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降落pcr在mRNA差异显示技术中的应用

现代预防医学 2010年第9期37卷 1708-1709+1727页

作者：李霞斌曹灵成争艳李瑶刘勇郭庆喜孙兴旺泸州医学院病理学教研室泸州医学院附属医院肾病内科

[目的]应用降落pcr(TD-pcr)快速扩增难治性肾病综合征(RNS)与激素敏感性肾病综合征(SSNS)患者外周血单个核细胞(PBMC)表达基因并筛选差异基因。[方法]利用mRNA差异显示技术,采用TD-pcr扩增RNS、SSNS患者PBMC基因表达谱和回收的差异片段... 详细信息

[目的]应用降落pcr(TD-pcr)快速扩增难治性肾病综合征(RNS)与激素敏感性肾病综合征(SSNS)患者外周血单个核细胞(PBMC)表达基因并筛选差异基因。[方法]利用mRNA差异显示技术,采用TD-pcr扩增RNS、SSNS患者PBMC基因表达谱和回收的差异片段,差异片段测序后在GenBank进行同源比较。[结果]琼脂糖电泳检测TD-pcr扩增产物条带清晰,产物量和条带数量多于普通pcr,经测序和同源分析筛选的差异片段纯度较高、特异性较强。[结论]TD-pcr能为RNS、SSNS患者间差异基因的筛选提供快速可靠的方法。

关键词：难治性肾病降落pcr mRNA差异显示

降落pcr法与细胞培养法检测生殖器疱疹患者不同标本HSV的对照研究

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中国病原生物学杂志 2011年第6期6卷 414-416页

作者：陈昭刘原君刘全忠天津医科大学总医院天津300052 河北省唐山市工人医院

目的比较降落pcr法与细胞培养法检测生殖器疱疹患者不同标本单纯疱疹病毒(HSV)阳性率,为临床医师选择检验方法提供参考。方法对生殖器疱疹患者每人取2个拭子,分别采用降落聚合酶链式反应(pcr)和VERO细胞培养法对临床株进行分离培养和鉴... 详细信息

目的比较降落pcr法与细胞培养法检测生殖器疱疹患者不同标本单纯疱疹病毒(HSV)阳性率,为临床医师选择检验方法提供参考。方法对生殖器疱疹患者每人取2个拭子,分别采用降落聚合酶链式反应(pcr)和VERO细胞培养法对临床株进行分离培养和鉴定。结果共检测41例患者,降落pcr方法32个标本阳性,均为HSV-Ⅱ;细胞培养方法7个标本阳性,经pcr鉴定为HSV-Ⅱ。降落pcr和细胞培养法HSV阳性率分别为78.0%和14.1%,差异有统计学意义(χ2=30.56,Ppcr法优于细胞培养法,值得推广。

关键词：单纯疱疹病毒降落pcr 细胞培养生殖器疱疹

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降落pcr法快速检测高羊茅转基因植株

生物技术通报 2006年第3期22卷 85-87页

作者：田路明黄丛林张秀海张潞生吴忠义北京农业生物技术研究中心北京100089 中国农业大学农学与生物技术学院北京100094

通过CTAB微量提取高羊茅(Festuca arundinacea)转基因再生植株基因组DNA。用9600型pcr仪器设计降落pcr反应程序,对高羊茅转基因植株两个片段OSISAP1(495bp)和GFP-nos(1 000bp)进行扩增;同时进行了pcr扩增的初步检测。结果表明降落pcr法... 详细信息

通过CTAB微量提取高羊茅(Festuca arundinacea)转基因再生植株基因组DNA。用9600型pcr仪器设计降落pcr反应程序,对高羊茅转基因植株两个片段OSISAP1(495bp)和GFP-nos(1 000bp)进行扩增;同时进行了pcr扩增的初步检测。结果表明降落pcr法能快速准确检测转基因植株;而且更适合多个基因片段同时检测,从而提高pcr分子检测的效率,以提高转基因植株鉴定效率。

关键词： CTAB 降落pcr 转基因植株

降落和重叠延伸pcr构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染实验

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南方医科大学学报 2011年第9期31卷 1513-1517页

