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RT-nestedPCR和限制性酶切分析用于HV的检测和基因分型

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解放军医学杂志 2001年第6期26卷 448-450页

作者：韦三华白雪帆陈红梅潘蕾李光玉第四军医大学唐都医院西安710038

为建立检测肾综合征出血热 (HFRS)患者血清中汉坦病毒 (HV)基因的RT nestedPCR方法 ,并进一步进行限制性酶切分型 ,设计并合成互补于HVS基因片段的引物 ,对 78例HFRS患者血清进行RT nestedPCR检测 ,并对PCR产物进行酶切分析。结果显示 ... 详细信息

为建立检测肾综合征出血热 (HFRS)患者血清中汉坦病毒 (HV)基因的RT nestedPCR方法 ,并进一步进行限制性酶切分型 ,设计并合成互补于HVS基因片段的引物 ,对 78例HFRS患者血清进行RT nestedPCR检测 ,并对PCR产物进行酶切分析。结果显示 ,阳性率分别为 76 % (≤ 7天 )、6 7% (8～ 14天 )、43% (15～2 1天 )和 2 9% (>2 1天 )。 48例检测阳性患者PCR产物酶切分型 ,47例为Ⅰ型 ,1例为Ⅱ型。提示RT nestedPCR用于早期HFRS患者的HV基因检测 ,具有直接、敏感、特异等优点。

关键词：肾综合征性出血热聚合酶链反应限制性酶切分析基因分型

EDSV分离株(Hd1株)DNA的限制性酶切分析和克隆

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养禽与禽病防治 2007年第12期 14-15页

作者：王雪敏石玉祥陈溥言河北工程大学动物医学系邯郸560210 南京农业大学动物医学院南京100952

用SDS-ProteinaseK消化EDSV抗原-抗体复合物,苯酚-氯仿抽提DNA,得到了完整的EDSV基因组DNA,用限制性内切酶BalⅠ、BalⅡ、BamHⅠ、ClaⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ、HpaⅠ、KpnⅠ、PstⅠ、PvuⅡ、SalⅠ、SmalⅠ、XbaⅠ酶切及EcoRⅠ+BamHⅠ双酶切消化,对EDSV分离株Hd1的DNA进行了限制性内切酶酶切分析。结果表明,分离株Hd1与标准株AV127DNA各酶切片段数及各片段的相对分子量(kb)未见差异,说明分离株Hd1和标准株AV127属于同一基因型。将EcoRⅠ+BamHⅠ双酶切得到的7个片段,与双酶切线性化的pUC19载体质粒连接,转化***5α,克隆了其中的5个片段。

关键词： EDSV DNA 限制性酶切分析克隆

新疆地区皮肤利什曼病病原体SSU rDNA PCR扩增及限制性酶切分析

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实用寄生虫病杂志 1997年第1期5卷 1-3页

作者：陈建平胡孝素任灏远李凡罗莉华西医科大学寄生虫研究室新疆石油局总医院皮肤科克拉玛依834000

我们采用引物R200和R300，对新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病（CL）患者的皮肤病变组织内抽提的微量利什曼原虫SSUrDNA，以及有关利什县原虫种株的SSUrDNA进行PCR扩增，然后分别采用限制住内切酶Rsal和Hhal对PCR扩增产物进行限制性酶切分... 详细信息

我们采用引物R200和R300，对新疆克拉玛依地区皮肤利什曼病（CL）患者的皮肤病变组织内抽提的微量利什曼原虫SSUrDNA，以及有关利什县原虫种株的SSUrDNA进行PCR扩增，然后分别采用限制住内切酶Rsal和Hhal对PCR扩增产物进行限制性酶切分析。结果显示：采用RsaⅠ进行限制性酶切分析，克拉玛依地区2例CL患者皮肤病变组织标本的PCR扩增产物经酶切后，其电泳图形与***完全相同。显示克拉玛依地区CL病原体SSUrDNA的PCR扩增产物与***存在相同的限制性内切酶图谱。

关键词：皮肤利什曼病 SSU rDNA PCR 限制性酶切分析

产蛋下降综合征病毒DNA限制性酶切分析的研究

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畜牧与饲料科学 2004年第6期25卷 40-41页

作者：周伟光刘大程关平原张孝荣赵原斌内蒙古农业大学动物科学与医学学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古包头市农牧业局内蒙古包头014030 内蒙古包头市红格塔拉种羊场内蒙古包头014500

选用BamHI、KpnI、PstI、EcoRI、XbaI、HindⅢ等6种限制性内切酶对EDS76病毒内蒙古地区分离株穴N3、B4雪和参考株穴AV-127雪病毒基因组DNA进行酶切分析,均产生4,5,9,4,2和10条DNA片段,而且N3、B4株与参考株病毒基因组DNA之间的酶切图形... 详细信息

选用BamHI、KpnI、PstI、EcoRI、XbaI、HindⅢ等6种限制性内切酶对EDS76病毒内蒙古地区分离株穴N3、B4雪和参考株穴AV-127雪病毒基因组DNA进行酶切分析,均产生4,5,9,4,2和10条DNA片段,而且N3、B4株与参考株病毒基因组DNA之间的酶切图形、片段大小也十分相似,从分子水平上证实N3、B4株是EDS76病毒熏同时也说明限制性内切酶分析法是检测EDS76病毒的一种简便快速的方法。

