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附睾上皮细胞表达功能性的TLR-2和TLR-4

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 126-127,132页

作者：赵云涛郭景慧伍忠銮周文良广东海洋大学现代生化中心广东湛江524088 中山大学生命科学学院广东广州510275

目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和TLR4的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对... 详细信息

目的:研究附睾上皮细胞中功能性TLR2和TLR4的表达情况。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot和免疫荧光方法探索原代培养大鼠附睾上皮细胞中TLR2和TLR4的表达情况,同时利用ELISA分别以磷壁酸(LTA)和细菌脂多糖(LPS)对附睾上皮细胞进行功能性检测。结果:TLR2和TLR4在mRNA水平、蛋白水平和细胞水平上在附睾上皮细胞均有表达,TLR2和TLR4的配体LTA和LPS均能激活附睾上皮细胞的天然免疫反应,产生炎症因子TNF-α和IL-1β,差异有统计学意义。结论:附睾上皮细胞表达功能性的TLR2和TLR4。

关键词：附睾上皮细胞 Toll样受体2 Toll样受体4 表达天然免疫

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一氧化氮参与附睾上皮细胞感染后的宿主防御

中山大学学报（自然科学版） 2009年第3期48卷 84-88页

作者：赵云涛郭景慧陈璇伍忠銮周文良中山大学生命科学学院广东广州510275 广东海洋大学现代生化中心广东湛江524088 中山大学附属第二医院

以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染附睾上皮细胞的体外感染模型,分别采用RT-PCR和west-ern blot等方法研究一氧化氮(NO)在附睾上皮细胞宿主防御中的作用。结果表明附睾上皮感染后上调iNOSRNA和蛋白水平的表达,并产生大量的NO,... 详细信息

以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus感染附睾上皮细胞的体外感染模型,分别采用RT-PCR和west-ern blot等方法研究一氧化氮(NO)在附睾上皮细胞宿主防御中的作用。结果表明附睾上皮感染后上调iNOSRNA和蛋白水平的表达,并产生大量的NO,采用iNOS的抑制剂L-NMMA和AGE预处理后,NO水平显著降低,与空白处理组相比,抑制剂处理组的S.aureus数量显著增加,这表明NO参与了附睾上皮细胞的宿主防御过程,在附睾上皮细胞的宿主防御中具有重要的作用。

关键词：附睾上皮细胞一氧化氮宿主防御

绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性

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畜牧兽医学报 2017年第7期48卷 1212-1220页

作者：范晓梅张通栗瑞兰边小娜张家新内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室呼和浩特010018 内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010110

本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪... 详细信息

本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪和CCK法分别检测细胞纯度和增殖情况,在电镜下观察细胞超微结构。结果表明,两种培养方法所获的细胞均呈岛屿状克隆生长和较好的增殖能力,具有活跃的分泌和代谢功能;上皮细胞特异性的角蛋白18和附睾特异性的谷胱甘肽过氧化物酶5(GPx5)的表达以及流式细胞仪结果显示,两种方法所获细胞均为纯度较高的附睾上皮细胞,但改良组织块消化法获得原代细胞需要的时间长,酶消化法获得原代细胞时间短,获得的细胞量大。本研究结果为进一步研究绒山羊附睾上皮功能提供了良好的基础。

关键词：细胞培养附睾上皮细胞酶消化法改良组织块消化法

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EGF促进绵羊附睾上皮细胞体外增殖的研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2020年第5期48卷 9-16页

作者：栾兆进宋慧子杜炜赵勇超王兆琛张家新内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018

【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——... 详细信息

【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P细胞比例极显著降低(P细胞比例显著降低(P细胞的凋亡指数极显著升高(P细胞的凋亡指数无显著变化。EGF组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平较高;与EGF组相比,EGF+Gefitinib组中EECs细胞的EGFR、AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低,而EGF+LY294002组中EECs细胞的AKT和FOXO1磷酸化水平明显降低。【结论】EGF可增强绵羊EECs体外生长活力,其作用机制可能是EGF通过介导EGFR和PI3K/AKT信号通路上调了FOXO1的磷酸化水平。

关键词：表皮生长因子附睾上皮细胞绵羊细胞增殖叉头盒蛋白O1

p38和NF-κB信号通路参与金黄色葡萄球菌引发的附睾上皮细胞炎症反应

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现代免疫学 2009年第2期29卷 124-128页

作者：赵云涛郭景慧陈璇伍忠銮周文良中山大学生命科学学院广州510275 广东海洋大学现代生化中心湛江524088 中山大学附属第二医院广州510120

为探讨丝裂原蛋白激酶(MAPK)和NF-κB信号通路在附睾上皮细胞炎症反应中的作用,以金黄色葡萄球菌(S.au-reus)感染附睾上皮细胞的体外感染模型,采用信号通路阻断剂、ELISA和Western blot等方法研究MAPK和NF-κB信号通路参与附睾上皮细胞... 详细信息

