检索结果-南通市图书馆

植物研究 2013年第3期33卷 308-316页

作者：赵钟鑫王健李琴尚啸海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室海南大学园艺园林学院海口570228

以阔叶薰衣草(Lavandula latifolia)的鲜叶为试材,通过RT-PCR技术,获得阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的cDNA序列。该序列长度为1809bp,编码602个氨基酸,包含一个1809 bp的开放阅读框,与NCBI上已公布的阔叶薰衣草的芳樟醇合成酶蛋白序列相... 详细信息

以阔叶薰衣草(Lavandula latifolia)的鲜叶为试材,通过RT-PCR技术,获得阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因的cDNA序列。该序列长度为1809bp,编码602个氨基酸,包含一个1809 bp的开放阅读框,与NCBI上已公布的阔叶薰衣草的芳樟醇合成酶蛋白序列相似度为98%,有21个核苷酸差异,11个氨基酸差异,将其命名为Lslis。序列分析研究表明:Lslis具有多数单萜烯类合成酶基因典型的保守结构域,即DDXXD,RRX8W和(N,D)D(L,I,V)X(S,T)XXXE;具有芳樟醇合酶活性必需的DDXXD功能基团。Lslis推导氨基酸序列的预测分子质量和等电点分别为70.36和5.66 kD;疏水性分析结果表明其大部分氨基酸区域为亲水结构,该基因为亲水多肽。Lslis和已公布的阔叶薰衣草芳樟醇合酶Lllis的蛋白二级结构预测结果表明,两者在整体结构上基本保持一致,但Lslis相对于Lllis要少一个α螺旋结构。将其连接到pMD18-T的载体上,通过中间载体pCAMBIA1303,构建了Lslis基因的植物表达载体,并将其导入农杆菌,经菌落PCR鉴定和测序结果表明该片段已插入表达载体。

关键词：阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因克隆序列分析植物表达载体构建

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阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因的克隆与植物表达载体的构建

阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因的克隆与植物表达载体的构建

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作者：赵钟鑫海南大学

学位级别：硕士

阔叶薰衣草（Lanvandula spica）是唇形科（Lamiaceae）薰衣草属（Lanvandula）的多年生草本植物,原产于地中海,耐热、耐湿,全株都能散发出宜人的香味,具有醒目提神、舒缓神经等功效,是薰衣草类较能适应海南高温高湿环境的一种。芳樟醇... 详细信息

阔叶薰衣草（Lanvandula spica）是唇形科（Lamiaceae）薰衣草属（Lanvandula）的多年生草本植物,原产于地中海,耐热、耐湿,全株都能散发出宜人的香味,具有醒目提神、舒缓神经等功效,是薰衣草类较能适应海南高温高湿环境的一种。芳樟醇合酶一般通过植物叶片、花、果实等提取获得,是合成芳樟醇的关键酶,能在亲电机制的条件下将单一底物GPP催化形成单一产物芳樟醇。芳樟醇作为一种天然功能性单萜,是植物精油的主要成分,具有极高的经济价值和药用价值,广泛应用于医药、食品、化妆品和日化等行业。本实验通过对阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因的克隆和序列分析,并构建基因转化载体,为热带园林植物中无香味或者香味较淡的物种进行定向遗传改良、培育出色、香、形俱全的优良转基因植物品种奠定基础。主要研究结果如下： 1、根据芳樟醇合酶同源序列设计出特异性引物,通过RT-PCR技术,成功从阔叶薰衣草叶片中克隆出芳樟醇合酶基因,其cDNA序列全长为1809bp,编码602个氨基酸,具有完整的开放读码框。 2、将克隆得到的阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因与其他芳樟醇合酶基因进行蛋白质序列比对,该序列具有单萜类合酶的所有保守氨基酸功能序列,包括DDXXD以及5端的RR功能基团和（N, D）D（L, I, V）X（S, T）XXXE等高度保守功能域,属于芳樟醇合酶家族。Lslis和Lllis的蛋白二级结构预测结果表明,两者在整体结构上基本保持一致,但Lslis相对于Lllis要少一个α螺旋结构。因此将阔叶薰衣草芳樟醇合酶基因命名为Lslis。 3、利用植物双元表达载体pCAMBIA1303的CaMV35S启动子和NOS终止子可构成完整表达框的原理,将Lslis的片段插入到pCAMBIA1303载体中,成功构建了植物表达载体。再通过电转法将重组表达载体导入农杆菌LBA4404中,为进一步的Lslis转化植物中的遗传表达研究奠定良好的基础。

关键词：阔叶薰衣草芳樟醇合成酶基因克隆序列分析载体构建

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阔叶薰衣草叶片总RNA两种提取法的比较

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热带农业科学 2011年第8期31卷 55-58页

作者：赵钟鑫王健李琴龚萍海南大学园艺园林学院海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室海南儋州571737

分别采用TRIzol法和改良的CTAB法提取阔叶薰衣草叶片的RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对其提取效果进行鉴定。实验结果表明:TRIzol法提取的总RNA浓度高,但杂质较多且有部分降解、稳定性差;改良的CTAB法提取得到的总RNA的纯度较高,OD2... 详细信息

分别采用TRIzol法和改良的CTAB法提取阔叶薰衣草叶片的RNA,并用紫外光谱和琼脂糖凝胶电泳对其提取效果进行鉴定。实验结果表明:TRIzol法提取的总RNA浓度高,但杂质较多且有部分降解、稳定性差;改良的CTAB法提取得到的总RNA的纯度较高,OD260/OD280值为1.909,效果稳定,有良好的可重复性。因此,改良的CTAB法是一种较为简便、经济的提取阔叶薰衣草叶片总RNA的方法。

关键词：阔叶薰衣草改良CTAB TRIzol法 RNA抽提比较

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