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防己诺林碱对结肠癌细胞恶性生物学行为及HIF-1α/VEGF/Akt通路的相关性研究

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中国免疫学杂志 2019年第24期35卷 3042-3047页

作者：望永鼎刘文华翟一飞张涛商丘医学高等专科学校外科商丘476000 河南省肿瘤医院郑州450008

目的:研究防己诺林碱(FAN)对结肠癌的作用以及与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)通路的相关性。方法:用5、10、20μg/ml的防己诺林碱分别处理结肠癌细胞HT-29 48 h,克隆形成实验检测细胞生长,蛋白印迹... 详细信息

目的:研究防己诺林碱(FAN)对结肠癌的作用以及与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)通路的相关性。方法:用5、10、20μg/ml的防己诺林碱分别处理结肠癌细胞HT-29 48 h,克隆形成实验检测细胞生长,蛋白印迹检测增殖标记蛋白Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经细胞钙黏蛋白(N-cadherin)、HIF-1α、VEGF和Akt的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,显微镜观察上皮向间质的形态转变;采用皮下注射结肠癌细胞HT-29构建移植瘤模型,腹腔分别注射5、10、20μg/ml防己诺林碱,检测结肠癌移植瘤体积,免疫组化检测Ki67和VEGF,蛋白印迹检测HIF-1α、VEGF、Akt的表达,HE染色观察肝肾损伤。结果:与Blank cells相比较,FAN组的结肠癌细胞HT-29克隆形成率显著降低,Ki67和PCNA的表达量显著下调,侵袭细胞数目显著减少,VEGF和N-cadherin表达量显著下调,E-cadherin表达量显著上调,HIF-1α、VEGF和Akt表达量显著下调;与Blank组相比,FAN组的移植瘤体积明显小,Ki67和VEGF阳性比率显著降低,HIF-1α、VEGF和Akt表达量显著下调,肝肾无损伤。结论:防己诺林碱都可以抑制结肠癌细胞HT-29的生长和增殖、侵袭能力、上皮间质转化,并且抑制结肠癌细胞HIF-1α/VEGF/Akt信号通路,从而抑制结肠癌的发生和发展。

关键词：防己诺林碱结肠癌细胞HT-29 HIF-1α VEGF Akt

防己诺林碱对去卵巢小鼠骨代谢及骨微结构的影响

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中国骨质疏松杂志 2020年第11期26卷 1609-1612,1663页

作者：周琳杨明理王博浯赵毅曾春平广州医科大学附属第五医院内分泌科广州医科大学第五临床学院广东广州510700 遵义医科大学医学遗传学教研室贵州遵义563000

目的探讨防己诺林碱对去卵巢小鼠骨质疏松的保护作用。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为空白(假手术)对照组、模型(去卵巢)组、阳性(雌二醇,E2)对照组、防己诺林碱组共4组,每组10只。连续腹腔给药7周后处死小鼠,取股骨及外周血清,通过ELIS... 详细信息

目的探讨防己诺林碱对去卵巢小鼠骨质疏松的保护作用。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为空白(假手术)对照组、模型(去卵巢)组、阳性(雌二醇,E2)对照组、防己诺林碱组共4组,每组10只。连续腹腔给药7周后处死小鼠,取股骨及外周血清,通过ELISA法检测骨代谢相关血清学指标:抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAcP)、I型胶原羧基末端肽(CTX)及I型胶原氨基末端肽(NTX);通过Micro-CT评估各组小鼠骨组织微结构相关指标:骨小梁百分比(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和骨小梁厚度(Tb.Th);通过实时荧光定量PCR检测小鼠骨质疏松骨吸收相关基因的表达情况,包括TRAcP、组织蛋白酶K(Cathepsin K)、活化T细胞核因子1(NFATc1)以及降钙素受体(CTR)。结果与去卵巢模型组比较,防己诺林碱治疗组小鼠BV/TV、Tb.N、Tb.Th显著升高,Tb.Sp明显降低,骨代谢相关指标(TRAcP、CTX、NTX)显著降低,破骨细胞标志基因(TRAcP、Cathepsin K、NFATc1以及CTR)表达水平明显下降。结论防己诺林碱对去卵巢小鼠骨质疏松有保护作用,有望为骨质疏松的临床用药提供新思路。