为探讨丝裂原蛋白激酶(MAPK)和NF-κB信号通路在附睾上皮细胞炎症反应中的作用,以金黄色葡萄球菌(S.au-reus)感染附睾上皮细胞的体外感染模型,采用信号通路阻断剂、ELISA和Western blot等方法研究MAPK和NF-κB信号通路参与附睾上皮细胞的宿主防御。结果表明,附睾上皮细胞感染S.aureus后,诱导产生炎症因子TNF-α和IL-1,βNF-κB和p38 MAPK信号通路阻断剂BAY11-7082和SB203580能抑制S.aureus感染诱导的附睾上皮细胞炎症因子的产生。Western blot实验表明,附睾上皮细胞感染S.aureus后p38和IκB-α均被磷酸化,BAY11-7082和SB203580能分别抑制附睾上皮细胞感染S.aureus后p38和IκBα的磷酸化。表明p38 MAPK和NF-κB信号通路参与了S.aureus感染诱导的附睾上皮细胞炎症反应。

关键词：附睾上皮细胞炎症反应 p38 NF-κB

鬼臼毒素对大鼠附睾上皮细胞基因表达差异的影响

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第10期30卷 1086-1087页

作者：李国停谢淑武钟瑞华陈平钱越英朱焰上海市计划生育科学研究所上海200030 浙江大学浙江杭州310058 中国科学院理化技术研究所北京100190

目的研究鬼臼毒素对体外培养大鼠附睾上皮细胞基因表达的影响。方法离体培养大鼠附睾上皮细胞给予溶剂(DMSO)和鬼臼毒素0.01μg·mL-1,作用48 h后分别抽提RNA,纯化定量质检后制备荧光标记探针标记样品cD NA,将纯化后的c DNA样品片段化... 详细信息

目的研究鬼臼毒素对体外培养大鼠附睾上皮细胞基因表达的影响。方法离体培养大鼠附睾上皮细胞给予溶剂(DMSO)和鬼臼毒素0.01μg·mL-1,作用48 h后分别抽提RNA,纯化定量质检后制备荧光标记探针标记样品cD NA,将纯化后的c DNA样品片段化后与芯片杂交,检测芯片并记录结果。结果鬼臼毒素组细胞与空白对照组相比,差异倍数在5倍以上的有137个基因,其中73个基因上调,64个基因下调;差异倍数在10倍以上的有40个,包括26个上调基因(U2SURP,DANJB7,ARHGAP15,TEMEM47,CCL3,MMP9,CSF3,IL23A,CXCL2,MMP13,CSF2,CXCL3,MMP10,CXCL5,SCIN,LOC500846,OLR540,PLA2G2A,CXC3CLL,IL1B,LOC363060,DCHS2,CCL20,RNASE10,LOC360228,TNF-A)和14个下调基因(RAB44,KRT5,ADAMTSL2,LOC685767,LOC688842,RGD1564513,POP1,KCNJ10,POLR3A,CNTROB,FAM109A,ORL578,COL1LA2,TAS2R71)。两组差异表达基因Pathway富集功能分析显示,显著上调基因主要涉及细胞因子受体间相互作用(cytokine-cytokine receptor interaction)、肿瘤坏死因子信号通路、NF-kappa B信号通路、趋化因子信号通路、凋亡通路及风湿性关节炎通路;显著下调基因主要涉及神经刺激性配体受体通路和嗅觉传到通路等。差异基因最集中的通路是细胞因子间相互作用及细胞凋亡。结论鬼臼毒素主要通过两条途径影响大鼠附睾上皮细胞生长,分别是诱导凋亡和引发炎症反应。

关键词：鬼臼毒素附睾上皮细胞基因表达细胞凋亡炎症反应

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大鼠附睾上皮细胞的原代培养及纯化鉴定

中国组织化学与细胞化学杂志 2018年第3期27卷 232-236页

作者：程胖刘博冯潇魏金花马斌芳李臻第四军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室西安710032

目的建立大鼠附睾上皮细胞原代培养及纯化方法。方法利用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行原代培养,然后用胰酶两步消化法进一步纯化附睾上皮细胞,最后分别利用免疫荧光和免疫组织化学染色对原代培养的细胞及相关蛋白表达情况... 详细信息

目的建立大鼠附睾上皮细胞原代培养及纯化方法。方法利用酶消化法和组织块法对大鼠附睾上皮细胞进行原代培养,然后用胰酶两步消化法进一步纯化附睾上皮细胞,最后分别利用免疫荧光和免疫组织化学染色对原代培养的细胞及相关蛋白表达情况进行鉴定。结果酶消化法较组织块法得到的附睾上皮细胞纯度高,免疫荧光染色结果证明所得附睾上皮细胞主要是主细胞,免疫组织化学结果证明培养的附睾上皮细胞中有雄激素受体和雌激素受体α的表达。结论利用酶消化法对大鼠附睾上皮细胞进行体外培养,方法简单易行,成功率高。

