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间歇缺氧对心肌的损害及TLR-4在心肌中的表达

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间歇缺氧对心肌的损害及TLR-4在心肌中的表达

作者：黄丽华兰州大学

学位级别：硕士

目的慢性间歇性缺氧是阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）的主要病理生理特征,亦是OSAHS导致人体多系统长期慢性炎症性反应的重要原因。Toll样受体-4（Toll-like receptor-4,TLR-4）... 详细信息

目的慢性间歇性缺氧是阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）的主要病理生理特征,亦是OSAHS导致人体多系统长期慢性炎症性反应的重要原因。Toll样受体-4（Toll-like receptor-4,TLR-4）是参与非特异性免疫的一类重要蛋白质分子,在人体炎症反应中起重要作用。本实验通过建立大鼠间歇缺氧模型模拟OSAHS的发生过程,研究间歇缺氧对心肌损伤的作用,并探讨TLR-4在间歇缺氧大鼠心肌组织中的表达及其临床意义,从而为临床上预防及治疗OSAHS相关心血管疾病提供新的诊疗依据和研究思路。方法将32只健康雄性Wistar大鼠随机平均分成4组,分别为1.正常对照组:即常氧环境,大鼠可自由活动;2.轻度缺氧组:放置于间歇性低氧舱中,造成氧浓度为15%的间歇性低氧模型;3.中度缺氧组:放置于间歇性低氧舱中,造氧浓度为9%的间歇性低氧模型;4.重度缺氧组:放置于间歇性低氧舱中,造成氧浓度为6%的间歇性低氧模型。每日造模时间为8小时,连续造模5周后处死大鼠,取大鼠心脏组织,苏木精-伊红染色后在电子显微镜下观察心脏组织形态学改变,利用免疫组化法观察TLR-4在不同程度间歇缺氧大鼠心脏组织中的表达。结果1.大鼠心脏组织HE染色后在电子显微镜下可见相较于空白组大鼠心肌组织,轻度缺氧组大鼠出现了部分心肌组织走行紊乱,但细胞核大小及排列仍较为规则。中度缺氧组大鼠心肌组织呈“波浪形”排列,细胞核大小不一,排列较为紊乱,心肌间隙明显增大。重度缺氧组大鼠心肌排列较中度缺氧组更不规则,心肌间隙增大,部分心肌断裂,部分心肌细胞变性、坏死。2.大鼠心脏组织免疫组化染色后于光镜下观察可见,TLR-4在正常心脏组织巨噬细胞膜及细胞质上有少量表达。在间歇缺氧组大鼠的心脏组织中除巨噬细胞外,可见TLR-4阳性信号于心肌细胞细胞质中及细胞膜表面均有表达,颜色多呈棕黄色或者棕褐色。图像分析结果提示,与空白对照组相比,轻度缺氧组、中度缺氧组、重度缺氧组TLR-4表达水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论1.本实验说明间歇缺氧环境下大鼠心肌受到了损伤,并且随着间歇缺氧程度的加重,心肌损伤的程度也随着加重;2.大鼠心肌中TLR-4随着间歇缺氧程度的加重表达程度增高,TLR-4介导的炎症信号通路可能进一步导致心肌的损伤;3.通过本实验,我们期望为TLR-4作为OSAHS相关心血管疾病预防及治疗的一个有价值的靶点提供一定的参考依据。

关键词：间歇缺氧睡眠呼吸暂停 TLR-4 心肌损害

间歇缺氧大鼠模型的实验研究研究一：氧化应激、炎症反应的机制研究研究二：对甲状腺的相关影响

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间歇缺氧大鼠模型的实验研究研究一：氧化应激、炎症反应的机制...

作者：徐鹏兰州大学

学位级别：硕士

目的通过模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者睡眠过程中反复发生的间歇低氧／再氧合过程,建立间歇缺氧模型,探讨间歇缺氧大鼠体内氧化应激、炎症反应的机制。方法将16只雄性SD大鼠进行称重后,随机分为两组,间歇缺氧(IH)组... 详细信息

