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阳离子脂质体包埋角鲨烯佐剂的制备及理化性质研究

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中国畜牧兽医 2021年第4期48卷 1431-1439页

作者：万蒙陈懿琳钱宇豪黄选夏廉臣王春维祝爱侠武汉轻工大学动物科学与营养工程学院武汉430023 武汉轻工大学动物营养与饲料科学湖北省重点实验室武汉430023

为研究一种阳离子脂质体包埋角鲨烯佐剂的制备工艺,试验采用乙醇注入法结合探头超声,以卵磷脂、胆固醇和硬脂胺为原料包被具有免疫功能作用的可代谢油脂角鲨烯,以粒径、稳定性指数(TSI)和Zeta电位为评价指标进行优化研究,并对阳离子脂... 详细信息

为研究一种阳离子脂质体包埋角鲨烯佐剂的制备工艺,试验采用乙醇注入法结合探头超声,以卵磷脂、胆固醇和硬脂胺为原料包被具有免疫功能作用的可代谢油脂角鲨烯,以粒径、稳定性指数(TSI)和Zeta电位为评价指标进行优化研究,并对阳离子脂质体包被角鲨烯佐剂理化性质进行分析。结果表明,最佳阳离子脂质体包被角鲨烯佐剂制备条件为:卵磷脂15 mg/mL,胆固醇2.0 mg/mL,角鲨烯8μL/mL,探头超声时间15 min,超声功率100 W。在此条件下所制佐剂平均电位45 mV,平均粒径182 nm,黏度<80 mPa·s,其粒度小、黏度小、性能稳定,具有进一步作为疫苗佐剂的研究价值。

关键词：阳离子脂质体角鲨烯佐剂黏度

阳离子脂质体共递送化疗药物及siRNA用于乳腺癌的治疗研究

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阳离子脂质体共递送化疗药物及siRNA用于乳腺癌的治疗研究

作者：李双双天津科技大学

学位级别：硕士

乳腺癌是一种致命的恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势。化疗是治疗乳腺癌的重要手段之一,但在接受化疗时,乳腺癌患者需要面对化疗带来的毒副作用,导致患者治疗依从性差。因此,迫切需要开展研究以发现疗效更好地治疗方案。携带多种药物和... 详细信息

乳腺癌是一种致命的恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势。化疗是治疗乳腺癌的重要手段之一,但在接受化疗时,乳腺癌患者需要面对化疗带来的毒副作用,导致患者治疗依从性差。因此,迫切需要开展研究以发现疗效更好地治疗方案。携带多种药物和si RNA的纳米递送系统具有挑战性,在文献中很少见。因此,多种药物与si RNA之间的抗癌功效和协同作用对于研究至关重要。本文利用阳离子脂质体（CTL）将紫杉醇（PTX）、克唑替尼（CRI）和BclxL siRNA三种药物共同包载后递送,联合治疗乳腺癌。首先采用（2,3-二油酰基-丙基）-三甲胺（DOTAP）和二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）这两种磷脂材料制备了3种摩尔比（DOTAP:DOPE）的阳离子脂质体（M 1:1、M 1:2、M 1:3）。阳离子脂质体的粒径均在130 nm左右,多分散系数（PDI）＜0.3,显示出良好的分布,Zeta电位均在54 m V左右。然后通过MTT实验和细胞转染实验筛选出细胞毒性低以及转染效率相对较高的阳离子脂质体M 1:1。在此基础上,使用M 1:1对克唑替尼和紫杉醇进行包载,制备克唑替尼和紫杉醇共载药阳离子脂质体（CRI-PTXCTL）。CRI-PTX-CTL的粒径为（138.63±1.53）nm,PDI＜0.3,显示出良好的分布,Zeta电位为（50.9±0.3）m V;CRI-PTX-CTL在形状上呈球形,并均匀分散。通过MTT和细胞凋亡实验分析了克唑替尼和紫杉醇之间的相互作用。CRI-PTXCTL具有最高的细胞毒性,高于其他药物溶液组和脂质体制剂组;Annexin V-FITC/PI双重染色在CRI-PTX-CTL中显示了早期和晚期凋亡细胞的最高百分比（76.7%）。通过琼脂糖凝胶电泳实验证实了阳离子脂质体具有较好的核酸吸附能力;倒置荧光显微镜观察阳离子脂质体所包载的克唑替尼、紫杉醇和si RNA可以有效的被乳腺癌细胞摄取,进一步测得CTL-si RNA能够有效地抑制细胞内Bclx L的表达。最后,在体外实验中,通过MTT法测定了CRI-PTX-CTL-si RNA体外抑制肿瘤细胞生长活性,阳离子脂质体递送的Bcl-x L si RNA和CRI-PTX在体外显示出增强的细胞毒性作用。综上,本研究证明CRI-PTX-CTL-siRNA递送系统具有提高治疗乳腺癌的潜力,为乳腺癌的治疗提供了一个新的策略。

