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甘加型藏羊发情周期阴道细胞变化规律

中国兽医学报 2016年第7期36卷 1241-1246页

作者：韩志磊史军红何玉琴火静萍王文芳刘英甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

采用阴道涂片法,观察了8只甘加型藏羊连续2个发情周期阴道细胞涂片,统计分析了发情周期不同时期阴道细胞种类、形态变化特点及其所占比例。结果显示:甘加型藏羊发情周期阴道涂片中主要有副基底层上皮细胞、中间层上皮细胞、表层上皮细... 详细信息

采用阴道涂片法,观察了8只甘加型藏羊连续2个发情周期阴道细胞涂片,统计分析了发情周期不同时期阴道细胞种类、形态变化特点及其所占比例。结果显示:甘加型藏羊发情周期阴道涂片中主要有副基底层上皮细胞、中间层上皮细胞、表层上皮细胞、不完全角化上皮细胞、完全角化上皮细胞、白细胞和细胞碎片。发情期角化细胞所占比例最高,显著高于发情前期、发情后期和间情期(P上皮细胞所占比例显著高于其他三个时期(P细胞所占比例显著高于发情前期和发情期;中间层上皮细胞在各时期所占比例差异不显著(P>0.05)。结果表明:根据涂片中阴道细胞种类和各类细胞所占比例的变化特点可以简便、快速准确地鉴定和区分甘加母羊发情周期的不同阶段,阴道凃片是高效、准确的发情鉴定方法。

关键词：发情周期阴道涂片阴道上皮细胞甘加型藏羊发情鉴定

VVC不同毒力致病白假丝酵母菌对阴道上皮NLRP3炎性小体表达相关免疫的影响

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VVC不同毒力致病白假丝酵母菌对阴道上皮NLRP3炎性小体表达相关免...

作者：侯梦瑶昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]1、探索人和小鼠阴道上皮细胞原代培养方法是否一致,并鉴定细胞类型是否为所需细胞。2、观察与白假丝酵母菌共培养后阴道上皮细胞损伤情况。3、研究不同Sap酶活性的白假丝酵母菌对阴道上皮细胞表达NLRP3炎性小体的影响。4、比较... 详细信息

