过两轮除草剂 (2 .5mg/Lbialaphos)筛选 (两周 /轮 ) ,除草剂抗性再生芽被转入生根培养基中生根对根系旺盛生长的植株中所含 gna基因进行PCR分析 PCR分析证实了这些植株确为转基因植株利用West ern印迹法对随机选择的 5株含gna基因的转基因植株的分析发现 ,其中 4株表达了 gna基因目前正对这些表达

关键词：甘蓝型油菜 gna基因转基因植株雪花莲外源凝集素基因除草剂

转抗虫基因优良籼型恢复系的获得及其外源基因的遗传稳定性研究

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中国水稻科学 2002年第3期16卷 211-215页

作者：马炳田李平朱祯周开达四川农业大学水稻研究所四川温江611130 中国科学院遗传研究所北京100101

用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在... 详细信息

用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因 (gna )转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 ,通过 PCR、PCR- South-ern blotting和 Southern blotting等分子方法检测证明 ,外源基因已稳定遗传到转基因第三代 (T2 )。转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异。随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致。还讨论了 DNA微量提取法在转基因后代筛选中的运用。

关键词：转抗虫基因优良籼型恢复系外源基因遗传稳定性转基因水稻雪花莲外源凝集素基因 DNA微量提取法

根癌农杆菌介导北海道黄杨遗传转化体系的建立

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园艺学报 2008年第3期35卷 409-414页

作者：尚爱芹田传卫赵梁军田颖川中国农业大学观赏园艺与园林系中国科学院微生物研究所北京100080

在建立北海道黄杨(Euonymus japonicus ‘CuZhi’)再生体系的基础上,建立其遗传转化体系,以获得转雪花莲外源凝集素(Galanthus nivalis agglutinin,GNA)基因植株。采用根癌农杆菌(Agr-robacterium tumefaciens,LBA4404菌株)介导法,研究影响北海道黄杨遗传转化的若干因素。结果表明,预培养与否、菌液浓度、侵染时间、共培养时间等对转化频率都有一定的影响。在遗传转化过程中,不经预培养,根癌农杆菌浓度OD600=0.6,侵染下胚轴40min,再共培养3d,有利于获得最高遗传转化效率。抗性植株经PCR和DNA-Southern blot检测表明,目的基因已整合到北海道黄杨基因组中。

关键词：北海道黄杨雪花莲外源凝集素基因遗传转化

抗虫基因转化优良籼型保持系D297B的研究

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实验生物学报 2003年第4期36卷 249-254页

作者：马炳田王玲霞李平朱祯周开达四川农业大学水稻研究所中国科学院遗传与以育生物学研究所北京100101

本文报道了用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因(gna)转移到优良籼型杂交稻保持系D297B中。通过PCR、Southern blotting和Western blotting等分子检测方法证明,外源基因已整合到受体材料的基因组中并得到表达。蛋白活性测定结果显示转基... 详细信息

本文报道了用基因枪法将雪花莲外源凝集素基因(gna)转移到优良籼型杂交稻保持系D297B中。通过PCR、Southern blotting和Western blotting等分子检测方法证明,外源基因已整合到受体材料的基因组中并得到表达。蛋白活性测定结果显示转基因在受体中表达的蛋白具有生物活性。潮霉素抗性分析表明外源基因多数是以单位点形式整合并以3∶1方式遗传。另外。

关键词：籼稻 D297B 遗传转化基因枪转化法雪花莲外源凝集素基因抗虫性

优良籼型恢复系转基因植株的获得及其遗传稳定性(英文)

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应用与环境生物学报 2004年第5期10卷 551-555页

作者：马炳田王玲霞李平朱祯周开达四川农业大学水稻研究所成都温江611130 四川省农业生物技术工程研究中心中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101

报道了用基因枪转化法将雪花莲凝集素基因 (gna)转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 .PCR、PCR -Southernblotting和Southernblotting等分子检测证明 ,外源基因以多拷贝单位点方式整合到受体基因组中并稳定遗传到转基因第三代 (T2 ... 详细信息

