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阴沟肠杆菌AmpC酶阳性菌株中整合子参与的多重耐药

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中国抗生素杂志 2009年第7期34卷 445-448,I0001页

作者：缪应雷杜艳昆明医学院第一附属医院昆明650031

目的筛选阴沟肠杆菌AmpC酶阳性菌株,探寻阳性菌株中整合子参与的耐药机制,指导合理用药,为临床治疗感染提供理论依据。方法KB法药敏;纸片表型和三维试验筛选AmpC酶阳性菌株;PCR扩增ampC、ampD和整合子保守序列CS;PCRmapping研究阳性菌株... 详细信息

目的筛选阴沟肠杆菌AmpC酶阳性菌株,探寻阳性菌株中整合子参与的耐药机制,指导合理用药,为临床治疗感染提供理论依据。方法KB法药敏;纸片表型和三维试验筛选AmpC酶阳性菌株;PCR扩增ampC、ampD和整合子保守序列CS;PCRmapping研究阳性菌株中ampC和ampD在整合子中的位置。结果74株阴沟肠杆菌对多种抗生素耐药。纸片表型筛选的阳性率为35.1%;三维试验为28.4%。PCR扩增定位的阳性率为89.2%;ampD为86.5%,整合子保守序列CS为49%。PCR mapping阳性率为33.3%,片段均小于1000bp。结论除亚胺培南和丁胺卡那敏感外,74株阴沟肠杆菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类及氨基糖甙类抗生素的耐药率都>50%,为多重耐药菌株。纸片表型筛选更方便实用,适于临床常规开展;三维试验最准确可靠,但操作烦琐,难推广普及;PCR方法操作复杂、试剂昂贵。插入的耐药基因可能位于整合子上游。

关键词：阴沟肠杆菌 AmpC酶阳性整合子

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阴沟肠杆菌AmpC酶的特性研究

中国抗生素杂志 2000年第6期25卷 428-435页

作者：张永龙李家泰赵鸣武北京医科大学第一医院临床药理研究所北京100083 北京医科大学第三医院北京100083

本文对阴沟肠杆菌 Amp C酶进行了以下 5个方面研究 ,其内容和结果分别为 :(1)联合药敏实验 :用平皿二倍稀释法研究第四代头孢菌素头孢吡肟 ,第三代头孢菌素头孢他啶、头孢噻肟、头孢呋辛与 β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦联合对 34株头孢他啶... 详细信息

本文对阴沟肠杆菌 Amp C酶进行了以下 5个方面研究 ,其内容和结果分别为 :(1)联合药敏实验 :用平皿二倍稀释法研究第四代头孢菌素头孢吡肟 ,第三代头孢菌素头孢他啶、头孢噻肟、头孢呋辛与 β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦联合对 34株头孢他啶耐药菌 ,6株头孢他啶中敏菌及 15株头孢他啶敏感菌的体外抗菌活性。结果表明舒巴坦使头孢他啶对 32 .7% (18/ 5 5 )的阴沟肠杆菌的抗菌作用有明显抗菌增效作用。 96 .4%(5 3/ 5 5 )的阴沟肠杆菌对第四代头孢菌素头孢吡肟敏感。 (2 )酶稳定性实验 :紫外测定法测定 4株标准菌和 6株临床分离菌产生的 Amp C酶对 β-内酰胺类抗生素的水解率 ,结果表明阴沟肠杆菌产生的 β-内酰胺酶对第一代头孢菌素头孢唑林、头孢氨苄 ,第二代头孢菌素头孢克洛 ,第三代头孢菌素头孢哌酮及青霉素、氨苄西林、哌拉西林的水解率高。对第二代头孢菌素头孢呋辛、第三代头孢菌素头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶 ,第四代头孢菌素头孢吡肟以及亚胺培南、美洛培南和单环类 β-内酰胺抗生素氨曲南的水解率较低。 β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦对 4株标准产酶菌及 6株临床分离菌产生的 β-内酰胺酶均无抑制作用 ,而三唑巴坦则对上述酶有明显的抑制作用。 (3) Amp C酶分子量测定 :用 SDS- PAGE测定酶的分子量。