关键词：附睾上皮细胞原代培养纯化雄激素受体雌激素受体a

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牦牛附睾上皮细胞的培养与相关基因的表达

牦牛附睾上皮细胞的培养与相关基因的表达

作者：袁梦西南科技大学

学位级别：硕士

附睾作为雄性生殖器官在雄性生殖上有着举足轻重的地位,对雄性生育极其重要。而附睾上皮细胞是针对附睾免疫病原入侵的一道有效的重要防线,同样对雄性生殖至关重要。目前已建立有关人,小鼠和山羊的附睾上皮细胞的培养体系,然而关于如何... 详细信息

附睾作为雄性生殖器官在雄性生殖上有着举足轻重的地位,对雄性生育极其重要。而附睾上皮细胞是针对附睾免疫病原入侵的一道有效的重要防线,同样对雄性生殖至关重要。目前已建立有关人,小鼠和山羊的附睾上皮细胞的培养体系,然而关于如何培养牦牛附睾上皮细胞,尚未见详细报道。本研究将新鲜牦牛附睾处理,采用组织块法培养牦牛原代附睾上皮细胞并进行传代培养。通过对附睾相关基因GPX5、TRL6、EPPIN、DEFB123、LCN6、CD37、CD52、GSG1、PTGDS、KCNJ12、SLC13A2和SLC28A1进行了相关的生物信息学分析,利用实时定量PCR（RT-qPCR）法,测得附睾相关基因在培养的细胞中的表达,并与相应附睾组织中的表达进行比较。初步探讨相关基因在牦牛附睾组织及上皮细胞的表达情况,获得结果如下:1.成功培养出原代牦牛附睾头,体和尾的上皮细胞,并将原代进行传代培养至第五代,获得稳定性能。2通过生物信息学分析发现TLR6、GSG1、KCNJ12、SLC28A1和SLC13A2无信号肽的存在,GPX5、EPPIN和DEFB123无跨膜结构,但它们均存在磷酸化位点,可能有对信息进行传递的能力。3.牦牛附睾相关基因在组织及上皮细胞中均存有表达,且在组织和细胞中的表达趋势存在不一致的有GPX5、EPPIN、DEFB123和KCNJ12,说明它们在附睾组织及上皮细胞中可能存在不同的调控机制。4.在附睾组织和上皮细胞中,CD52在附睾头部极显著高表达于体和尾（p＜0.01）,TRL6、CD37、LCN6及SLC13A2在附睾体部相对表达较高（p＜0.01）,GSG1、PTGDS和SLC28A1在附睾尾中高表达（p＜0.01）。研究这些基因在附睾组织及上皮细胞中的表达有利于为深入研究其在附睾的不同部位以及不同组成形态的调控机理奠定基础。同时本研究亦为在体外培养牦牛的附睾头、体、尾的上皮细胞提供了基本依据,有利于我们在细胞层面上探讨附睾上皮的功能,为进一步研究雄性牦牛的生殖机理奠定基础。

关键词：牦牛附睾原代培养附睾上皮细胞

大鼠睾丸扭转复位后附睾上皮细胞凋亡及唾液酸变化

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中国男科学杂志 2004年第1期18卷 19-21页

作者：赵豫刚郑新民杨志伟李世文胡礼泉武汉大学中南医院泌尿外科武汉430071

目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与唾液酸分泌的关系。方法:24只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型,分为对照组、扭转2h和4h共3组,每组8只。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,5-甲基苯二酚法检测扭转侧附睾唾液酸的含量。结... 详细信息

目的:探讨大鼠睾丸扭转复位后,附睾上皮细胞凋亡与唾液酸分泌的关系。方法:24只雄性SD大鼠建立左侧睾丸扭转复位模型,分为对照组、扭转2h和4h共3组,每组8只。TUNEL法检测附睾上皮细胞凋亡,5-甲基苯二酚法检测扭转侧附睾唾液酸的含量。结果:睾丸扭转2h复位后24h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比上升不明显(P>0.05),唾液酸含量改变不明显(P>0.05);扭转4h复位后24h,扭转侧附睾上皮细胞凋亡指数与对照组相比上升极显著(P附睾上皮细胞未发生凋亡,其分泌唾液酸功能不受影响;扭转4h复位后24h,附睾上皮细胞凋亡严重,其分泌唾液酸功能下降。

关键词：睾丸扭转细胞凋亡唾液酸附睾上皮细胞复位