关键词：病毒DNA 限制性内切酶限制性酶切分析病毒基因组 EDS 分子水平参考产蛋下降综合征分离株内蒙古地区

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绿头鸭mtDNA限制性内切酶酶切分析

厦门大学学报（自然科学版） 1995年第4期34卷 614-618页

作者：郑文竹陈奕欣吴岚厦门大学生物学系福建厦门

采用碱变性法制备绿头鸭肝细胞ｍｔＤＮＡ，经纯化后测其分子量为１６．７ｋｂ．用限制性内切酶进行酶切分析，结果表明ＢａｍＨⅠ、ｐｓｔⅠ和ＨｉｎｄⅢ在绿卖鸭ｎｔＤＮＡ分子上分别有４个、２个和３个酶切位点。与由番鸭、北京鸭和... 详细信息

采用碱变性法制备绿头鸭肝细胞ｍｔＤＮＡ，经纯化后测其分子量为１６．７ｋｂ．用限制性内切酶进行酶切分析，结果表明ＢａｍＨⅠ、ｐｓｔⅠ和ＨｉｎｄⅢ在绿卖鸭ｎｔＤＮＡ分子上分别有４个、２个和３个酶切位点。与由番鸭、北京鸭和建昌鸭肝细胞ｍｔＤＮＡ为材料所得的研究结果比较，发现绿头鸭与番鸭及家鸭在ｍｔＤＮＡ种质方面存在着高度差异。

关键词：绿头鸭 mtDNA 限制性酶切分析

用限制性酶切和Southern杂交对葡萄无核基因分子标记的分析

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农业生物技术学报 2005年第3期13卷 294-298页

作者：杨克强王跃进张今今王西平万怡震张剑侠杨凌712100 杨凌712100 陕西师范大学生命科学学院西安710062 泰安271018 西北农林科技大学农业部西北园艺植物种质资源与遗传改良重点开放实验室杨凌712100 山东农业大学林学院西北农林科技大学农业部西北园艺植物种质资源与遗传改良重点开放实验室

对葡萄(Vitis vinifera)无核基因特异标记39970524-5-564和39970524-6-1538的DNA序列进行了克隆和测序,其序列全长分别为564和1538bp,GenBank登录号为AY327513和AY327514。用Wingene231DNA分析软件对39970524-5-564和39970524-6-1538序列的限制性内切酶酶切位点进行了分析,可识别6个碱基及其以上序列的酶切位点分别有30和131个;EcoRⅠ和HindⅢ在39970524-5-564特异标记上没有酶切位点,而EcoRⅠ在39970524-6-1538第135个碱基处有一个酶切位点,HindⅢ在39970524-6-1538上没有酶切位点。用39970524-5-564DNA作探针对葡萄基因组DNA作Southern杂交,结果在无核亲本红光无核及无核基因供给者无核白和无核杂种上出现杂交带,而且呈单拷贝,而在有核亲本红地球及有核杂种上未出现杂交带,进一步证明了39970524-5-564特异片段来源于无核葡萄基因组,为检测和克隆葡萄无核基因提供了证据。

关键词：葡萄无核基因限制性酶切分析 Southern杂交

马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离、克隆及初步酶切分析

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中国兽医学报 1998年第4期18卷 317-320页

作者：邢力彭大新刘秀梵张如宽吴艳涛扬州大学农学院动物医学系

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据... 详细信息

将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。

关键词：马立克氏病病毒 B抗原限制性酶切分析 PCR

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双孢蘑菇mtDNA粗提物的酶切分析

食用菌学报 2001年第1期8卷 1-4页

作者：廖剑华王泽生陈美元李洪荣卢政辉福建省轻工业研究所福州350005

发展了一种粗提双孢蘑菇mtDNA的方法 ,获得As2 796亲代及子代系列菌株的mtDNA粗提物 ,用HaeⅢ、CfoI、MspI、TaqI等内切酶进行酶切。

关键词：双孢蘑菇 mtDNA 限制性酶切分析粗提物基因分型

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脂质体介导外源性基因在骨髓基质细胞表达

中南大学学报（医学版） 2005年第2期30卷 140-144页

作者：孙吉平贾延劼罗芳宋建辉杨于嘉中南大学湘雅医院儿科长沙410008

目的:用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法:构建的重组载体鉴定后,以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率... 详细信息

目的:用阳离子脂质体介导真核表达载体pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法:构建的重组载体鉴定后,以脂质体介导其转染骨髓基质细胞,改变DNA,脂质体的量,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h进行细胞免疫组化染色检测目的基因的表达情况。结果:限制性酶切分析证实重组后的载体成功载入PDX 1基因;克隆的目的片断经序列测定与GenBank公布的序列一致;质粒∶脂质体为1∶1或1∶2的转染效率最佳;细胞免疫化学染色检测证实转染后骨髓基质细胞有PDX 1基因表达。结论:成功构建了含有PDX 1基因的真核表达载体;通过优化转染条件提高了pEGFP PDX 1转染大鼠骨髓基质细胞的效率,为成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。

关键词：外源性基因细胞表达大鼠骨髓基质细胞阳离子脂质体介导真核表达载体限制性酶切分析显微镜下观察细胞免疫组化细胞免疫化学转染效率染色检测 PDX-1 重组载体表达情况目的基因序列测定基因表达种子细胞组织工程