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毛细管电泳-限制性：片段长度多态性分析检测胃癌H-ras基因点突变

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化学学报 2009年第4期67卷 323-328页

作者：刘圆圆王荣贾正平郭志强辛晓婷谢华马骏王娟李文斌兰州军区兰州总医院临床药理基地兰州730050 甘肃省红十字血液中心兰州730046 兰州大学生命科学学院兰州730000

建立一种毛细管电泳快速高效检测限制性内切酶酶切产物的方法,使其更好地用于基因诊断.以甲基纤维素(Methyl cellulose,MC)为筛分介质,用pUC19 DNA/MspI(HpaⅡ)Marker标准DNA片段为实验对象,通过考察筛分介质的浓度、pH值、毛细管的温... 详细信息

建立一种毛细管电泳快速高效检测限制性内切酶酶切产物的方法,使其更好地用于基因诊断.以甲基纤维素(Methyl cellulose,MC)为筛分介质,用pUC19 DNA/MspI(HpaⅡ)Marker标准DNA片段为实验对象,通过考察筛分介质的浓度、pH值、毛细管的温度和运行电压优化出分离小于600bp的双链DNA片段的最适条件,并将此方法应用于临床59例胃癌患者肿瘤组织H-ras基因12位密码子点突变情况的检测.MC是一种良好的筛分介质,运用其进行毛细管电泳对于遗传性疾病的诊断将更加快速、准确、简便、灵敏。

关键词：毛细管电泳甲基纤维素限制性片段长度多态性 H-ras 基因突变

基于沙眼衣原体ompl基因限制性片段长度多态性和测序法用于女性生殖道感染沙眼衣原体基因分型

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基因组学与应用生物学 2015年第7期34卷 1361-1366页

作者：陈煜岊邓国明徐鹏杨岚陈静蒋燕明柳州市人民医院妇科柳州545006 柳州市人民医院检验科柳州545006

沙眼衣原体D-K型见于女性生殖道感染,尤其是宫颈感染的主要病原体,基因分型针对编码主外膜蛋白(MOMP)编码基因(ompl)多态性,CT各型ompl基因长度略有差异,总长度均在1.1 kb左右,使用ompl基因限制性片段长度多态性(restriction fragment l... 详细信息

沙眼衣原体D-K型见于女性生殖道感染,尤其是宫颈感染的主要病原体,基因分型针对编码主外膜蛋白(MOMP)编码基因(ompl)多态性,CT各型ompl基因长度略有差异,总长度均在1.1 kb左右,使用ompl基因限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)进行分型,但是不同的引物设计和实验条件,结果的判读不同,结合ompl基因测序法,能构建出不同实验条件下PCR-RFLP酶切图谱,便于临床判读,并且通过BLASTA及多序列比对发现ompl基因序列碱基变异。收集2010年1月至2014年5月在柳州市人民医院就诊的宫颈脱落细胞沙眼衣原体阳性女性,结合omp1基因测序法进行分型,建立反应体系,通过ompl基因测序结果比对,确定本实验条件的参考酶切图谱,用于临床标本的CT分型检测。基于ompl基因的PCR-RFLP技术是目前沙眼衣原体基因分型临床可运用的方法。

关键词：限制性片段长度多态性测序限制酶酶切图谱

聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析复方川贝散中川贝母成分

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安徽医药 2021年第10期25卷 1946-1949页

作者：张国林魏星邢以文薛满苏州市药品检验检测研究中心江苏苏州215000

目的采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析复方川贝散中川贝母成分。方法研究起止时间为2019年2月至2019年5月。新型快速植物基因组DNA提取试剂盒分别提取复方川贝母和蛇胆川贝液中DNA,PCR扩增后采用SmaⅠ限制性内切... 详细信息

目的采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析复方川贝散中川贝母成分。方法研究起止时间为2019年2月至2019年5月。新型快速植物基因组DNA提取试剂盒分别提取复方川贝母和蛇胆川贝液中DNA,PCR扩增后采用SmaⅠ限制性内切酶酶切,并进行琼脂糖凝胶电泳分析。同时,对川贝母含量为0%-40%的样本进行PCR-RFLP检测。结果复方川贝散和蛇胆川贝液PCR扩增后均出现特异性条带,但经SmaⅠ酶切后复方川贝散在100-250 bp出现两条特异性酶切条带,而蛇胆川贝液无特异性条带。川贝母含量为4%时,经PCR-RFLP分析在100-250 bp得到两条特异性DNA条带。结论PCR-RFLP可有效分析复方川贝散中川贝母成分,且对含量超过4%的样本可有效检出。