作者：张超刘国炳田平阁周春平李学农南方医科大学病理学系/广东省分子肿瘤病理学重点实验室广东广州510515 南方医科大学南方医院妇产科广东广州510515

目的应用降落和重叠延伸pcr法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体,观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸pcr技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列,定向插入真核表达质粒pE... 详细信息

目的应用降落和重叠延伸pcr法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体,观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸pcr技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列,定向插入真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1.KNOB△HI,同时在缺失HI环部位引入EcoRV限制性酶切位点。在此基础上,用降落pcr克隆纤毛基因全长编码区序列,构建出腺病毒穿梭质粒pNEB-F5。利用凝胶图像分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy-1,pShuttle-GFP在E.coli BJ5183中同源重组,得腺病毒载体Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP。用Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP分别感染CD133+人大肠癌细胞株SW480,通过荧光显微镜观察感染效率。结果降落pcr和重叠延伸pcr都扩增出特异性条带,测序结果与预期相符。与Ad5-GFP相比,Ad5FHI-GFP对CD133+人大肠癌细胞株SW480有显著提高。结论利用降落和重叠延伸pcr成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,利用降落和重叠延伸pcr成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,其对CD133+人大肠癌细胞株SW480实验显示Ad5FHI-GFP组感染效率明显强于Ad5-GFP组。

关键词：降落pcr 重叠延伸pcr 肿瘤干细胞复制缺陷型腺病毒穿梭质粒

应用降落pcr和正交设计优化甘蔗“割手密”SSR-pcr反应体系

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分子植物育种 2016年第2期14卷 431-436页

作者：杨绍林王先宏李苏洁胡德分娄红波肖关丽杨清辉云南农业大学甘蔗研究所昆明650201

甘蔗野生种割手密抗逆性强,在甘蔗抗逆育种中具有较好的应用前景;割手密SSR分子标记技术体系的建立及优化可为割手密指纹图谱绘制、种质鉴定、遗传多样性及亲缘关系分析提供技术支持。本研究以21份割手密材料用改良CTAB法提取DNA,采用降... 详细信息

甘蔗野生种割手密抗逆性强,在甘蔗抗逆育种中具有较好的应用前景;割手密SSR分子标记技术体系的建立及优化可为割手密指纹图谱绘制、种质鉴定、遗传多样性及亲缘关系分析提供技术支持。本研究以21份割手密材料用改良CTAB法提取DNA,采用降落pcr和正交试验设计对扩增反应体系主要成分的浓度(DNA模板,引物,Mg2+,d NTPs,Taq聚合酶)进行了优化。结果表明建立的割手密Touchdown SSR-pcr分子标记技术体系操作简便,扩增条带清晰且多态性丰富,有较强的稳定性和可重复性,可为割手密资源的相关研究提供技术支持。

关键词：甘蔗割手密降落pcr SSR 正交设计

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利用降落pcr扩增KS基因

河南农业科学 2008年第11期37卷 87-90页

作者：刘炳辉曹远银程浩闫建芳齐小辉刘秋沈阳农业大学植物保护学院辽宁沈阳110161 大连民族学院生命科学学院辽宁大连116600

通过优化SDS法提取链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)和2株由生物技术与资源利用国家民委——教育部重点实验室分离获得的放线菌D8和D18基因组DNA,同时应用降落pcr和普通pcr扩增酮基合酶基因(ketosynthase,KS)。结果表明,扩增出的特... 详细信息

通过优化SDS法提取链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)和2株由生物技术与资源利用国家民委——教育部重点实验室分离获得的放线菌D8和D18基因组DNA,同时应用降落pcr和普通pcr扩增酮基合酶基因(ketosynthase,KS)。结果表明,扩增出的特异性条带与目的基因片段长度一致,降落pcr法较普通pcr法扩增KS基因特异性更高。使用普通Taq酶,降落pcr程序能明显提高pcr的特异性,它可用于扩增普通pcr难以扩增的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高pcr的特异性。

关键词：优化SDS法降落pcr 退火温度 KS基因

大豆DNA提取方法及降落pcr检测转基因成分的研究

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食品科学 2009年第24期30卷 355-358页

作者：陈彦潘见王亚惠爱玲杨毅合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心安徽合肥230009 安徽大学生命科学学院安徽合肥230039

