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隐孢子虫卵囊不同计数方法的比较

河南农业科学 2006年第5期35卷 102-104页

作者：贺桂芬宁长申张龙现闫文朝刘光辉菅复春孙铭飞王进产河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

应用PBS液计数法、孔雀绿染色计数法和3种甘油卵囊原液(甘油∶卵囊原液分别为1∶2,1∶1,2∶1)计数法,对同一样本中牛安氏隐孢子虫卵囊进行了计数和比较。结果表明,孔雀绿染色计数法具有灵敏、特异和易操作等特点,是一种比较好的隐孢子... 详细信息

应用PBS液计数法、孔雀绿染色计数法和3种甘油卵囊原液(甘油∶卵囊原液分别为1∶2,1∶1,2∶1)计数法,对同一样本中牛安氏隐孢子虫卵囊进行了计数和比较。结果表明,孔雀绿染色计数法具有灵敏、特异和易操作等特点,是一种比较好的隐孢子虫卵囊计数方法。

关键词：隐孢子虫卵囊计数法比较

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二氧化氯对水中隐孢子虫卵囊的杀灭特性

哈尔滨工业大学学报 2010年第8期42卷 1242-1245页

作者：吴明松张玉玲黄君礼李绍峰崔崇威田禹哈尔滨工业大学城市水资源与水环境国家重点实验室哈尔滨150090 华北电力大学环境科学与工程学院河北保定071003 深圳职业技术学院建筑与环境工程学院广东深圳518055

为扩展二氧化氯在饮用水安全中的应用,应用荧光活性染色的检活手段研究了二氧化氯投量、反应时间、温度及pH对安氏隐孢子虫卵囊杀灭效果的影响,并通过扫描电镜观察方法比较了杀灭前后卵囊的形态变化.结果表明:在1.5mg/L和2.5mg/L的投量... 详细信息

为扩展二氧化氯在饮用水安全中的应用,应用荧光活性染色的检活手段研究了二氧化氯投量、反应时间、温度及pH对安氏隐孢子虫卵囊杀灭效果的影响,并通过扫描电镜观察方法比较了杀灭前后卵囊的形态变化.结果表明:在1.5mg/L和2.5mg/L的投量下作用60min时,杀灭率分别达90%和100%.温度越高杀灭效果越好,当温度从5℃升至30℃时,2mg/LClO2投量下卵囊的杀灭率从54%提高到70%;pH值对杀灭效果影响不大.二氧化氯对于隐孢子虫卵囊有很强的穿透性,杀灭后卵囊形态并未受到严重破坏.二氧化氯可在常规饮用水条件下有效地杀灭隐孢子虫卵囊,从而为工程应用提供理论依据.

关键词：二氧化氯饮用水消毒隐孢子虫卵囊杀灭特性

隐孢子虫卵囊分离鉴定及锌和维生素A对小鼠感染的影响

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隐孢子虫卵囊分离鉴定及锌和维生素A对小鼠感染的影响

作者：梁俊文南京农业大学

学位级别：硕士

本论文对南京地区犊牛粪便中的隐孢子虫卵囊进行了分离鉴定，并对该地区犊牛隐孢子虫的感染情况作了较为系统的调查，同时首次研究了锌和/或VA对小鼠隐孢子虫感染的影响。具体内容如下：（1）采... 详细信息

本论文对南京地区犊牛粪便中的隐孢子虫卵囊进行了分离鉴定，并对该地区犊牛隐孢子虫的感染情况作了较为系统的调查，同时首次研究了锌和/或VA对小鼠隐孢子虫感染的影响。具体内容如下：（1）采集南京地区三个奶牛场2-4周龄犊牛新鲜粪便，应用不连续蔗糖密度梯度离心法分离纯化隐孢子虫卵囊，然后通过用光学显微镜观察，单克隆抗体间接免疫荧光试验和动物感染试验进行鉴定。结果显示，该地区犊牛感染的隐孢子虫为小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum），从而为该地区隐孢子虫病的防治提供了科学依据，同时为开展隐孢子虫病的研究提供了新的分离株。这是国内首次应用单克隆抗体技术和免疫荧光技术鉴定隐孢子虫卵囊。（2）以本实验室单克隆抗体鉴定的隐孢子虫卵囊为标准，首次对南京地区三个奶牛场6月龄以内的犊牛隐孢子虫的感染情况进行了调查，在被调查的55头犊牛中有16头犊牛的粪便中查到了隐孢子虫卵囊，其平均感染率为29.1％（16/55）。虽然其中两个奶牛场感染率（分别是40％和35.7％）高于另外一场（19.2％），但统计学分析表明，三个奶牛场的感染率差异不显著（P＞0.05）。另外，各个奶牛场的隐孢子虫感染强度和感染率在1-3月龄时均比在4-6月龄时高，统计结果表明差异显著（P＜0.05）。作者认为，这可能是因为隐孢子虫的感染与机体的免疫状态有关。（3）为探讨锌和VA对隐孢子虫感染小鼠的影响，将75只清洁级昆明小鼠随机分成5组，各组均饲喂自制日粮，其中Ⅱ组以饮水方式添加锌(38.5μmol/ml〕、 Ⅲ组以灌喂的方法添加VA（400IU/0.1ml）、Ⅳ组添加锌和VA，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 组均在试验开始时灌喂小隐孢子虫卵囊（2.56×10~6个卵囊/ml）。Ⅱ组、Ⅲ组和 Ⅳ组小鼠的粪便排卵量和排卵持续时间分别显著地低于Ⅰ组（P＜0.05）;在试验的第二周和结束时，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠血液中CD4、CD8细胞百分率以及CD4/CD8比值均极显著高于Ⅰ组（P＜0.01）。结果表明锌和/或VA能够增强小鼠的细胞免疫功能，提高机体抵抗隐孢子虫感染的能力。

