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阿龙山病毒感染者肝功能和凝血功能临床特点分析

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临床肝胆病杂志 2020年第10期36卷 2258-2260页

作者：张力吕小龙徐洪芹王泽东王伟王波魏伟牛俊奇韩淑祯刘全吉林大学第一医院新发传染病研究室长春130061 吉林大学第一医院肝胆胰内科长春130061 吉林大学第一医院艾滋病与病毒研究所长春130061 内蒙古林业总医院神经内科内蒙古牙克石022150 内蒙古林业总医院神经外科内蒙古牙克石022150 吉林大学长春130061

目的分析阿龙山病毒(ALSV)感染者肝功能和凝血功能临床特点。方法收集2018年5月-2019年9月内蒙古林业总医院收治的27例ALSV感染者的临床资料,其中男18例,女9例。提取、建立相关病例报告数据库,用描述性流行病学方法分析其肝功能和凝血... 详细信息

目的分析阿龙山病毒(ALSV)感染者肝功能和凝血功能临床特点。方法收集2018年5月-2019年9月内蒙古林业总医院收治的27例ALSV感染者的临床资料,其中男18例,女9例。提取、建立相关病例报告数据库,用描述性流行病学方法分析其肝功能和凝血指标的临床特征,分析ALSV感染引起的肝功能损伤特点。结果27例患者中ALT、AST、ALP、GGT、CHE、TBA的异常率分别是25.9%、33.3%、25.9%、40.7%、8%、8%,其水平超过2倍正常值上限的分别为ALT 4例(14.8%)、AST 3例(11.1%)、ALP 1例(3.7%)和GGT 5例(18.5%),27例患者中有胆红素检查结果的患者25例(男17例,女8例),其中1例TBil水平下降,为3.30μmol/L,3例TBil水平升高,分别为23.7、26.2和32.0μmol/L。凝血指标的国际标准化比值、部分凝血活酶、纤维蛋白原异常率分别为3.7%、11.1%和22.2%。结论ALSV感染者中有一定程度的肝损伤,但一般症状较轻。

关键词：阿龙山病毒肝疾病血液凝固因子

阿龙山病毒VP2蛋白原核表达纯化以及抗原性鉴定

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中国动物传染病学报 2022年第3期30卷 208-212页

作者：员晓庆李丽霞梁晓彤王泽东魏正凯司兴奎张浩吉刘全金宁一刘昊佛山科学技术学院佛山528000 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所长春130122

阿龙山病毒(ALSV)是一种新发现的分节段黄病毒,可通过蜱虫叮咬感染家畜和人。为了获得高纯度ALSV-VP2蛋白,利用密码子优化软件对ALSV H3株VP2蛋白质氨基酸序列进行优化。将优化后的基因克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET30a-... 详细信息

阿龙山病毒(ALSV)是一种新发现的分节段黄病毒,可通过蜱虫叮咬感染家畜和人。为了获得高纯度ALSV-VP2蛋白,利用密码子优化软件对ALSV H3株VP2蛋白质氨基酸序列进行优化。将优化后的基因克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET30a-VP2,重组质粒转化到*** BL21(DE3)表达菌株利用IPTG、16℃低温诱导,表达的蛋白再通过亲和层析(Ni-IDA树脂)得到纯度较高ALSV-VP2蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示,在27 kDa处出现目的条带,与预期相符合,BCA检测蛋白浓度为0.236 mg/mL,证明ALSV-VP2蛋白在大肠杆菌中高效表达。经Westen blot分析,该重组蛋白具有良好特异性。本研究为ALSV的流行病学监测和致病机制研究奠定基础。

关键词：阿龙山病毒 VP2基因原核表达

阿龙山病毒和森林脑炎病毒双重荧光PCR检测方法的建立及初步应用

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阿龙山病毒和森林脑炎病毒双重荧光PCR检测方法的建立及初步应用

作者：曹雪沈阳农业大学

学位级别：硕士

阿龙山病毒(Alongshan virus,ALSV)和森林脑炎病毒(Tick-borne ncephalitis virus,TBEV)是我国流行的以蜱作为传播媒介的黄病毒科(Flaviviridae)病毒,主要通过蜱叮咬、吸血而造成人类感染。我国东北及内蒙古东部地区蜱种分布广泛,是蜱... 详细信息