采用改良的CTAB法,植物基因组DNA小量制备试剂盒,SDS法和高盐低pH值法4种方法提取安徽市场上8种大豆种子的基因组DNA,首次用降落pcr(TD-pcr)检测转基因成分,并对阳性产物进行酶切验证。结果表明改良的CTAB法是一种简单、高效的大豆DNA... 详细信息

采用改良的CTAB法,植物基因组DNA小量制备试剂盒,SDS法和高盐低pH值法4种方法提取安徽市场上8种大豆种子的基因组DNA,首次用降落pcr(TD-pcr)检测转基因成分,并对阳性产物进行酶切验证。结果表明改良的CTAB法是一种简单、高效的大豆DNA提取方法,能够满足各种分子生物学分析;TD-pcr显著提高了pcr扩增的特异性和效率,可有效检测大豆转基因成分,具有良好的应用前景。

关键词：大豆转基因成分改良的CTAB法降落pcr

绵羊肺炎支原体降落pcr-侧向层析快速检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2017年第6期39卷 466-470页

作者：杜鲜乔军陈诚张洁石峰陈创夫石河子大学生命科学学院新疆石河子832000 石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 石河子大学西部地区高发人兽共患传染性疾病防治协同创新中心新疆石河子832000

为建立一种简易、快速、特异性强的绵羊肺炎支原体(Mo)检测方法,本研究结合降落pcr(TD pcr)和侧向层析(LFA)技术,采用40nm的胶体金标记抗地高辛抗体,检测线和质控线分别包被链霉亲和素和羊抗鼠IgG,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条。... 详细信息

为建立一种简易、快速、特异性强的绵羊肺炎支原体(Mo)检测方法,本研究结合降落pcr(TD pcr)和侧向层析(LFA)技术,采用40nm的胶体金标记抗地高辛抗体,检测线和质控线分别包被链霉亲和素和羊抗鼠IgG,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条。两条特异性引物5'端分别标记地高辛和生物素,以Mo的全基因组为模板进行降落pcr,产物滴加于试纸条上样垫,检测结果可在15min内读取。通过对各环节的调整优化,建立了检测Mo病原的TD pcr-LFA快速检测方法。结果显示:该方法仅对MO检测呈阳性,对其它病原菌检测均为阴性,表明该方法特异性良好。其检测下限为3×102ccu/mL,敏感性较强。不同批次的pcr产物、不同批次的试纸条读取结果均一致,表明重复性和稳定性较好。本研究建立的Mo检测方法整合了TD pcr的特异性、敏感性和金标条快速、简单的特性,在2h内可完成检测,为建立适用于基层的临床检测方法奠定了基础。

关键词：绵羊肺炎支原体降落pcr 金标侧向层析技术快速检测

转基因玉米植株幼叶DNA快速提取及降落pcr检测研究

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甘肃农业大学学报 2012年第1期47卷 64-68页

作者：尹祥佳李永生王汉宁甘肃农业大学农学院甘肃兰州730070 中国农业科学院作物科学研究所北京100081

用农杆菌介导玉米自交系‘掖478’茎尖遗传转化的转基因玉米植株幼叶为材料,进行快速提取玉米叶片DNA方法的研究.在室温下取2cm2大小的玉米叶片,将叶片剪碎置于2.0mL离心管中,液氮处理后使用组织研磨器研磨,然后加入800μL CTAB提取液,2... 详细信息

用农杆菌介导玉米自交系‘掖478’茎尖遗传转化的转基因玉米植株幼叶为材料,进行快速提取玉米叶片DNA方法的研究.在室温下取2cm2大小的玉米叶片,将叶片剪碎置于2.0mL离心管中,液氮处理后使用组织研磨器研磨,然后加入800μL CTAB提取液,24∶1的氯仿∶异戊醇溶液800μL,轻摇10min后于10 000r/min离心5min,取上清,最后用0.7倍体积冰异丙醇沉淀DNA.应用降落pcr进行目的基因片段的扩增,并对结果进行测序验证.结果表明,该方法操作简单,省时省力,节约成本,效率高,降落pcr扩增目的基因条带清晰,测序结果与原序列一致.

关键词：玉米转基因植株幼叶 DNA提取降落pcr