关键词：隐孢子虫卵囊单克隆抗体间接免疫荧光试验锌维生素A 辅助性T 淋巴细胞细胞毒性 T淋巴细胞

生菜污染隐孢子虫卵囊洗脱与巢式PCR检测方法的研究

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中国人兽共患病学报 2020年第3期36卷 211-217页

作者：李俊强张凯慧崔朝辉王荣军菅复春张素梅宁长申张龙现河南农业大学牧医工程学院郑州450046 河南中医药大学中医药科学院郑州450046

目的比较生菜表面污染隐孢子虫卵囊的洗脱与检测方法。方法对生菜表面人工"种植"的隐孢子虫卵囊的洗脱次数、振荡方式、振荡频率、振荡时间、洗脱液种类等进行比较,以及3种商业化DNA提取试剂盒提取水溶液中隐孢子虫卵囊DNA的效果进行比... 详细信息

目的比较生菜表面污染隐孢子虫卵囊的洗脱与检测方法。方法对生菜表面人工"种植"的隐孢子虫卵囊的洗脱次数、振荡方式、振荡频率、振荡时间、洗脱液种类等进行比较,以及3种商业化DNA提取试剂盒提取水溶液中隐孢子虫卵囊DNA的效果进行比较。结果采取往返振荡,振荡频率为100次/min,振荡时间为1 h,洗脱液采用1%Alconox■R时,其总体回收率最高,达71.40%。不同DNA试剂盒比较显示,土壤DNA提取试剂盒与粪便DNA提取试剂盒较组织DNA提取试剂盒提取水溶液中隐孢子虫卵囊DNA的质与量均高。结论本研究建立了巢式PCR检测生菜表面微小隐孢子虫卵囊的检测方法,为蔬菜的食品安全提供新的技术方法。

关键词：隐孢子虫卵囊生菜洗脱方法检测方法 DNA提取

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巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

畜牧兽医学报 2003年第5期34卷 509-514页

作者：张龙现蒋金书刘群宁长申朱引洁吴绍强河南农业大学郑州450002 中国农业大学动物医学院北京100094

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵... 详细信息

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325bp和820bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2 86×103个/ml和≤2 86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2 86×107个/g和≤2 86个/g。有望发展为试剂盒。

关键词：巢式PCR检测隐孢子虫卵囊人畜共患原虫病临床样品纯化数量奶牛粪便

混凝沉淀法富集分离水中隐孢子虫卵囊的实验研究

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环境与健康杂志 2013年第2期30卷 102-104页

作者：刘美霞杨忠委王华然李梅李乐刘颖尹静内蒙古医科大学公共卫生学院内蒙古呼和浩特010010 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室

目的建立混凝沉淀富集回收水中隐孢子虫卵囊的方法。方法以4μm荧光微球为研究对象,采用混凝沉淀试验,通过正交设计筛选出最佳混凝剂[聚合氯化铝(PAC)、水溶性壳聚糖(WSC)、1 mol/L的NaOH溶液用量]的配方,并观察不同pH值(6～9)、浑浊度(... 详细信息

目的建立混凝沉淀富集回收水中隐孢子虫卵囊的方法。方法以4μm荧光微球为研究对象,采用混凝沉淀试验,通过正交设计筛选出最佳混凝剂[聚合氯化铝(PAC)、水溶性壳聚糖(WSC)、1 mol/L的NaOH溶液用量]的配方,并观察不同pH值(6～9)、浑浊度(0～15 NTU)和水温(5～15℃)对回收率的影响。结果确定了最佳混凝配方,聚合氯化铝浓度为80 mg/L,壳聚糖浓度为30 mg/L,1 mol/L氢氧化钠溶液用量为0.6 ml。当pH值在6～9范围内,回收率均在86%以上;当水温在5～25℃范围内,回收率在55%以上;当浑浊度为0～15 NTU范围内,回收率均在90%以上。且回收率均随着pH值、水温和浑浊度的升高而上升。向实际水样投加隐孢子虫,采用混凝沉淀法与EPA1623法进行富集比较,差异无统计学意义。结论该方法能够高效富集回收水中的隐孢子虫卵囊,并对实验条件要求较低,适用于一般实验室对水中隐孢子虫卵囊的检测。