关键词：阴沟肠杆菌 AmpC酶抗生素头孢菌素

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因型调查

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中国抗生素杂志 2004年第2期29卷 82-85页

作者：顾怡明张杰俞云松周志慧杜小玲北京天坛医院北京100050 浙江大学医学院附属第一医院杭州310003 北京朝阳医院北京100020

目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,... 详细信息

目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,并对β-内酰胺酶编码基因进行克隆测序。结果表型筛选法对58株阴沟肠杆菌检测的结果显示产ESBLs菌株的检出率为34.48%(20/58)。药敏结果显示,单独产生ESBLs的菌株对头孢西丁、头孢吡肟、哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为100%、32.5%和87.5%。同时携带ESBLs和AmpC酶的菌株只对亚胺培南敏感。20株检测阳性的细菌中,14株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为:SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-22型ESBLs。对另外6株进行粗酶等电点测定发现分别存在7.89、8.0、8.57等电点条带,并被克拉维酸抑制。结论产生超广谱β-内酰胺酶是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因。

关键词：阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型序列分析表型筛选法抗生素

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阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶的研究进展

中国抗生素杂志 2011年第12期36卷 881-884,905页

作者：周青雪程东庆浙江中医药大学生命科学学院杭州310053

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶是对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,所产β-内酰胺酶种类较多、特性各异,并在β-内酰胺类抗生素广泛应用的选择压力下,不断有新的β-内酰胺酶产生。文中对阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶(EsBLs、AmpC、碳青霉烯酶)... 详细信息

阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶是对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制,所产β-内酰胺酶种类较多、特性各异,并在β-内酰胺类抗生素广泛应用的选择压力下,不断有新的β-内酰胺酶产生。文中对阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶(EsBLs、AmpC、碳青霉烯酶)耐药性的研究进展作了简要综述。

关键词： β-内酰胺酶阴沟肠杆菌耐药性

阴沟肠杆菌高产AmpC酶基因检测及分子流行病学研究

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中国抗生素杂志 2008年第4期33卷 228-231页

作者：杨绍敏胡大春邵剑春李超苏平云南省传染病专科医院云南安宁650301 昆明市第一人民医院临床分子生物学重点实验室昆明650011

目的研究医院阴沟肠杆菌高产AmpC酶及分子流行病学特征。方法采用KB法药敏试验,双纸片增效试验和酶提取物三维试验检测阴沟肠杆菌高产AmpC酶,聚合酶链反应检测AmpC酶基因、ERIC-PCR,研究昆明市第一人民医院2002年7月～2004年12月临床分... 详细信息

目的研究医院阴沟肠杆菌高产AmpC酶及分子流行病学特征。方法采用KB法药敏试验,双纸片增效试验和酶提取物三维试验检测阴沟肠杆菌高产AmpC酶,聚合酶链反应检测AmpC酶基因、ERIC-PCR,研究昆明市第一人民医院2002年7月～2004年12月临床分离的84株阴沟肠杆菌的耐药性、AmpC酶基因型和克隆传播状况。结果表型初筛试验和ESBLs确认试验,高产AmpC酶检出率为27.38%(23/84),ESBLs检出率16.67%(14/84),同时高产AmpC酶和ESBLs检出率44.05%(37/84)。AmpC酶基因检出率43.75%(28/64)。三维试验高产AmpC酶检出率为47.62%(40/84)。克隆传播分析,结果发现菌株编号EC2和EC11、EC13和EC14、EC19和EC20分别具有相同的DNA指纹图,其余菌株间未见DNA指纹图。结论阴沟肠杆菌的耐药性较为复杂。表现出去阻遏高产AmpC酶、产ESBLs、同时产AmpC酶和ESBLs和质粒AmpC酶多种耐药表型。分子流行病学结果显示,虽然阴沟肠杆菌的传播与抗生素的诱导和选择作用、患者机体抵抗力下降及肠道内寄居菌的内源性感染等因素有关,但仍然要警惕医院感染的发生。