关键词：防己诺林碱去卵巢小鼠骨质疏松骨代谢

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防己诺林碱药理作用研究进展

食品与药品 2022年第5期24卷 476-480,I0004页

作者：王斐然张会敏林永强张秋红山东中医药大学山东济南250355 山东省中医药研究院山东济南250014 山东省食品药品检验研究院国家药监局胶类产品质量评价重点实验室山东省中药标准创新与质量评价工程实验室中药配方颗粒共性技术山东省工程研究中心山东济南250101 济南市食品药品检验检测中心山东济南250102

防己诺林碱是防己中重要的生物碱类,具有抗癌、抗肿瘤、缓解骨质疏松、抗炎、抗病毒、视网膜保护、抑制瘢痕生长等作用;与其他药物联合用药具有协同作用。本文综述防己诺林碱的药理作用,为防己诺林碱的后续研究、开发和综合利用提供参考。

关键词：防己诺林碱作用机制药理作用抗肿瘤

防己诺林碱阻断自噬抑制H1N1病毒感染的研究

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药物评价研究 2024年第4期47卷 711-719页

作者：谢芳禹艳丽王靳勇李琪琪孔令东张美琦成翠芹王遥北京中医药大学生命科学学院北京中医药大学中药学院

目的探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用，阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0μmol·L-1的防己... 详细信息

目的探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用，阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0μmol·L-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响；MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱(2.5、5.0、10.0μmol·L-1)组，除对照组外，以感染复数(MOI)为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞，加入防己诺林碱共同孵育12 h，同时设置防己诺林碱(10.0μmol·L-1)与病毒共同孵育4、8 h组，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR，检测HIN1 mRNA表达)和Western blotting[H1N1病毒核蛋白(NP)]检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用；PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱(10.0μmol·L-1)对MDCK细胞死亡的影响；qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防己诺林碱预处理、病毒感染早期药物处理、病毒感染晚期药物处理以及吸附和进入阶段给药对病毒复制的影响；MDCK细胞转染EGFP-LC3或EGFP-mCherry-LC3双荧光质粒，观察防己诺林碱对EGFP-LC3的荧光强度、EGFP-mCherry-LC3共定位的影响，设置自噬诱导剂雷帕霉素(0.5μmol·L-1)、自噬晚期抑制剂氯喹(10μmol·L-1)、巴佛洛霉素A1(100 nmol·L-1)对照。转染过EGFP-LC3质粒的MDCK细胞感染H1N1病毒，免疫荧光检测防己诺林碱对LC3与胞内的病毒NP蛋白共定位的影响；体外培养A549细胞，以MOI为0.1的H1N1病毒感染，Westernblotting检测防己诺林碱对LC3II/LC3I蛋白表达的影响。结果防己诺林碱对MDCK细胞的半数抑制浓度(IC50)为40.19μmol·L-1；与模型组比较，防己诺林碱以浓度相关性的方式抑制HIN1 mRNA表达，以浓度和时间相关性的方式抑制NP蛋白表达(P防己诺林碱处理诱导LC3荧光聚集，诱导EGFP-LC3和mCherry-LC3双荧光共定位显著增加(P防己诺林碱处理明显减少NP的荧光数量(P防己诺林碱同氯喹和巴佛洛霉素A1一致，阻断自噬途径，使病毒粒子在自噬体内滞留，破坏病毒生命周期。

关键词：防己诺林碱甲型流感病毒自噬氯喹巴佛洛霉素A1

防己诺林碱对宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制研究

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防己诺林碱对宫颈癌HeLa细胞的作用及其机制研究

作者：蔡鑫川北医学院

学位级别：硕士

目的:探索防己诺林碱(Fangchinoline,FAN)对宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭、周期分布及凋亡的影响以及潜在作用机制。方法:利用CCK-8实验检测不同浓度FAN对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制效应;通过细胞划痕及Transwell实验检测FAN对HeLa细胞... 详细信息