关键词：混凝沉淀荧光微球隐孢子虫卵囊

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微小隐孢子虫卵囊的形态结构与染色观察

中国病原生物学杂志 2011年第7期6卷 511-512,556,F0004页

作者：陈甫青岛农业大学动物科技学院山东青岛266109

目的研究隐孢子虫卵囊的形态与染色特点。方法应用图像分析系统,观察隐孢子虫卵囊的形态与内部结构,并应用Adobe Photoshop CS4软件绘制各种卵囊形态的模拟图。卵囊经改良抗酸染色法、姬姆萨染色法、阿利新蓝染色法和苏木精-伊红染色法... 详细信息

目的研究隐孢子虫卵囊的形态与染色特点。方法应用图像分析系统,观察隐孢子虫卵囊的形态与内部结构,并应用Adobe Photoshop CS4软件绘制各种卵囊形态的模拟图。卵囊经改良抗酸染色法、姬姆萨染色法、阿利新蓝染色法和苏木精-伊红染色法染色后观察其染色特点。结果隐孢子虫卵囊呈圆形或椭圆形,外层有一薄的卵囊壁,内部含有0~4个月牙形子孢子和圆点状残留体,个别卵囊呈空泡状。隐孢子虫卵囊经改良抗酸染色、姬姆萨染色、阿利新蓝染色和HE染色后,分别呈现玫瑰红色、蓝色、绿色和红色。结论隐孢子虫卵囊形态和内部结构多样,改良抗酸染色法染色效果较好。

关键词：隐孢子虫卵囊改良抗酸染色姬姆萨染色阿利新蓝染色苏木精-伊红染色

二氧化氯对水中隐孢子虫卵囊杀灭效果及机理初探

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二氧化氯对水中隐孢子虫卵囊杀灭效果及机理初探

作者：高云霞哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

隐孢子虫是一种人畜共患性寄生原虫,广泛存在于动物中,寄生于人体的主要是微小隐孢子虫,可引起隐孢子虫病,是机会性致病原虫。隐孢子虫可在城市供排水系统以水为媒介传播,并直接威胁饮用水安全,隐孢子虫问题已引起世界各国的广泛关注。... 详细信息

隐孢子虫是一种人畜共患性寄生原虫,广泛存在于动物中,寄生于人体的主要是微小隐孢子虫,可引起隐孢子虫病,是机会性致病原虫。隐孢子虫可在城市供排水系统以水为媒介传播,并直接威胁饮用水安全,隐孢子虫问题已引起世界各国的广泛关注。我国新颁布的饮用水标准中也对其作出了限值规定。ClO是一种具有良好应用前景的优良消毒剂和强氧化剂,对水中的许多细菌和病毒均具有较好的去除效果,而且几乎不与水中的有机物形成三卤甲烷等有机卤代物,在饮用水处理中具有广阔的应用前景。本论文以ClO为消毒剂,研究了其对隐孢子虫卵囊的杀灭效果及二者之间的反应动力学,探讨了ClO杀灭水中的隐孢子虫卵囊的可行性,为ClO处理实际水体中隐孢子虫卵囊的应用奠定了理论基础。本文以隐孢子虫为模拟污染物,研究了影响ClO杀灭隐孢子虫卵囊效果的因素如ClO投量、反应时间、温度和溶液pH等,结果表明ClO投量和反应时间对ClO杀灭隐孢子虫卵囊的影响明显,而pH在3.2.7的范围内对其没有太大影响,温度对其影响也不大。确定出ClO杀灭隐孢子虫卵囊的最佳工艺条件为:ClO投量为5mg/L,反应时间为60min,pH为7.2,温度为15℃。最佳条件下隐孢子虫卵囊的最大杀灭率为85.58%。论文对ClO杀灭水中隐孢子虫卵囊的反应动力学进行了研究。结果表明,ClO杀灭隐孢子虫卵囊的反应符合准一阶Chick–Watson动力学模型,在反应刚开始存在一个停滞阶段,停滞阶段之后的反应为准一级反应。在pH为7.2、反应温度为20℃的条件下, ClO杀灭隐孢子虫卵囊的反应速率常数为0.0063L/(mg·min)。考察了溶液pH和温度对ClO杀灭隐孢子虫卵囊的反应速率常数k的影响,结果表明k值受溶液pH的影响不显著,但却随温度的增加而增大。其反应的表观活化能的平均值为91.4kJ/mol,这表明,在常规水处理条件下,用ClO杀灭隐孢子虫卵囊的方法是行之有效的。

关键词： ClO2 隐孢子虫卵囊杀灭效果动力学

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隐孢子虫卵囊的检测与去除

净水技术 2003年第2期22卷 4-6,39页

作者：何少华谢水波黄仕元南华大学建筑工程与资源环境学院湖南衡阳421001

隐孢子虫卵囊的主要传播途径是水体,其引起的病即隐孢子虫病到目前为止尚无针对性的治疗方法。该文详细介绍了隐孢子虫卵囊的检测步骤,对评价消毒后隐孢子虫卵囊存活率的方法进行了探讨,并总结了几种新型消毒方法的消毒灭活效果。

关键词：原水饮用水隐孢子虫卵囊检测灭活体外脱囊法