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江西建昌帮阴附片和阳附片对阳虚小鼠棕色脂肪组织的影响

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中国实验方剂学杂志 2020年第14期26卷 72-77页

作者：凡若楠钟凌云于武华童恒力邓小燕江西中医药大学药学院南昌330004

目的:观察棕色脂肪组织(BAT),细胞,蛋白以及相应基因在大黄混悬液所致阳虚模型小鼠中的表达情况,探讨建昌帮特色附子炮制品的产热机制。方法:随机选取20只小鼠,雌雄各半,作为正常雌、雄组,其余80只小鼠灌服大黄混悬液(质量浓度0.25 g·m... 详细信息

目的:观察棕色脂肪组织(BAT),细胞,蛋白以及相应基因在大黄混悬液所致阳虚模型小鼠中的表达情况,探讨建昌帮特色附子炮制品的产热机制。方法:随机选取20只小鼠,雌雄各半,作为正常雌、雄组,其余80只小鼠灌服大黄混悬液(质量浓度0.25 g·mL^-1)建立阳虚模型,造模结束后随机分为模型雌、雄组,生附片雌、雄组,阴附片雌、雄组以及阳附片雌、雄组,每组10只。按照小鼠组别给予相应药液,灌胃2周(1.54 g·kg^-1·d^-1),正常组和模型组给予等体积蒸馏水。灌胃结束后,采集小鼠肩胛处BAT,进行苏木素-伊红(HE)染色观察BAT细胞变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测解偶联蛋白1(UCP1)及其mRNA的表达。结果:与同性别正常组比较,模型组的BAT比重显著降低(P附片组和阴附片组的BAT比重较模型组显著增加(P附片组小鼠BAT细胞可见细胞空泡减少,细胞较小并且排列紧密,阳附片组中BAT细胞的密度也明显增加,阴附片组BAT细胞中空泡相对减少,但细胞无显著增加。同性别小鼠之间比较,模型组与正常组的UCP1表达水平相比具有统计学意义(P附片组较模型组的UCP1表达水平显著升高(P附片的显著性最优。模型组较同性别正常组的UCP1 mRNA相对表达量显著下降(P附片组、生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P附片组比较,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量有显著性差异(P附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P附片组、阴附片组则无显著性差异,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量与阳附片组比较有显著性差异(P附片、阴附片和阳附片对大黄所致的阳虚证均有明显改善作用,机制可能为促进UCP1蛋白及其mRNA的表达、增强BAT的活性,且阳附片效果最好。

关键词：阴附片阳附片棕色脂肪组织(BAT) 解偶联蛋白1(UCP1) 阳虚证蛋白免疫印迹法聚合酶链式反应(PCR) 附子

基于UPLC-MS/MS探讨“建昌帮”阴附片、阳附片、淡附片炮制过程化学成分差异研究

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中国中药杂志 2023年第23期48卷 6387-6395页

作者：周颖钟凌云罗红兵钟思敏刘斌邓琦徐福余江西中医药大学江西南昌330004 江西省质量和标准化研究院江西南昌330200

该文比较建昌帮阴附片、阳附片、淡附片3种附子炮制品在炮制过程中化学成分的变化,从成分角度为炮制减毒增效作用机制提供科学依据。分别对3种附片的炮制过程进行过程性取样,得到生附片、阴附片清水漂制(阴漂制)、阴附片姜汁润(阴姜润)... 详细信息

该文比较建昌帮阴附片、阳附片、淡附片3种附子炮制品在炮制过程中化学成分的变化,从成分角度为炮制减毒增效作用机制提供科学依据。分别对3种附片的炮制过程进行过程性取样,得到生附片、阴附片清水漂制(阴漂制)、阴附片姜汁润(阴姜润)、阴附片蒸制(阴蒸制、阴附片)、阳附片清水漂制(阳漂制)、阳附片砂炒(阳砂炒、阳附片)、淡附片清水漂制(淡漂制)、淡附片米泔水漂制(淡米泔水漂)、淡附片烤制(淡烤制、淡附片)样品,经UPLC-MS/MS检测提取液中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头碱、乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、去甲猪毛菜碱、附子灵、去甲乌药碱的含量,再针对11组样品进行含量分析及聚类热图分析。3种饮片炮制过程中,漂制可大幅度降低附子中12种生物碱的含量;蒸制、炒制和烤制可显著降低双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)含量,显著提高单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)、胺醇型生物碱(乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱)的含量。阴附片在炮制过程中,双酯型生物碱持续降低,单酯型生物碱、胺醇型生物碱呈现先降低后上升;阴附片、阳附片、淡附片在炮制过程中,双酯型生物碱持续降低,单酯型生物碱、胺醇型生物碱呈现先降低后升高趋势,蒸制的阴附片升高程度高于炒制的阳附片高于烤制的淡附片。综合分析3种附子炮制品中毒性成分及功效成分含量差异,得出建昌帮特色炮制方法确实可以实现对附子的减毒增效作用,为3种炮制方法作用机制提供参考。