[目的]1、探索人和小鼠阴道上皮细胞原代培养方法是否一致,并鉴定细胞类型是否为所需细胞。2、观察与白假丝酵母菌共培养后阴道上皮细胞损伤情况。3、研究不同Sap酶活性的白假丝酵母菌对阴道上皮细胞表达NLRP3炎性小体的影响。4、比较人和小鼠阴道上皮细胞表达NLRP3炎性小体及其诱导分泌的细胞因子趋势是否一致。[方法]1、获取人和小鼠阴道上皮组织后,进行体外细胞培养,使用DispaseⅡ酶及胰酶分步消化法分离人和小鼠阴道上皮细胞,用角化细胞无血清培养基（K-SFM）培养,当细胞汇合度达80%～90%时进行下一步的传代培养;倒置相差显微镜观察细胞生长情况,用细胞角蛋白（广谱）抗体试剂对细胞进行鉴定。2、收集外阴阴道假丝酵母菌病（vulvovaginal candidiasis,VVC）患者的阴道分泌物后四区划线法纯化菌株,安图念珠菌显色培养基平板鉴定为白假丝酵母菌,并用牛奶培养基平板检测Sap酶活性。从中选取Sap酶活性最强和最弱的白假丝酵母菌菌株各4株分别与人和小鼠阴道上皮细胞共培养,空白对照组只加K-SFM培养液,于6h、12h、24h、48h收集细胞上清液并用4%多聚甲醛固定细胞。3、用免疫荧光技术法检测人和小鼠阴道上皮细胞中NLRP3炎性小体表达情况;ELISA法检测阴道上皮细胞上清液中IL-1β和IL-18的水平;经HE染色后观察阴道上皮细胞加菌前后形态变化情况。4、用SPSS 24.0软件进行分析,计量资料以x±s表示,组内均数比较采用的是配对样本t检验,多组间均数比较采用的是单因素方差分析及两两比较的SNK-q检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义。用GraphPad Prism 6.0软件绘制统计柱状图。[结果]1、倒置相差显微镜下观察人和小鼠阴道上皮细胞传到孔里后48h,可看到部分细胞触角向外延伸,开始贴壁生长,大部分细胞还成光亮的圆形漂浮在细胞培养液中;至6～7天时贴壁细胞数可达70%～80%,阴道上皮细胞呈铺路石样生长,形态为多角形,轮廓清晰,折光线好。细胞角蛋白（广谱）抗体免疫细胞化学染色显示,细胞质均匀的染上了棕色,结果判定为阳性。2、HE染色显示,空白对照组的阴道上皮细胞边界清晰,饱满,折光性好;而人和小鼠阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养48h后可看到大部分细胞边界模糊,部分已裂解,活力较差。3、人和小鼠阴道上皮细胞与不同Sap酶活性的白假丝酵母菌共培养后,阴道上皮细胞表达的NLRP3炎性小体水平在早期即达高峰,其后随着时间推移,与白假丝酵母菌共培养的阴道上皮细胞逐渐裂解,到48h时可看到细胞破裂死亡,荧光随之减弱,Sap酶活性强组NLRP3炎性小体水平下降趋势更明显,而空白对照组的细胞形态从始至终都是完整的,荧光量保持相对稳定。此外,人阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养6h、12h、48h,空白对照组表达的NLRP3炎性小体水平与Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组的表达相比的差异是具有统计学意义的（P＜0.05）。Sap酶活性强组在12h时与Sap酶活性弱组的NLRP3炎性小体水平存在显著差异（P＜0.05）;而小鼠阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养6h、12h、24h、48h,Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组与空白对照组的NLRP3炎性小体水平相比差异均具有统计学意义（P＜0.05）。Sap酶活性强组在6h、12h、48h时与Sap酶活性弱组的NLRP3炎性小体水平差异均具有统计学意义（P＜0.05）。4、人和小鼠阴道上皮细胞表达IL-1β和IL-18水平均呈现6h达峰值后逐渐下降趋势,至48h时随着细胞膜的破裂,细胞内的IL-1β和IL-18全部被释放出来,又出现了小幅度的回升。在共培养早期,空白对照组的人和小鼠阴道上皮细胞表达的IL-1β水平与Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组表达的差异均具有统计学意义（P＜0.05）,Sap酶活性强组IL-1β水平在6h、12h、48h与Sap酶活性弱组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。人阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养后Sap酶活性弱组IL-18水平仅在48h检出与空白对照组存在表达差异,在6h、12h、48h,空白对照组与Sap酶活性强组的IL-18水平差异具有统计学意义（P＜0.05）。而小鼠Sap酶活性弱组和Sap酶活性强组在6h、12h、48h时,IL-18水平与空白对照组相比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）;此外,Sap酶活性强组与Sap酶活性弱组IL-18水平在6h、12h、24h检出有明显差异（P＜0.05）。[结论]1、人和小鼠阴道上皮细胞均可采用酶分步消化法进行原代培养,该方法可以用最短的时间来获取较高纯度和较好活性的阴道上皮细胞,为研究不同Sap酶活性的白假丝酵母菌对阴道上皮细胞表达NLRP3炎性小体的影响奠定了良好的基础。2、阴道上皮细胞与白假丝酵母菌共培养后,白假丝酵母菌由酵母相变为菌丝相,对阴道上皮细胞产生了损伤作用

关键词：外阴阴道假丝酵母菌病白假丝酵母菌阴道上皮细胞 Sap酶活性 NLRP3炎性小体

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原位与体内构建小鼠组织工程阴道的实验研究

实用妇产科杂志 2013年第4期29卷 277-281页

作者：张明乐黄向华李雅钗张琳李亚楠朱志洁王振海河北医科大学第二医院河北石家庄050000

目的:比较原位组织构建与体内构建两种方式在小鼠体内进行阴道重建的效果。方法:切除昆明小鼠阴道后采用酶消化法获得阴道上皮细胞。A组(12只)植入猪脱细胞真皮基质(PADM)行原位组织构建;B组(12只)植入自体阴道上皮细胞与纤维蛋白-PADM... 详细信息