关键词：阳离子脂质体紫杉醇克唑替尼小干扰RNA 乳腺癌

榄香烯增强卡巴他赛抗胶质瘤作用考察及其双靶向阳离子脂质体的制备优化与体外药效学评价

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中国实验方剂学杂志 2024年第12期30卷 173-184页

作者：尹丽燕王蓉蓉李杰谢恬广东药科大学中药学院广州511400 杭州师范大学药学院杭州311100 成都中医药大学成都611130

目的:探究榄香烯(ELE)增强卡巴他赛(CTX)抗胶质瘤疗效,制备一种共载ELE/CTX的双靶向阳离子脂质体(LIP)用于胶质瘤的治疗研究,并达到增加药效、减少不良反应的作用,经体外药效学试验揭露其优势及作用机制。方法:采用高速剪切法联合探头... 详细信息

目的:探究榄香烯(ELE)增强卡巴他赛(CTX)抗胶质瘤疗效,制备一种共载ELE/CTX的双靶向阳离子脂质体(LIP)用于胶质瘤的治疗研究,并达到增加药效、减少不良反应的作用,经体外药效学试验揭露其优势及作用机制。方法:采用高速剪切法联合探头超声法制备脂质体ELE/CTX@LIP,并采用纳米粒径电位仪对其粒径及电位进行表征,采用高效液相色谱法(HPLC)测定ELE/CTX包封率及载药量;采用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测ELE/CTX体外细胞增殖抑制活性;通过JMP Pro 16软件,以包封率为指标优化脂质体(ELE/CTX@LIP)工艺参数;通过体外细胞增殖抑制活性和体外细胞摄取,筛选最佳阳离子材料种类、含量与配比,在此基础上制备双靶向阳离子脂质体并表征其形态、粒径稳定性等,验证其对RG2胶质瘤细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:ELE/CTX抗胶质瘤活性结果显示ELE/CTX分别对C6、RG2细胞具有更强的细胞增殖抑制活性;体外细胞增殖抑制活性和体外细胞摄取结果显示阳离子材料用量为总含量的0.10%;T7、精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸三肽序列(cRGD)与磷脂最佳配比为1∶1∶50。T7/cRGD-ELE/CTX@CLIP[1,2-二油酰氧基-3-二甲基氨基丙烷(DlinMC3-DMA)]、T7/cRGD-ELE/CTX@CLIP[二肉豆蔻酰甘油-聚乙二醇2000(DMG-PEG2000)]呈现多层次球状纳米结构,粒径分别为146.0 nm和111.3 nm,血清稳定性良好;体外细胞增殖抑制结果显示,与单靶向脂质体或双靶向非阳离子脂质体比较,T7/cRGD-ELE/CTX@CLIP在体外对胶质瘤细胞具有更高的细胞增殖抑制活性;T7/cRGD-ELE/CTX@CLIP影响胶质瘤细胞凋亡及周期,结果显示,ELE/CTX联用能通过脂质体载体能更加有效的激活细胞凋亡通道抑制胶质瘤细胞增殖,且使用T7/cRGD短肽及阳离子修饰后,增强了细胞凋亡诱导能力,ELE/CTX能有效将胶质瘤细胞周期阻滞于G2/M期,且经T7/cRGD靶向修饰后,效果增强。结论:ELE可以增强CTX抗胶质瘤疗效,ELE/CTX@LIP制备工艺参数稳定可行,结合体外药效试验初步揭示了T7/cRGD-ELE/CTX@CLIP抗胶质瘤作用机制。

关键词：双靶向阳离子脂质体脑胶质瘤榄香烯卡巴他赛增效工艺优化

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阳离子脂质体转染条件对转染效率的影响

中国科技期刊数据库医药 2023年第7期 0080-0084页

作者：李丽玮李书平郝世瑞陈欣欣王秀锋邢台市人民医院检验科河北邢台054000 邢台市人民医院营养科河北邢台054000 邢台市人民医院儿科河北邢台054000

分析不同浓度的四环素、阿奇霉素、氯霉素和庆大霉素和不同PH值、细胞状态对脂质体Lipo2000转染效率产生影响。方法 1.HeLa细胞转染前24小时在MEM培养基中分别加入不同种类不同浓度的抗生素,48小时后根据GFP阳性细胞数量分析抗生素对转... 详细信息