目的:探索防己诺林碱(Fangchinoline,FAN)对宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭、周期分布及凋亡的影响以及潜在作用机制。方法:利用CCK-8实验检测不同浓度FAN对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制效应;通过细胞划痕及Transwell实验检测FAN对HeLa细胞迁移及侵袭能力的影响。经不同浓度FAN处理HeLa细胞24 h后,利用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡情况,并采用Western Blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达水平的变化。此外,通过Western Blot进一步检测ERK信号通路相关分子表达水平的变化。结果:CCK-8实验结果显示,宫颈癌HeLa细胞经FAN处理后,细胞的增殖能力受到显著抑制(P0.05)。结论:FAN呈浓度或时间依赖性抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移及侵袭能力;FAN通过上调P27及下调Cyclin D1表达水平,从而诱导宫颈癌HeLa细胞发生G0/G1期阻滞;FAN通过上调P53及下调PARP、Bcl2表达水平,从而促进宫颈癌HeLa细胞凋亡;FAN可能通过抑制ERK信号通路,从而对宫颈癌HeLa细胞发挥抗肿瘤活性。

关键词：防己诺林碱宫颈癌 HeLa细胞 ERK

防己诺林碱对实验性类风湿关节炎的治疗作用及潜在机制研究

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防己诺林碱对实验性类风湿关节炎的治疗作用及潜在机制研究

作者：孙胜楠南京师范大学

学位级别：硕士

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性、系统性的自身免疫性疾病,主要表现为关节滑膜炎和骨组织侵蚀性破坏。RA发病率高,致残率高,治愈性差。目前RA的治疗主要包括早中期的药物治疗和晚期的关节置换。当前临床常用的RA治疗... 详细信息

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性、系统性的自身免疫性疾病,主要表现为关节滑膜炎和骨组织侵蚀性破坏。RA发病率高,致残率高,治愈性差。目前RA的治疗主要包括早中期的药物治疗和晚期的关节置换。当前临床常用的RA治疗药物包括糖皮质激素(glucocorticoids,GC)、非甾体抗炎药(Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs,NSAIDs)、改善病情抗风湿药(disease-modifying anti-rheumatic drugs,DMARDs)以及生物制剂。GC 和 NSAIDs 虽能减轻RA症状,但不能阻止病情发展和预防关节破坏;DMARDs和生物制剂虽能阻止骨破坏进程,但长期服用存在较大毒副作用,而且生物制剂价格昂贵,存在较大的感染风险。因此,寻找新的替代性或补充性药物成了亟待解决的问题。中药尤其是中药单体具易获取、多靶向性和毒副作用小等优点,成为RA替代性药物的首选。防己诺林碱(Fangchinoline,Fan)是防己科植物粉防己干燥根中所含有的主要生物碱活性成分之一,已被证明具有抗氧化性,抗炎,心血管保护,神经保护、降血糖及抗癌等功能,但尚未见其治疗RA的研究报道。RA本是炎性疾病,且其主要受损细胞滑膜成纤维细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)已向肿瘤细胞转化。因此,我们提出假设:Fan可能对RA具有治疗作用。为此,我们利用胶原诱导的类风湿关节炎大鼠模型Collagen-induced arthritis,CIA)检测了 Fan对RA的治疗作用,并从动物、细胞和分子水平分析了 Fan对RA治疗的潜在机制。主要实验内容和结果:第一部分:体内实验:Fan对CIA大鼠的治疗作用选取160 g-180 g SPF级雌性Wistar大鼠,皮内和皮下两次注射Ⅱ型胶原,建立CIA模型,阴性对照组注射等量生理盐水。当CIA模型建立后(关节炎指数评分≥2),将CIA大鼠随机分为组。本论文分组情况:未诱导CIA的对照组(Control),每天腹腔注射生理盐水(n=5);阳性对照组(CIA+Vehicle),每天腹腔注射生理盐水(n=6);阳性治疗组(CIA+MTX3 mg·kg-1),每三天腹腔注射一次MTX(n=6);低剂量治疗组(CIA+Fan 3 mg·kg-1),每天腹腔注射Fan(n=6);高剂量治疗组(CIA+Fan 6mg·kg-1),每天腹腔注射Fan(n=6)。从关节炎指数评分≥2开始给药处理,持续给药14天。14天后取材,通过关节炎指数评分、影像学及评分等方面,综合评价Fan对CIA大鼠的治疗情况。结果:Fan处理明显抑制了 CIA大鼠的发病严重程度,主要表现为Fan治疗组大鼠在关节指数评分、足爪体积肿胀程度、影像学评分上明显低于CIA对照组。而且,Fan高剂量组的治疗效果优于MTX阳性药物组。病理学切片分析结果显示,与CIA对照组组相比,Fan治疗组在炎性细胞侵润、滑膜增生、血管翳形成、骨和软骨的破坏等方面明显改善。以上结果表明,Fan对Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠有明显的治疗作用。第二部分:体外实验:Fan对RA治疗作用的可能机制分析FLS是RA整个病程的主要受损细胞。FLS能够释放多种炎性因子,响应并介导炎症反应。FLS的过度活化、增生和侵袭性被认为是RA滑膜炎症持续发展和骨组织侵蚀性破坏的关键。因此,本论文以原代培养的CIA大鼠滑膜成纤维样细胞(CIA-FLS)为受试细胞,分析了 Fan对RA的抑制作用是否通过影响了FLS过度激活表型来实现的。主要实验内容包括:(1)通过MTS实验检测Fan的药物毒性;(2)通过细胞划痕实验检测Fan对CIA-FLS细胞迁移能力的影响;(3)通过EdU掺入实验检测Fan对CIA-FLS细胞增殖能力的影响;(4)通过流式细胞术检测Fan对CIA-FLS细胞凋亡的影响;(5)通过Q-PCR分析Fan对TNFα刺激的CIA-FLS细胞炎性因子表达的影响;(6)通过Western-blot分析可能的分子机制。结果:通过MTS实验,测得Fan对CIA-FLS半抑制浓度(IC50)为4.114μM,论文中所用最高剂量为2 μM。划痕实验表明,Fan以浓度依赖的方式抑制了 CIA-FLS细胞的迁移;EdU掺入实验显示,1 μM的Fan可明显抑制TNFα刺激的CIA-FLS细胞的增殖;Q-PCR分析发现Fan能够剂量依赖性的抑制炎性因子IL-1β、IL-6和IL-8的表达。Western blot进行机制分析发现,Fan呈剂量依赖地抑制了 TNFα刺激的MAPK(p38)的激活以及IκBα的降解。免疫荧光检测p65入核进一步证明了 Fan对NF-κB信号通路的抑制作用。结论:动物实验表明,Fan可明显减轻CIA大鼠的发病程度,对Ⅱ型胶原诱导的RA具有明显的治疗效果;体外细胞实验表明