关键词：阴沟肠杆菌 AmpC β-内酰胺酶酶提取物三维试验肠杆菌科属基因聚合酶链反应

阴沟肠杆菌产碳青霉烯酶的基因型与临床感染的特征分析

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中华医学杂志 2015年第40期95卷 3264-3268页

作者：赵岐刚贾秀芹庞峰李艳华山东省聊城市人民医院检验科 252000 山东省聊城市人民医院药学部临床药学室 252000

目的了解医院产碳青霉烯酶阴沟肠杆菌的主要基因型,并对其临床感染特征进行分析,为临床采取积极的防控措施奠定基础.方法收集2007年1月至2014年12月临床非重复分离的阴沟肠杆菌,筛选碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的菌株,通过改良Hodg... 详细信息

目的了解医院产碳青霉烯酶阴沟肠杆菌的主要基因型,并对其临床感染特征进行分析,为临床采取积极的防控措施奠定基础.方法收集2007年1月至2014年12月临床非重复分离的阴沟肠杆菌,筛选碳青霉烯类抗菌药物敏感性降低的菌株,通过改良Hodge试验（MHT）及乙二胺四乙酸（EDTA）协同试验检测碳青霉烯酶表型,PCR 扩增碳青霉烯酶基因型blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48及blaNDM-1 ,阳性结果进行DNA测序并Blast比对确定分型.对耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌进行接合试验,通过药敏试验和基因扩增验证接合情况.同时收集耐药菌株感染患者的临床资料,分析其临床感染流行病学数据.结果经MHT、EDTA协同试验及PCR扩增测序共检测出产碳青霉烯酶阴沟肠杆菌64株,其中70.3%（45/64）来自院内感染,29.7%（19/64）来自社区感染;64株菌主要分离于分泌物占65.6%（42/64）,痰标本占23.4%（15/64）,临床分布以骨外科、烧伤科、重症监护室及儿科为主,分别占43.8%、21.9%、18.8%及14.1%;床位变更、侵袭性操作及留置导管是产酶菌株产生的高危因素,产酶株感染患者在细菌分离前住院天数较多,治愈率更低,住院总天数更多,使用头孢类加酶抑制剂复合制剂及碳青霉烯类频次更高（均P〈0.05）;除多粘菌素及替加环素外,64株菌对常见抗菌药物呈现多重耐药趋势;Blast 比对显示,29 株为blaIMP-4型,35株为blaIMP-8型,未检出blaVIM、blaOXA-48、blaNDM-1基因型;接合试验证实接合子与供体菌具有相似的耐药性,可扩增出相同的耐药基因.结论阴沟肠杆菌耐药情况日趋严重,IMP-4型和IMP-8 型碳青霉烯酶是菌株产酶的主要型别,耐药基因可通过质粒进行水平传播且已在医院科室中局部流行,必须及时控制耐药菌株产生的高危因素.

关键词：阴沟肠杆菌碳青霉烯酶基因型临床感染

阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶基因检测及耐药性分析

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中国抗生素杂志 2006年第10期31卷 615-619页

作者：周铁丽郑佳音李超黄海霞温州医学院附属第一医院温州325000

目的了解阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶的产生情况,研究β-内酰胺酶的基因型别,并分析产酶特性和耐药表型的相关性。方法用酶提取三维试验检测ESBLs和AmpC酶,聚合酶链反应(PCR)扩增β-内酰胺酶的基因;VITEK全自动药敏分... 详细信息

目的了解阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶的产生情况,研究β-内酰胺酶的基因型别,并分析产酶特性和耐药表型的相关性。方法用酶提取三维试验检测ESBLs和AmpC酶,聚合酶链反应(PCR)扩增β-内酰胺酶的基因;VITEK全自动药敏分析系统和KB法检测细菌耐药性。结果101株阴沟肠杆菌中,检出ESBLs阳性株39株,高产AmpC酶阳性株53株,其中16株ESBLs和AmpC酶均阳性,非产酶菌25株;12株AmpC酶阳性菌中,7株扩增出blaDHA基因,8株扩增出blaMIR基因,其中5株同时携带blaDHA和blaMIR基因,1株同时携带blaMIR和blaFOX基因,4株三维试验阴性菌株blaMIR基因阳性;16株ESBLs阳性菌中,8株扩增出blaTEM基因,2株ESBLs三维试验阴性菌株blaTEM基因阳性,未检出blaSHV基因。阴沟肠杆菌对多种抗生素高度耐药,产酶菌株的耐药性明显高于非产酶株。结论阴沟肠杆菌中ESBLs和AmpC酶检出率均很高,AmpC酶以blaDHA、blaMIR基因型为主。产ESBLs和AmpC酶是阴沟肠杆菌耐药的主要原因。