关键词：贝母属主成分分析聚合酶链式反应限制性片段长度多态性川贝母平贝母复方川贝散

棘阿米巴土壤分离株CB/S1的线粒体DNA限制性片段长度多态性

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现代预防医学 2012年第4期39卷 972-973+976页

作者：崔春权玄英花郑善子金松竹杨香延边大学基础医学院免疫学与病原生物学教研部延边大学工学院计算机科学与技术系

[目的]观察棘阿米巴土壤分离株CB/S1的线粒体DNA限制性片段长度多态性(RFLP)。[方法]从棘阿米巴CB/S1提取线粒体DNA用EcoRI酶切,与土壤分离株CJY/S4比较观察限制性片段长度多态性。用地衣红-卡红染色观察棘阿米巴内共生细菌。[结果]棘... 详细信息

[目的]观察棘阿米巴土壤分离株CB/S1的线粒体DNA限制性片段长度多态性(RFLP)。[方法]从棘阿米巴CB/S1提取线粒体DNA用EcoRI酶切,与土壤分离株CJY/S4比较观察限制性片段长度多态性。用地衣红-卡红染色观察棘阿米巴内共生细菌。[结果]棘阿米巴土壤分离株CB/S1线粒体DNARFLP与CJY/S4相比除了额外的片段(extra bands),两个分离株具有相同的片段模式。经地衣红染色观察CB/S1内共生细菌呈黑色、棒状、不规则的分布在胞质内。[结论]额外的片段表明棘阿米巴CB/S1内含有内共生细菌的环状DNA,并且除了内共生细菌的存在棘阿米巴CB/S1与土壤分离株CJY/S4具有密切的亲缘关系。线粒体DNA限制性片段长度多态性是棘阿米巴分类及发现内共生细菌的简便而有效的方法。

关键词：棘阿米巴内共生细菌限制性片段长度多态性

应用限制性片段长度多态性检测幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性

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山西医科大学学报 2019年第8期50卷 1161-1164页

作者：吴文冰方超英陈雯吴绍莲福建医科大学省立临床医学院福建省立医院检验科福州350001 福建医科大学省立临床医学院福建省立医院内镜中心

目的建立限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)快速检测HP对克拉霉素耐药性的方法。方法抽提37例经纸片琼脂扩散法鉴定为克拉霉素耐药的HP菌株DNA及其对应的胃黏膜组织标本DNA,通过PCR技术扩增23S rRNA... 详细信息

目的建立限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)快速检测HP对克拉霉素耐药性的方法。方法抽提37例经纸片琼脂扩散法鉴定为克拉霉素耐药的HP菌株DNA及其对应的胃黏膜组织标本DNA,通过PCR技术扩增23S rRNA区425 bp基因,运用RFLP技术,采用BbsⅠ和BsaⅠ内切酶对PCR产物进行酶切分析,并进行DNA测序。结果37例克拉霉素耐药的HP菌株DNA经RFLP分析,21例能被BbsⅠ内切酶切开,13例能被BsaⅠ内切酶切开,3例不能被BbsⅠ和BsaⅠ内切酶切开,而且37例组织标本DNA检测结果与菌株DNA检测结果一致。结论RFLP可应用于HP对克拉霉素耐药性的快速检测,为临床用药提供指导。

关键词：幽门螺杆菌 23S rRNA 克拉霉素耐药限制性片段长度多态性基因突变

武汉地区犬瘟热病毒H基因的遗传特征及限制性片段长度多态性分析

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中国兽医科学 2010年第7期40卷 683-687页

作者：罗彬王建科易立杨莘程世鹏中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109

根据NCBI上登录的犬瘟热病毒序列,设计了1对检测引物,对武汉临床宠物犬的口、鼻、肛门棉拭子样品进行了检测。随机取其中的6份阳性病料,对其血凝素蛋白编码基因进行扩增并测序。序列分析显示,病毒分为野毒和疫苗毒两簇,野毒的分型和地... 详细信息

根据NCBI上登录的犬瘟热病毒序列,设计了1对检测引物,对武汉临床宠物犬的口、鼻、肛门棉拭子样品进行了检测。随机取其中的6份阳性病料,对其血凝素蛋白编码基因进行扩增并测序。序列分析显示,病毒分为野毒和疫苗毒两簇,野毒的分型和地理位置关系密切。预测蛋白序列分析显示,此次分离的毒株与疫苗毒潜在的N连接糖基化位点有很大差异,可能是病毒抗原性变化的原因之一。根据序列分析结果进行了限制性片段长度多态性分析,并初步建立了野毒和疫苗毒的鉴别诊断方法。