关键词： UPLC-MS/MS 阴附片阳附片淡附片过程性取样聚类热图减毒增效

附子不同炮制品对慢性心力衰竭大鼠β1、β2肾上腺素受体表达的影响

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中华中医药杂志 2021年第6期36卷 3138-3141页

作者：于武华钟凌云叶协滔凡若楠江西中医药大学南昌330004

目的:观察附子不同炮制品对慢性心力衰竭(CH F)大鼠β1、β2肾上腺素受体(AR)表达的影响,是否有性别差异。方法:腹腔注射阿霉素建立CHF大鼠模型,生物机能信号采集系统检测各组大鼠血流动力学参数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白细胞介... 详细信息

目的:观察附子不同炮制品对慢性心力衰竭(CH F)大鼠β1、β2肾上腺素受体(AR)表达的影响,是否有性别差异。方法:腹腔注射阿霉素建立CHF大鼠模型,生物机能信号采集系统检测各组大鼠血流动力学参数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白细胞介素-6(IL-6)、脑钠肽(BNP)、白细胞介素-10(IL-10)含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠心肌组织中β1、β2AR mRNA表达水平。结果:与模型组同性别比较,各给药组雌、雄大鼠左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升和下降速率(±LVdp·dtmax^(-1)),血清IL-10水平,β2AR mRNA表达水平显著上升(P附片对雌性大鼠左心室收缩和舒张功能增强最高,阳附片对雄性大鼠左心室收缩和舒张功能增强最高,阴附片对雌性大鼠心肌组织保护作用最显著。结论:附子不同炮制品对CHF大鼠的治疗作用可能与降低心肌组织β1AR mRNA表达,提高心肌组织β2AR mRNA表达有关,存在一定性别差异。

关键词：慢性心力衰竭生附片阴附片阳附片肾上腺素受体

基于棕色脂肪组织的附子炮制品阴附片和阳附片的热性差异机理研究

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基于棕色脂肪组织的附子炮制品阴附片和阳附片的热性差异机理研究

作者：凡若楠江西中医药大学

学位级别：硕士

目前研究发现,棕色脂肪组织（BAT）促进能量消耗,改善机体代谢,现已成为治疗代谢疾病的新靶点。棕色脂肪组织体积虽小,但产热能力很强,主要依赖于组织中的特异性蛋白--解偶联蛋白1（UCP1）,发生质子渗漏产热不产能,这种产热方式是哺乳... 详细信息