分析不同浓度的四环素、阿奇霉素、氯霉素和庆大霉素和不同PH值、细胞状态对脂质体Lipo2000转染效率产生影响。方法 1.HeLa细胞转染前24小时在MEM培养基中分别加入不同种类不同浓度的抗生素,48小时后根据GFP阳性细胞数量分析抗生素对转染的影响。2.HeLa细胞转染前24小时放置在不同PH值的MEM培养基中,根据GFP阳性细胞数量分析不同PH值对转染的影响。3.观察对在室温放置不同天数的HeLa细胞转染率,分析不同细胞状态对转染效率的影响。结果 1.不同种类抗生素以及同种抗生素不同浓度均对脂质体转染效率的敏感性不同,用庆大霉素作为抗生素转染效率最佳,四环素转染效率最差。2.不同转染细胞浓度条件下在PH=8.0碱性培养基中转染效率最佳。3.室温放置的细胞脂质体LipofectamineTM2000的转染效率显著降低。结论使用庆大霉素抗生素以及在PH值8.0、细胞状态最佳条件下转染效率敏感性最高。

关键词：阳离子脂质体转染效率抗生素 PH 细胞状态

阳离子脂质体共载基因与化疗药物用于癌症治疗的研究进展

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药学学报 2012年第8期47卷 986-992页

作者：陈伟光刘源岗王士斌陈爱政华侨大学生物工程与技术系福建厦门361021 华侨大学生物材料与组织工程研究所福建厦门361021

尽管传统癌症化疗方法已取得明显的进展,但由于化疗药物的多药耐药性及毒副作用限制其应用。为了克服多药耐药性,需要增加药物剂量及用药次数,反而导致更强的毒副作用,最终限制了化疗药物的临床使用。阳离子脂质体作为新型基因与药物传... 详细信息

尽管传统癌症化疗方法已取得明显的进展,但由于化疗药物的多药耐药性及毒副作用限制其应用。为了克服多药耐药性,需要增加药物剂量及用药次数,反而导致更强的毒副作用,最终限制了化疗药物的临床使用。阳离子脂质体作为新型基因与药物传递系统,近年来备受众多研究学者的青睐。最重要的是阳离子脂质体共载基因与化疗药物进行联合治疗具有良好的协同增效作用,主要是外源基因可以沉默相关基因的表达,且提高胞内化疗药物浓度。该方法可以减少药物的使用剂量以达到相同治疗效果。从某种程度上克服了传统化疗的主要限制。因此在未来癌症治疗中,共载基因与药物联合治疗递送体系将发挥更大作用,特别有望用于多药耐药肿瘤中的临床治疗。

关键词：阳离子脂质体基因化疗药物共载肿瘤治疗

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阳离子脂质体诱导的细胞氧化应激损伤

中国细胞生物学学报 2020年第5期42卷 772-784页

作者：韩磊崔韶晖马启晨陈星妍王莹张树彪大连工业大学生物工程学院大连116034 大连民族大学生命科学学院生物技术与资源利用教育部重点实验室大连116601

人工合成制备的阳离子脂质体作为一种重要的基因和药物载体,具有很多优点,但其对细胞的毒性作用机制尚不明确,严重影响其临床应用。该文对阳离子脂质体是否通过诱导细胞产生氧化应激反应,进而导致细胞毒性的相关作用机制进行了研究。实... 详细信息

人工合成制备的阳离子脂质体作为一种重要的基因和药物载体,具有很多优点,但其对细胞的毒性作用机制尚不明确,严重影响其临床应用。该文对阳离子脂质体是否通过诱导细胞产生氧化应激反应,进而导致细胞毒性的相关作用机制进行了研究。实验使用人肺癌细胞(NCI-H460)和人胚肺正常细胞(MRC-5),采用CCK-8法、活性氧簇(ROS)荧光标记形态学观察、流式细胞术定量测定及活性氧簇自由基检测等方法,研究对比了三种头部结构不同,连接键和疏水尾部均相同的阳离子脂质体细胞毒性作用机制。这三种脂质体分别由三肽头部的N,N-双十四烷氧酰胺乙基三聚鸟氨酸酰胺(CDO14)、单季铵盐头部的N,N-双十四烷氧酰胺乙基-N,N-二甲基碘化铵(CDA14)和双季铵盐头部的1,2-双-[N-十四烷氧酰胺乙基-N,N-二甲基碘化铵]乙烷(CTA14)制备。研究结果表明,三种阳离子脂质体诱导的超氧化物、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(?OH)、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)等ROS均与作用剂量呈正相关,其中CDA14和CTA14高浓度处理组(0.10 μmol/L和0.20 μmol/L)与低浓度处理组(0.05 μmol/L常规转染浓度)及空白对照组相比差异极显著,而CDO14只在0.20 μmol/L处理组有显著差异,且三种脂质体对NCI-H460细胞的氧化应激损伤值均高于MRC-5细胞。因此,肽头部脂质体CDO14产生的氧化应激损伤远小于单季铵盐头部脂质体CDA14,而CDA14又小于双季铵盐头部脂质体CTA14。综上所述,阳离子脂质体诱导的细胞氧化应激损伤与其头部结构和剂量密切相关。该研究为阳离子脂质体的生物安全性及新型阳离子类脂结构设计提供科学参考。