关键词：犬瘟热病毒血凝素蛋白基因序列分析限制性片段长度多态性

利用限制性片段长度多态性技术鉴别梅花鹿骨种属来源的研究

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中国药师 2017年第5期20卷 813-816页

作者：王自强吕晶邵泓夏瑞雪陈钢上海市食品药品检验所上海201203 哈尔滨誉衡药业股份有限公司

目的:建立一种基于限制性片段长度多态性技术鉴别梅花鹿骨粉的种属来源的方法。方法:对脱钙后的动物骨粉样品进行核糖核酸提取,通过聚合酶链式反应对梅花鹿特征片段进行扩增,并通过限制性片段长度多态性分析进一步对其种属来源进行确证... 详细信息

目的:建立一种基于限制性片段长度多态性技术鉴别梅花鹿骨粉的种属来源的方法。方法:对脱钙后的动物骨粉样品进行核糖核酸提取,通过聚合酶链式反应对梅花鹿特征片段进行扩增,并通过限制性片段长度多态性分析进一步对其种属来源进行确证。结果:通过对特征片段进行聚合酶链式反应扩增,可将梅花鹿及马鹿来源的骨粉样品与牛、猪、狗等动物骨粉样品进行区分。通过对限制性内切酶XbaI进行酶切后的片段长度进行分析,可进一步区分梅花鹿与马鹿来源的骨粉样品。结论:建立了一种基于限制性片段长度多态性技术的梅花鹿骨粉种属来源的鉴别方法。

关键词：梅花鹿骨限制性片段长度多态性聚合酶链式反应种属鉴别

乙型肝炎病毒S基因限制性片段长度多态性分型方法的建立及应用

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中华肝脏病杂志 2004年第8期12卷 475-478页

作者：彭亮丁静娟张莉莎贵阳医学院附属医院感染病科贵阳550004

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)S基因片段聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(RFLP)的基因分型方法并用于基因型与临床疾病谱关系的研究。方法比较GenBank中124株各基因型HBV全序列的S基因核苷酸序列及13株单独S基因序列,设计利用限制性... 详细信息

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)S基因片段聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(RFLP)的基因分型方法并用于基因型与临床疾病谱关系的研究。方法比较GenBank中124株各基因型HBV全序列的S基因核苷酸序列及13株单独S基因序列,设计利用限制性内切酶Mbo Ⅰ、BsTN Ⅰ、BsmA Ⅰ、HpaⅡ酶切S基因片段鉴定HBV基因型(A-F)的方法。对贵州地区176份乙型肝炎患者血清进行基因分型并分析基因型与疾病谱的关系。直接测序2份B型和3份C型毒株的PCR扩增产物,以验证本酶切分型方法的正确性。结果测序结果证明本方法能够准确鉴定基因型。在176份标本中,B型100份(56.8％),C型76份(43.2％),未发现其他基因型。B型中无症状携带者(ASC)比例(40.0％)高于C型(15.8％),x2=12.16,P性中度比例(14.0％)低于C型(31.6％),x2=7.88,P片段PCR-RFLP基因分型方法简便、准确。贵州地区存在HBV B和C基因型。

关键词：乙型肝炎病毒 S基因限制性片段长度多态性基因分型疾病谱

毛细管电泳-限制性片段长度多态性快速检测胃癌组织中P53基因点突变的方法

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分析化学 2007年第9期35卷 1305-1308页

作者：陈巧云王荣贾正平王业秋刘圆圆谢华马骏兰州军区兰州总医院全军临床药理基地西北师范大学生命科学学院兰州大学生命科学学院

为建立毛细管电泳快速高效检测小于70bp双链DNA的方法。对毛细管电泳过程中的各参数进行了考察,最终得到最佳分离体系(筛分介质浓度8%,添加剂甘露醇浓度8%,pH6.5,温度15℃,电场强度275V/cm),并将该体系用于临床59例胃癌患者肿瘤组织基因... 详细信息

为建立毛细管电泳快速高效检测小于70bp双链DNA的方法。对毛细管电泳过程中的各参数进行了考察,最终得到最佳分离体系(筛分介质浓度8%,添加剂甘露醇浓度8%,pH6.5,温度15℃,电场强度275V/cm),并将该体系用于临床59例胃癌患者肿瘤组织基因248位、249位密码子点突变情况的检测,30min之内同时检测了两个密码子位点的突变情况,实现了35bp和40bpDNA片段的基线分离,且分离度较高(1.642),初步建立了快速、高分辨诊断胃癌的方法。

关键词：毛细管电泳限制性片段长度多态性基因突变