关键词：类风湿关节炎防己诺林碱滑膜成纤维细胞

防己诺林碱调控紫杉醇在MDR1-MDCKⅡ细胞模型中的跨膜转运研究

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中国中药杂志 2010年第11期35卷 1478-1481页

作者：何丽杨俊毅胡丽娜四川大学华西第二医院四川成都610041 四川大学华西药学院四川成都610041

目的:研究防己诺林碱对紫杉醇在MDR1-MDCKⅡ细胞跨膜转运的调控作用。方法:以外排转运蛋白P-gp底物紫杉醇为模型药物,盐酸维拉帕米为对照,考察防己诺林碱调控紫杉醇在MDR1-MDCKⅡ细胞模型的跨膜转运作用。采用RP-HPLC检测紫杉醇在转运... 详细信息

目的:研究防己诺林碱对紫杉醇在MDR1-MDCKⅡ细胞跨膜转运的调控作用。方法:以外排转运蛋白P-gp底物紫杉醇为模型药物,盐酸维拉帕米为对照,考察防己诺林碱调控紫杉醇在MDR1-MDCKⅡ细胞模型的跨膜转运作用。采用RP-HPLC检测紫杉醇在转运介质中的药物浓度,计算其表观渗透系数。结果:紫杉醇在P-gp高表达的MDR1-MDCKⅡ细胞模型中外排的速率明显快于吸收的速率。与紫杉醇单用相比,紫杉醇分别联用盐酸维拉帕米及防己诺林碱后,紫杉醇吸收速率均显著增加,而外排速率均显著降低,相同浓度的防己诺林碱抑制转运作用强于对照盐酸维拉帕米。结论:防己诺林碱能够明显降低紫杉醇在MDR1-MDCKⅡ细胞的外排作用,抑制由P-gp介导的多药耐药。