报道了用基因枪转化法将雪花莲凝集素基因 (gna)转移到优良籼型杂交稻恢复系蜀恢 5 2 7中 .PCR、PCR -Southernblotting和Southernblotting等分子检测证明 ,外源基因以多拷贝单位点方式整合到受体基因组中并稳定遗传到转基因第三代 (T2 ) .转基因第一代植株 (T0 )在株高和结实率上与相应的组培、种子实生苗植株相比 ,发生明显的不可遗传的变异 ,随着繁殖代数的增加 ,转基因植株恢复到与对照植株一致 .Westernblotting表明 ,目的基因在转基因植株中正确表达 .蛋白活性分析显示 ,外源基因在转基因植株中合成的蛋白具有凝血生物活性 ,含量占可溶性总蛋白的0 .1%左右 .本文还对转基因技术在杂交稻育种中的应用进行了讨论 .图 4表 2参

关键词：籼稻抗虫基因遗传转化雪花莲外源凝集素基因遗传稳定性

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粳稻抗虫转基因保持系的研究

天津农业科学 2004年第3期10卷 7-11页

作者：李艳萍牛芝霞邹美智孙海波周维牛景朱祯徐鸿林天津市水稻研究所天津300112 中国科学院遗传与发育生物学研究所北京100101

利用基因枪转化法,以优质粳稻保持系早花二B为受体,获得了含有GNA和Hyg基因的转基因植株。对T2产生的6个纯合株系进行多代潮霉素筛选、PCR分子检测及稻飞虱接种鉴定,表明标记基因在受体中稳定遗传,并高效表达,且一经纯合不再分离;而目... 详细信息

利用基因枪转化法,以优质粳稻保持系早花二B为受体,获得了含有GNA和Hyg基因的转基因植株。对T2产生的6个纯合株系进行多代潮霉素筛选、PCR分子检测及稻飞虱接种鉴定,表明标记基因在受体中稳定遗传,并高效表达,且一经纯合不再分离;而目的基因表达效果不一样,只有T-10(克隆号A5-32)表达效果最好,其抗虫性达到中抗(MR)以上水平,比受体抗性(S)明显提高。将转基因保持系与不育系早花二A回交,获得的转基因不育系高抗潮霉素,且抗性也完全纯合,表明转基因保持系的抗性基因已转化到不育系中,并得到高效表达。

关键词：粳稻转基因保持系雪花莲外源凝集素基因潮霉素抗性基因抗虫性

GNA成熟蛋白基因亚克隆及其原核表达载体构建

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生物技术 2002年第6期12卷 1-2页

作者：罗素兰林俊芳陈如凯唐克轩郭丽琼海南大学海洋学院海南海口570228 热带作物生物技术国家重点实验室海南海口571101 福建农林大学甘蔗综合研究所福建福州350002 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200433

雪花莲外源凝集素 (GNA)对刺吸式昆虫和某些咀嚼式昆虫以及多种线虫均有毒性。从含GNA前体蛋白基因的质粒中亚克隆出GNA的成熟蛋白基因MGNA ,将MGNA基因插入大肠杆菌表达载体pET2 2b的不同位点 ,再经测序验证 ,得到了三种不同表达形式的... 详细信息

雪花莲外源凝集素 (GNA)对刺吸式昆虫和某些咀嚼式昆虫以及多种线虫均有毒性。从含GNA前体蛋白基因的质粒中亚克隆出GNA的成熟蛋白基因MGNA ,将MGNA基因插入大肠杆菌表达载体pET2 2b的不同位点 ,再经测序验证 ,得到了三种不同表达形式的GNA原核表达载体 :2 2bG1 (分泌型融合GNA蛋白 )、2 2bG2 (包涵体型GNA蛋白 )、2 2bG3(分泌型天然GNA蛋白 ) ,这为进一步在大肠杆菌中表达GNA和将GNA制成生物农药奠定了基础。

关键词：雪花莲外源凝集素基因大肠杆菌 GNA成熟蛋白基因亚克隆原核表达载体