关键词：阳离子脂质体载体细胞毒性 ROS 氧化应激

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阳离子脂质体在基因治疗中的研究进展

生物医学工程学进展 2022年第2期43卷 84-87页

作者：汪琼卉刘哲鹏李北雪上海理工大学健康科学与工程学院上海200093

基因治疗从基因水平上对疾病进行干预已备受关注,阳离子脂质体作为一种非病毒载体,因其制备简单,可降解性等特点,可作为基因治疗的有效载体。该文从结构、制备方法、作用机制及应用等方面阐述了阳离子脂质体在基因治疗中的研究进展。

关键词：基因治疗阳离子脂质体非病毒载体

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阳离子脂质体体外转染实验条件的优化研究

当代医药论丛 2022年第13期20卷 85-87页

作者：李洪梅姜恩平裴轶劲孙艳芹尹金宝广东医科大学病理学系广东东莞523808 广东医科大学生理学教研室广东东莞523808

阳离子脂质体是被公认的有研发前景的基因传递载体。任何一种商品化的阳离子脂质体转染试剂说明书中给出的转染步骤都是一致的。但应用其转染不同大小的目的基因及用其与不同受体细胞转染相同目的基因时,转染效率均有所不同。用阳离子... 详细信息

阳离子脂质体是被公认的有研发前景的基因传递载体。任何一种商品化的阳离子脂质体转染试剂说明书中给出的转染步骤都是一致的。但应用其转染不同大小的目的基因及用其与不同受体细胞转染相同目的基因时,转染效率均有所不同。用阳离子脂质体法成功转染核酸的最关键一环就是前期转染条件的优化。本文基于阳离子脂质体介导核酸进入细胞的过程,从影响转染效率的六个方面对以往优化转染条件的重要经验和体会加以总结,以期与本领域的同仁分享和探讨。

关键词：阳离子脂质体核酸转染优化

阳离子脂质体介导IL-15基因治疗小鼠肺转移模型的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第2期28卷 148-152页

作者：滕秀周西坤张印兵邱吉毛咏秋邓洪新李炯 NJll大学华西医院生物治疗国家重点实验室四川成都610041

目的:用阳离子脂质体(CL)包裹pcDNA3.1-IL15制备阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15,观察其抗小鼠B16-F10肺转移瘤的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:构建hIL-15真核表达载体,测定脂质体-质粒DNA复合物的最佳包封率;将该复合物转染C... 详细信息

目的:用阳离子脂质体(CL)包裹pcDNA3.1-IL15制备阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15,观察其抗小鼠B16-F10肺转移瘤的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:构建hIL-15真核表达载体,测定脂质体-质粒DNA复合物的最佳包封率;将该复合物转染CHO-K1细胞株,West-ern blott检测体外转染条件下IL-15蛋白的表达情况,MTT法检测细胞转染上清对CTLL-2细胞株的增殖刺激作用;建立B16-F10小鼠黑色素瘤肺转移模型,尾静脉给药,每隔1 d给药1次,共6次,治疗结束24 h后观察各组肿瘤肺转移情况;LDH释放法(乳酸脱氢酶释放法)检测脾淋巴细胞的杀伤作用,冰冻切片免疫荧光法观察NK细胞对肿瘤组织的浸润。结果:成功构建hIL-15表达载体,并验证其与阳离子脂质体的质量比为1∶5时,包裹后形成的复合物具有较好的包封率;可以在体外有效转染并表达具生物活性的分泌型IL-15蛋白;CL-IL15复合物治疗小鼠肿瘤肺转移模型,可以显著减少肿瘤肺转移结节数目,提高脾细胞对肿瘤细胞杀伤活性(P阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15可有效地抑制小鼠B16-F10肺转移瘤,其作用机制可能与IL-15诱导脾细胞对肿瘤细胞的杀伤、激活NK(natural killer)细胞对肿瘤组织的浸润等机制有关。

关键词：阳离子脂质体 IL-15 B16-F10 肺转移基因治疗