阿龙山病毒(Alongshan virus,ALSV)和森林脑炎病毒(Tick-borne ncephalitis virus,TBEV)是我国流行的以蜱作为传播媒介的黄病毒科(Flaviviridae)病毒,主要通过蜱叮咬、吸血而造成人类感染。我国东北及内蒙古东部地区蜱种分布广泛,是蜱传病高发地区,也是ALSV和TBEV主要分布地区。ALSV和TBEV感染人类时均有头痛、发热、恶心、乏力等相似临床症状,难以根据临床表现进行鉴别诊断,从而造成漏诊、误诊等问题而延误治疗。因此,开发一种快速、精准、可靠的鉴别和诊断的检测方法,实现两种病毒的早期、快速的鉴别诊断,不仅可满足这两种蜱传病毒的流行病学调查监测,而且对疑似病人的早期诊断、治疗、预防提供有力条件。本实验首先制备了两种病毒的阳性标准品,用于检测方法的反应条件优化。其次设计了ALSV和TBEV的特异性引物及探针,优化反应条件,建立了ALSV和TBEV双重荧光PCR检测方法。随后对建立的双重荧光PCR检测方法进行特异性、敏感性、重复性的评估性实验。结果表明:(1)成功建立了ALSV和TBEV双重荧光PCR检测方法,标准曲线相关系数R分别为0.998和0.9991,线性关系良好;(2)与其它蜱传病毒无交叉反应,特异性良好;(3)ALSV和TBEV的最低检测限分别为2.1×10copies/μL和4.5×10copies/μL,较常规PCR敏感100倍,敏感性良好;(4)批间与组间重复性实验变异系数均小于1%,重复性良好。利用所建立的双重荧光PCR检测方法对辽宁省、内蒙古自治区和黑龙江省的部分地区蜱样本和辽宁省的蜱传病高风险人群血液样本进行检测,并对阳性样本进行核酸序列扩增及遗传演化分析。结果表明:(1)蜱样本中ALSV在辽宁省的阳性率为0.2%、内蒙古自治区为1.5%、黑龙江省为0.47%;TBEV仅在内蒙古自治区检出,阳性率为0.33%。高风险人群血液样本ALSV和TBEV的检测结果均为阴性。(2)辽宁省、内蒙古自治区和黑龙江省检出的ALSV均与中国内蒙古呼伦贝尔市检出的ALSV-H3毒株隶属于同一分支,亲缘关系较为接近;内蒙古自治区检出的TBEV与中国吉林省吉林市检出的远东型TBEV-JL-T75毒株隶属于同一分支,亲缘关系较为接近。综上所述,本实验成功建立了阿龙山病毒和森林脑炎病毒双重荧光PCR检测方法;利用该方法对部分地区的蜱及高风险人群样本进行了检测,揭示其在蜱中存在一定的流行,存在造成感染和传播的风险;高风险人群中未检测到上述两种病毒。

关键词：阿龙山病毒森林脑炎病毒荧光PCR 普通PCR 蜱

我国新发蜱传病毒性疾病的临床特征及实验检测研究进展

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中华检验医学杂志 2023年第2期46卷 212-217页

作者：陈良君赵瑾李一荣武汉大学中南医院检验科武汉430071

蜱作为第二大传染病媒介,可携带并传播多种病原造成人类感染,导致严重的公共卫生危害。近年来,我国面临着蜱传播的发热伴血小板减少综合征病毒不断流行,也有荆门蜱病毒、阿龙山病毒等新发病毒发生感染人的病例报道,为提高对这类新发蜱... 详细信息

蜱作为第二大传染病媒介,可携带并传播多种病原造成人类感染,导致严重的公共卫生危害。近年来,我国面临着蜱传播的发热伴血小板减少综合征病毒不断流行,也有荆门蜱病毒、阿龙山病毒等新发病毒发生感染人的病例报道,为提高对这类新发蜱传病毒性疾病的认识以及掌握熟悉其实验室检测方法,该文对我国新发蜱传病毒性疾病的临床疾病特征,病毒分离、免疫学和分子生物学等实验室检测方法进行综述。

关键词：蜱传播疾病发热伴血小板减少综合征荆门蜱病毒阿龙山病毒

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森林脑炎与阿龙山热的鉴别分析

森林脑炎与阿龙山热的鉴别分析

作者：任宝坤内蒙古民族大学

学位级别：硕士

目的:本文通过对森林脑炎（Tick-borne encephalitis,TBE）与阿龙山热（Alongshan fever）患者的临床资料进行回顾性对比分析,研究两种疾病的差异性,为二者的鉴别诊断提供依据。方法:收集2017年4月至2021年9月在内蒙古林业总医院（内蒙... 详细信息