目的:比较原位组织构建与体内构建两种方式在小鼠体内进行阴道重建的效果。方法:切除昆明小鼠阴道后采用酶消化法获得阴道上皮细胞。A组(12只)植入猪脱细胞真皮基质(PADM)行原位组织构建;B组(12只)植入自体阴道上皮细胞与纤维蛋白-PADM移植复合物行体内构建。于移植后2周、4周、8周、12周取出重建的阴道组织进行大体观察,并分别进行伊红-美蓝染色(HE)、Van Gieso(VG)染色和广谱角蛋白AE1/AE3免疫组化染色,以动态观察重建阴道组织生长情况及PADM降解情况。重建术后12周用透射电镜观察重建阴道组织超微结构。结果:①A组在移植后2周可见2～3层细胞的上皮形成;移植后4周细胞层数增加,但细胞排列无极向;移植后8周、12周上皮层结构接近正常小鼠阴道上皮层结构。B组移植后2周上皮结构即接近正常小鼠阴道上皮结构;移植后4周、8周、12周上皮层结构基本同移植后2周,但细胞形态更加成熟,极向更为明显。移植后12周A组PADM部分区域结构不完整,B组PADM仍保持基本轮廓。②AE1/AE3免疫组化染色证实了重建阴道的上皮化。③B组透射电镜观察可见上皮细胞之间存在桥粒连接,上皮细胞与基底膜之间有半桥粒连接。上皮层下见成纤维细胞、无髓神经纤维与毛细血管。结论:利用PADM进行原位组织构建与体内构建在实验动物体内均能够完成阴道重建。在技术成熟的条件下,体内构建法比原位组织构建法更适合于进行阴道重建。

关键词：阴道重建组织工程脱细胞真皮基质纤维蛋白凝胶阴道上皮细胞

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阴茎拭子DNA检出女性成分1例

中国法医学杂志 2016年第2期31卷 197-198页

作者：向轲梁翠芬崔瑶广州市公安局海珠区分局广东广州510290

1案例资料1.1简要案情刘某,女,已婚。2014年某日在一工地宿舍被欧某强奸,后即刻报案。提取了刘某阴道拭子、欧某阴茎拭子及两人的口腔拭子进行DNA检验。

关键词：法医物证学阴茎拭子阴道上皮细胞 DNA检验

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3种细胞因子对整合素αvβ6表达的影响

医学研究生学报 2015年第7期28卷 688-691页

作者：邬姝阳李萍曾新孙惠敏马致南童华南京医科大学第四临床医学院南京医学硕士研究生210029 南京市妇幼保健院妇科南京210004 南京市玄武区妇幼保健所妇女保健科南京210016 扬州市妇幼保健院妇科扬州225002

目的整合素αvβ6与阴道黏膜感染防御的研究较少。探讨细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、干扰素γ(interferon-γ,INF-γ)对阴道上皮细胞株中整合素αvβ6表达的影响... 详细信息

目的整合素αvβ6与阴道黏膜感染防御的研究较少。探讨细胞因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、干扰素γ(interferon-γ,INF-γ)对阴道上皮细胞株中整合素αvβ6表达的影响。方法体外培养永生化人阴道上皮细胞(VK2/E6E7),分别应用梯度浓度的IL-6(1、10、50、100 ng/m L)、TGF-β(0.1、1、10、100 ng/m L)、IFN-γ(50、500、2500、5000 U/L)干预,分别记为IL-6处理组、TGF-β处理组、INF-γ处理组。另设空白对照组(等量不含细胞因子的培养液)。培养48 h后收集细胞,TRIzol法提取总RNA,逆转录为c DNA。应用实时定量PCR技术检测各组细胞内整合素α和β6亚基的mRNA表达情况。结果 11、10 ng/m L IL-6处理组中α、β6亚基mRNA表达量低于空白对照组(P阴道上皮细胞中整合素αvβ6的表达受细胞因子IL-6、TGF-β、IFN-γ的调控,可能是其参与Th1、Th2介导的黏膜免疫反应。