关键词：紫杉醇防己诺林碱 MDR1-MDCKⅡ细胞 P糖-蛋白

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防己诺林碱与牛血清白蛋白相互作用的研究

光谱学与光谱分析 2007年第12期27卷 2498-2501页

作者：吴秋华王春王志马晶军臧晓欢秦娜欣河北农业大学理学院河北保定071001

在不同温度下,用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱和紫外-可见吸收光谱,研究了防己诺林碱与BSA相互作用的光谱学行为。防己诺林碱对BSA有较强的荧光猝灭作用。根据不同温度下防己诺林碱对BSA的荧光猝灭作用,利用Stern-Volmer方程处理实验数据... 详细信息

在不同温度下,用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱和紫外-可见吸收光谱,研究了防己诺林碱与BSA相互作用的光谱学行为。防己诺林碱对BSA有较强的荧光猝灭作用。根据不同温度下防己诺林碱对BSA的荧光猝灭作用,利用Stern-Volmer方程处理实验数据,表明防己诺林碱对BSA的荧光猝灭作用属于静态猝灭。根据F rster非辐射能量转移理论计算出了防己诺林碱与BSA间的结合距离R(27℃2.51 nm;37℃2.72 nm;47℃2.89 nm)、结合常数KA(27℃1.05×105L.mol-1;37℃3.31×105L.mol-1;47℃7.24×105L.mol-1)及对应温度下的热力学参数。热力学数据表明二者主要靠疏水作用力结合,同时用同步荧光光谱探讨了防己诺林碱对BSA构象的影响。

关键词：防己诺林碱 BSA 荧光猝灭光谱同步荧光光谱紫外-可见吸收光谱

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防己诺林碱对三阴性乳腺癌抗肿瘤机制的研究

防己诺林碱对三阴性乳腺癌抗肿瘤机制的研究

作者：张艳辉青岛大学

学位级别：硕士

【目的】研究防己诺林碱对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的促进凋亡、抑制PI3K/AKT/mTOR通路中PI3K、AKT、mTOR及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达,抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,探讨防己诺林碱对三阴性乳腺癌的抗肿瘤机制。【方法】体外培养... 详细信息

【目的】研究防己诺林碱对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的促进凋亡、抑制PI3K/AKT/mTOR通路中PI3K、AKT、mTOR及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达,抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,探讨防己诺林碱对三阴性乳腺癌的抗肿瘤机制。【方法】体外培养三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,刃天青法检测防己诺林碱对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用,计算其IC50,确定防己诺林碱的有效浓度;6孔板细胞划痕实验检测防己诺林碱抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁徙能力;细胞流式技术检测防己诺林碱促进细胞的凋亡作用;Western Blot检测PI3K/AKT/mTOR通路中PI3K、AKT、mTOR及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达,从而确定防己诺林碱对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231蛋白表达的影响;荷瘤裸鼠实验探讨防己诺林碱对三阴性乳腺癌肿瘤生长的抑制作用。【结果】防己诺林碱可以抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的活力,并测得IC50为6.25μmol/L;6孔板细胞划痕实验结果表明防己诺林碱还可以抑制MDA-MB-231细胞的迁徙能力;随着浓度升高,抑制作用结果明显;细胞流式技术表明防己诺林碱可以促进MDA-MB-231细胞的凋亡,且随着浓度增加,凋亡率呈正相关;Western Blot实验结果表明防己诺林碱可调控PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、AKT、mTOR及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达,且表达结果受浓度影响,随浓度升高,蛋白表达下降;裸鼠成瘤实验结果表明防己诺林碱可抑制三阴性乳腺癌肿瘤的生长。【结论】防己诺林碱可以降低MDA-MB-231细胞的活力,加速细胞的凋亡,抑制细胞迁徙,下调PI3K/AKT/mTOR信号通路中非磷酸化及磷酸化PI3K、AKT、mTOR表达,抑制TNBC细胞的生长、增殖、迁移,达到抑制肿瘤的生长效果。

关键词：防己诺林碱三阴性乳腺癌 PI3K/AKT/mTOR细胞信号通路抗肿瘤