目的:本文通过对森林脑炎（Tick-borne encephalitis,TBE）与阿龙山热（Alongshan fever）患者的临床资料进行回顾性对比分析,研究两种疾病的差异性,为二者的鉴别诊断提供依据。方法:收集2017年4月至2021年9月在内蒙古林业总医院（内蒙古民族大学第二临床医学院）住院确诊的135例森林脑炎及40例阿龙山热患者的病例资料,对其流行病学特征、临床表现、辅助检查、治疗情况及随访情况进行回顾性总结与对比分析。结果:通过统计学分析,两组患者具有统计学意义的指标有:1.森林脑炎组以高热为主,阿龙山热组以低热为主;2.发热与食欲不振症状更常见于森林脑炎组,胸闷症状更常见于阿龙山热组;3.森林脑炎组更易出现意识障碍、肢体瘫痪、肌无力、脑膜刺激征及呼吸衰竭;4.血常规白细胞计数增多与嗜酸性粒细胞减少在森林脑炎组更多见;5.阿龙山热组出现γ-谷氨酰转肽酶（γ-glutamyl transferase,GGT）升高的比例明显较高;6.森林脑炎组更易出现C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）与降钙素原（Procalcitonin,PCT）升高;7.森林脑炎组脑脊液（Cerebrospinal fluid,CSF）压力更高,更易出现CSF白细胞计数增多;8.二者在脑电图方面具有差异性;9.森林脑炎组患者的住院时间更长;10.森林脑炎组留下后遗症的可能性更大。结论:1.流行病学特征方面:森林脑炎与阿龙山热无明显差异;2.临床表现方面:森林脑炎更易出现发热,且以高热为主,而阿龙山热以低热为主;神经系统损害症状在森林脑炎中更常见;3.辅助检查方面:血常规异常与CSF异常在森林脑炎中更多见;二者均会出现肝损伤,但阿龙山热更易出现GGT升高;二者均会出现炎症指标升高,但CRP与PCT升高在森林脑炎中更常见;脑电图异常在森林脑炎中更多见;4.治疗情况方面:森林脑炎患者的住院时间更长;5.随访情况方面:森林脑炎更易留下后遗症。总之,森林脑炎的病情程度相对较重,常有神经系统损害症状,辅助检查的异常率较高,长期预后相对较差;阿龙山热的病情程度相对较轻,神经系统损害症状少见,辅助检查的异常率较低,长期预后相对较好。

关键词：森林脑炎阿龙山病毒蜱传疾病回顾性分析

辽宁省NALSV在蜱、人群与动物中的感染现状研究

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辽宁省NALSV在蜱、人群与动物中的感染现状研究

作者：周奕辰沈阳农业大学

学位级别：硕士

阿龙山病毒(Alongshan Virus,ALSV)于2017年第一次在中国被发现,是一种新型的分节段性黄病毒,属于黄病毒科,荆门病毒属。该病毒主要通过蜱虫叮咬而传播感染人。蜱传病作为一类新发传染病,已经引起畜牧兽医从业人员和医疗卫生人员的重视... 详细信息

阿龙山病毒(Alongshan Virus,ALSV)于2017年第一次在中国被发现,是一种新型的分节段性黄病毒,属于黄病毒科,荆门病毒属。该病毒主要通过蜱虫叮咬而传播感染人。蜱传病作为一类新发传染病,已经引起畜牧兽医从业人员和医疗卫生人员的重视。而对于我国蜱种及病原的分布、尤其是新发蜱媒传染病尚不清楚,限制了蜱传病的科学防控。因此对蜱虫种类及蜱传病的研究是十分必要的。2020年,在对辽宁省各地采集的蜱虫进行病毒宏基因组测序中发现了其携带一种新型分节段黄病毒的核酸序列,经比对分析,该序列与已知阿龙山病毒的序列高度相似,因此暂命名新型阿龙山病毒(New Alongshan Virus,NALSV)。NALSV在辽宁地区首次发现,因此了解该病毒在辽宁地区的感染情况及流行病学调查显得及其重要。根据病毒宏基因组测序结果,对NALSV基因组进行生物信息学分析。建立PCR分子生物学检测方法,调查辽宁地区蜱虫及家养和野生动物中携带病毒的流行情况;选取其中的阳性样本作为模板,扩增病毒的糖蛋白和核蛋白序列,利用原核表达载体表达并纯化His标签重组蛋白质,并作为免疫原制成疫苗免疫动物制备多克隆抗体;建立间接ELISA血清学检测方法,调查该病毒在人群及家畜中的感染情况。辽宁地区2754只蜱虫样本中,共检测到阳性样本285份,平均感染率为10.35%,而在21份家养及野生动物样本中未检测到该病毒。经基因序列遗传进化分析,辽宁地区检测到的NALSV与阿龙山病毒相似度最高可达72%,但位于一个单独分支;表达并纯化出重组蛋白质GP-His、NP-His、VP1a-His,均具有免疫原性;成功制备多克隆抗体Rabbit anti-GP/NP/VP1a-His Ig G,并验证具有反应原性和免疫原性;对丹东地区52份高危人群血清的ELISA检测,结果存在抗体阳性,初步证明该病毒已经在人群中已有所流行,并构成潜在的威胁。在动物样本中的猪、羊血清中也有阳性样本,但感染率较低。辽宁地区的蜱虫、动物及人群中存在NALSV感染,应尽快制定防止措施;与此同时,对NALSV的进一步研究对于蜱传疾病的防控具有指导意义,也可促进与保障人-自然-社会三者的协调发展。

关键词：蜱蜱传疾病阿龙山病毒 NALSV 原核表达检测方法