关键词：阴道上皮细胞整合素αvβ6 白细胞介素-6 转化生长因子-β 干扰素γ

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健脾解毒汤对银屑病样模型小鼠的实验研究

健脾解毒汤对银屑病样模型小鼠的实验研究

作者：高源新疆医科大学

学位级别：硕士

目的：通过健脾解毒汤灌胃银屑病样模型小鼠，观察健脾解毒汤对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂、血浆内皮素1及血清可溶性E-选择素的影响，进一步探讨健脾解毒汤内服治疗银屑病的作用机理及量效关系，为临床提供实验依据。方法：应用银屑病... 详细信息

目的：通过健脾解毒汤灌胃银屑病样模型小鼠，观察健脾解毒汤对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂、血浆内皮素1及血清可溶性E-选择素的影响，进一步探讨健脾解毒汤内服治疗银屑病的作用机理及量效关系，为临床提供实验依据。方法：应用银屑病样小鼠实验模型，观察不同剂量健脾解毒汤对银屑病模型小鼠的阴道上皮细胞有丝分裂、血浆内皮素1和可溶性E-选择素的影响。结果：实验1中，高、中、低剂量的健脾解毒汤和阿维A胶囊均可抑制阴道上皮细胞有丝分裂，与模型组相比均有显著差异，有统计学意义（P阴道上皮细胞有丝分裂，可降低小鼠银屑病样模型的血浆内皮素1及可溶性E-选择素的水平，血浆内皮素1及血清可溶性E-选择素含量的变化可能作为药效学指标，可能通过阻断多个发病环节起到治疗银屑病的作用，其作用与剂量有关。

关键词：健脾解毒汤银屑病样模型小鼠阴道上皮细胞血浆内皮素1 可溶性E-选择素

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青春期前阴道异物及外伤的诊断和处理

实用妇产科杂志 2010年第12期26卷 885-887页

作者：王佳佳华克勤复旦大学附属妇产科医院上海210011

青春期前女性生殖器官发育不成熟,雌激素水平低、阴道上皮细胞糖原缺少、阴道pH值偏高、自然防御功能差,并且幼女外阴多暴露在外,容易感染和遭受损伤。而阴道异物尤其在幼女常见,异物在阴道内留置或处置不当会引发阴道炎、阴道粘连,[第... 详细信息

青春期前女性生殖器官发育不成熟,雌激素水平低、阴道上皮细胞糖原缺少、阴道pH值偏高、自然防御功能差,并且幼女外阴多暴露在外,容易感染和遭受损伤。而阴道异物尤其在幼女常见,异物在阴道内留置或处置不当会引发阴道炎、阴道粘连,[第一段]

关键词：阴道异物青春期前诊断外伤生殖器官发育阴道上皮细胞雌激素水平阴道pH值

大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2mRNA影响

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中国公共卫生 2009年第3期25卷 373-374页

作者：孙晓芳段斐河北大学医学部组织胚胎学教研室保定071000

目的探讨大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法Wistar大鼠50只,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、大豆异黄酮高剂量组及低剂量组。采用原位末端标记法及原位杂交方法检测阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mR... 详细信息

目的探讨大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法Wistar大鼠50只,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、大豆异黄酮高剂量组及低剂量组。采用原位末端标记法及原位杂交方法检测阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mRNA,并应用图像分析系统进行测定。结果雌二醇组、大豆异黄酮高、低剂量组均可使去卵巢大鼠阴道重量增加,分别为(0.125±0.024),(0.123±0.020),(0.109±0.022)g,与模型组(0.074±0.046)g比较,差异均有统计学意义(P细胞,其余各组均可见凋亡细胞,大豆异黄酮高、低剂量组凋亡细胞数与雌二醇组比较,差异均有统计学意义(P阴道上皮细胞的凋亡,通过上调Bcl-2 mRNA的表达是其作用途径之一。

关键词：去卵巢大鼠大豆异黄酮 Bcl-2mRNA 阴道上皮细胞

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中国组织工程研究 2007年第27期 5327-5327页

意大利科学家成功用干细胞重建阴道及黏膜组织意大利47岁的马尔凯塞医生为两例患有Mayer-Von Rokitansky-Kuster-Hauser综合征致先天阴道及黏膜缺损的女子进行崭新的干细胞手术,首次以患者的

关键词：阴道上皮细胞马尔凯塞干细胞患者阴道组织阴道再造