目前研究发现,棕色脂肪组织（BAT）促进能量消耗,改善机体代谢,现已成为治疗代谢疾病的新靶点。棕色脂肪组织体积虽小,但产热能力很强,主要依赖于组织中的特异性蛋白--解偶联蛋白1（UCP1）,发生质子渗漏产热不产能,这种产热方式是哺乳动物的主要产热方式。BAT会受神经中枢下丘脑的调节,主要通过调节下丘脑腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）活性,从而调节下丘脑中相应的核团或神经肽的表达,达到对神经中枢的控制,故下丘脑中AMPK在能量代谢调节中起着重要的作用。附子作为“温阳要药”,能够峻补诸脏之阳气,中医认为阳气是一身之气中具有温热、兴奋特性的部分,故从能量代谢角度可阐释为附子能促进生物体的能量代谢,增加机体产热。有大量研究表明,温热药能够作用于棕色脂肪组织,促进相关产热蛋白的表达,增强能量代谢,改善阳虚症状。经过前期查阅文献发现,目前的研究报道没有从棕色脂肪组织功能的方面去探究附子热性机制。阴附片和阳附片作为建昌帮两种独特的炮制品,目前的研究寥寥无几。当身体出现能量调节异常时,下丘脑中AMPK活性会被调节,BAT收到中枢传来的信号后开始工作,一方面调节胞内的特异性蛋白--UCP1的产热,另一方面控制脂质代谢,维持机体的能量平衡。故本研究从下丘脑AMPK蛋白--棕色脂肪组织--脂质代谢相关信号通路三个方面观察阴附片和阳附片对大黄所致阳虚小鼠的影响,其中主要从阴附片和阳附片影响棕色脂肪组织功能的角度出发,一方面探索阴附片和阳附片调控棕色脂肪组织的分子机理,以及影响机体代谢产热的作用机制。另一方面,与生附片做对比,探讨附子炮制成阴附片和阳附片后热性是否发生变化,并观察对比热性变化是否与阴附片和阳附片男女异用的作用差异相一致。主要从以上两个方面完善建昌帮阴阳附片的研究,以期能对附子传统加工技艺进行传承和保护,为阴附片和阳附片的应用提供更完整的理论基础。其主要研究结果如下:1阴附片和阳附片调节下丘脑AMPK表达的研究通过给予小鼠大黄混悬液造阳虚模型,造模成功后给予药液2周,分析阴附片和阳附片对小鼠下丘脑AMPK的表达及相应基因的表达。结果显示,对下丘脑AMPK蛋白的影响:与同性别正常组相比,雌性模型组AMPK蛋白的表达有明显上升,给予阳附片后,此蛋白水平受到抑制有将要恢复到正常状态的趋势;雄性各组AMPK蛋白的表达没有太大差异。对下丘脑AMPK基因的影响:同性别之间比较,模型组与正常组的AMPK基因表达水平相比具有统计学意义（P＜0.01）。在雌性小鼠中,生附片组和阳附片组较模型组的AMPK基因表达水平显著降低（P＜0.01）;雄性小鼠的给药组较同性别模型组均有显著差异（P＜0.01）,其中阳附片抑制效果最好,其次为生附片组。对小鼠下丘脑中p-AMPK蛋白的影响:雌性小鼠中,模型组p-AMPK蛋白表达是最高的,与正常组,阳附片组有明显差异（P＜0.05）;对于雄性小鼠,p-AMPK蛋白的表达结果与雌性小鼠效果相同,阳附片抑制效果最好（P＜0.01）,其次为生附片组。2阴附片和阳附片调控棕色脂肪组织功能的研究通过观察棕色脂肪组织（BAT）,细胞,蛋白及相应基因在大黄所致阳虚模型小鼠中的表达,探讨阴附片和阳附片是如何调控棕色脂肪组织功能的。给予小鼠大黄混悬液造阳虚模型,造模成功后给予药液2周后,采集棕色脂肪组织,进行苏木素-伊红（HE）染色观察BAT细胞变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测解偶联蛋白1（UCP1）及其m RNA的表达。结果显示,BAT的比重:与同性别正常组相比,模型组BAT的比重显著降低;雌性小鼠中生附片和阴附片较模型组相比BAT的比重显著增加,而雄性小鼠各给药组与模型组相比则无显著性差异;BAT组织中的细胞数量:与同性别正常组相比,模型雌性、雄性组细胞数量显著下降;在雌性小鼠中,阳附片组与模型组相比细胞数量显著上升;对于雄性小鼠,生附片组、阴附片组和阳附片组与模型组比较,细胞数量均显著升高,其中生附片组的效果最好;对于BAT中特异性蛋白UCP1的表达:同性别之间比较,模型组与正常组的UCP1表达水平相比具有统计学意义,在雌性小鼠中,阳附片组较模型组的UCP1表达水平显著升高,雄性小鼠的各给药组较同性别模型组均有显著差异,其中阳附片的显著性最优;对于BAT中UCP1基因的相对表达量:同性别之间比较,模型组较正常组的UCP1 m RNA相对表达量显著下降,在雌性小鼠中,与模型组相比,阳附片组、生附片组和阴附片组的UCP1 m RNA相对表达量极显著升高;与阳附片相比,生附片和阴附片的UCP1 m RNA相对表达量也有显著性差异;在雄性小鼠中,与模型组相比,阳附片组的UCP1 m RNA相对表达量有显著差异,生附片、阴附片无显著性差异。此外,生附片组和阴附片组的UCP1 m RNA相对表达量与阳附片组比较也有显著性差异。3阴附片和阳附片调节脂质代谢途径的

关键词：阴附片阳附片棕色脂肪组织阳虚证 PKA信号通路