关键词：阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶 AmpC酶基因型耐药性

阴沟肠杆菌质粒介导耐喹诺酮类药物的机制研究

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中国抗生素杂志 2007年第9期32卷 569-571页

作者：吴创鸿陆坚邓启文张扣兴张国良潘伟光深圳市第六人民医院深圳518052 深圳市第三人民医院(东湖医院) 深圳518020 中山大学第三附属医院广州510630

目的了解深圳地区阴沟肠杆菌中qnrA基因的流行情况、基因定位及其介导喹诺酮耐药性产生的机制。方法收集临床分离的阴沟肠杆菌45株，采用PCR法结合测序的技术筛查qnrA基因，大质粒提取技术、Southern杂交和接合传递试验进行质粒定位... 详细信息

目的了解深圳地区阴沟肠杆菌中qnrA基因的流行情况、基因定位及其介导喹诺酮耐药性产生的机制。方法收集临床分离的阴沟肠杆菌45株，采用PCR法结合测序的技术筛查qnrA基因，大质粒提取技术、Southern杂交和接合传递试验进行质粒定位，琼脂对倍稀释法进行药物敏感性检测。结果45株阴沟肠杆菌中，7株PCR法及测序证实为qnrA基因。7株菌中6株菌所携质粒被成功提取并进行Southern杂交，qnrA基因定位于80～200kb大小的低拷贝数天然质粒上。4株菌成功进行接合传递试验，使接合子对环丙沙星的MIC值提高了32-64倍。结论质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrA在深圳地区阴沟肠杆菌中具有较高的流行率，可能是导致阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗菌药获得性耐药的重要原因。

关键词： qnrA基因阴沟肠杆菌喹诺酮耐药质粒

阴沟肠杆菌blaNDM-1基因敲除株的构建及其生物学特性

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第12期37卷 897-902页

作者：尧静杜娜刘淑敏牛敏张孟爽陈辞言杜艳昆明医科大学第一附属医院医学检验科云南省实验诊断研究所云南省检验医学重点实验室 650032 云南省中医医院检验科昆明650021

目的构建阴沟肠杆菌blaNDM-1基因敲除株，并探讨blaNDM-1基因缺失对阴沟肠杆菌生物学特性的影响。方法采用Red同源重组技术构建阴沟肠杆菌blaNDM-1敲除株并通过PCR和RT-qPCR法进行验证，对原始菌株和blaNDM-1敲除株进行药敏试验、生长... 详细信息

目的构建阴沟肠杆菌blaNDM-1基因敲除株，并探讨blaNDM-1基因缺失对阴沟肠杆菌生物学特性的影响。方法采用Red同源重组技术构建阴沟肠杆菌blaNDM-1敲除株并通过PCR和RT-qPCR法进行验证，对原始菌株和blaNDM-1敲除株进行药敏试验、生长曲线绘制和体外竞争试验。结果PCR、DNA测序和RT-qPCR表明成功构建阴沟肠杆菌blaNDM-1敲除株。药敏试验显示原始菌株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南均耐药，而blaNDM-1敲除株对其均敏感；原始菌株和基因敲除株在LB液体培养基中具有相似的增殖曲线；两者体外竞争试验的竞争指数值为0．69。结论Red同源重组技术可用于阴沟肠杆菌基因的敲除，且blaNDM-1基因对阴沟肠杆菌的耐药性及竞争力都有影响。

关键词：阴沟肠杆菌 blaNDM-1基因 Red同源重组基因敲除