目的通过模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者睡眠过程中反复发生的间歇低氧／再氧合过程,建立间歇缺氧模型,探讨间歇缺氧大鼠体内氧化应激、炎症反应的机制。方法将16只雄性SD大鼠进行称重后,随机分为两组,间歇缺氧(IH)组和对照(NC)组,每组8只,将其放入间歇缺氧模拟舱内,向舱内循环充入氮气、氧气和压缩空气,循环周期为120s,输入纯氮气30秒(模拟舱中氧浓度逐渐下降至6-7%),静息10秒(模拟舱中氧浓度维持在6-7%),输入纯氧气20秒(模拟舱中氧浓度逐渐上升至20-21%),输入压缩空气60秒(模拟舱中氧浓度波动在20.8±0.3%)。实验时间设计为每天8小时(9am-17pm),每周7天,持续4周,共28天。将对照组大鼠于每天相同时间置于相同规格的动物饲养舱内,并通入相同流量的空气。第29天处死大鼠后,用生化法测定大鼠血清MDA. ***-PX水平,用放免法测定大鼠血清IL-6和TNF-a水平。结果1.血清MDA水平：正常对照组为5.09±0.51nmol/ml,IH组为5.74±0.38nmol/ml。与对照组比较,IH组大鼠血清MDA水平升高,且具有统计学差异(P=0.011间歇缺氧条件下能导致大鼠血清MDA水平升高,而血清SOD和GSH水平降低,提示间歇缺氧大鼠体内存在氧化应激状态,间歇缺氧可以导致大鼠体内抗氧化能力的下降;2.间歇缺氧条件下能导致大鼠血清TNF-a和IL-6水平升高,提示间歇缺氧大鼠体内存在炎症反应。目的通过模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者睡眠过程中反复发生的间歇低氧／再氧合过程,建立间歇缺氧模型,探讨间歇缺氧对大鼠甲状腺激素、甲状腺超微结构及对大鼠甲状腺Peroxiredoxin5表达的影响。方法将16只雄性SD大鼠进行称重后,随机分为两组,间歇缺氧(IH)组和对照(NC)组,每组8只,将其放入间歇缺氧模拟舱内,向舱内循环充入氮气、氧气和压缩空气,循环周期为120s,输入纯氮气30秒(模拟舱中氧浓度逐渐下降至6-7%),静息10秒(模拟舱中氧浓度维持在6-7%),输入纯氧气20秒(模拟舱中氧浓度逐渐上升至20-21%),输入压缩空气60秒(模拟舱中氧浓度波动在20.8±0.3%)。实验时间设计为每天8小时(9am-17pm),每周7天,持续4周,共28天。将对照组大鼠于每天相同时间置于相同规格的动物饲养舱内,并通入相同流量的空气。第29天处死大鼠后,用放免法测定大鼠血清FT3、FT4、TSH水平,于电镜下观察大鼠甲状腺超微结构的改变,用免疫组化方法测定大鼠甲状腺中Peroxiredoxin5表达。结果1.血清FT3水平：正常对照组为0.40±0.17ng/dl,IH组为0.46±0.19ng/dl。与对照组比较,IH组大鼠血清FT3水平升高,但不具有统计学差异(P=0.521>0.05)。2.血清FT4水平：正常对照组为4.20±0.92ng/dl,IH组2.98±0.64ng/dl。与对照组相比,IH组大鼠血清FT4水平降低,且具有统计学差异(P=0.009缺氧改变。5.甲状腺PRDX5的阳性染色主要位于甲状腺细胞的胞浆中,大鼠甲状腺Peroxiredoxin5表达：正常对照组的平均光密度为0.22±0.01,CIH组的平均光密度为0.30±0.01。与对照组比较,IH组大鼠甲状腺Peroxiredoxin5表达升高且差异具有统计学意义(P=0.00

关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征间歇缺氧氧化应激炎症反应丙二醛超氧化物歧化酶谷胱甘肽过氧化物酶白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征间歇缺氧氧化应激炎症反应甲状腺激素甲状腺 Peroxiredoxin5

细胞焦亡介导慢性间歇缺氧大鼠肾脏损伤及依达拉奉的干预作用

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中国临床药理学与治疗学 2023年第1期28卷 10-18页

作者：杨治安赵岩何瑶刘维英余勤甘肃省人民医院呼吸与危重症医学科干部病区甘肃兰州730000 兰州大学第一临床医学院甘肃兰州730000 兰州大学第一医院呼吸与危重症医学科甘肃兰州730000

目的:探究依达拉奉对慢性间歇缺氧导致大鼠肾脏损伤的保护作用及其对Caspase-1介导的细胞焦亡信号通路的影响。方法:24只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、间歇缺氧(IH)组、间歇缺氧+生理盐水(IH+NS)组、间歇缺氧+依达拉奉(IH+E... 详细信息

目的:探究依达拉奉对慢性间歇缺氧导致大鼠肾脏损伤的保护作用及其对Caspase-1介导的细胞焦亡信号通路的影响。方法:24只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、间歇缺氧(IH)组、间歇缺氧+生理盐水(IH+NS)组、间歇缺氧+依达拉奉(IH+EDA)组,每组6只。将4组大鼠放置在密闭式饲养舱内造模,NC组舱内氧气浓度维持在21%左右,IH组、IH+NS组、IH+EDA组定时输入纯氧气、纯氮气、压缩空气,使舱内形成缺氧-复氧循环(60 s低氧期+60 s复氧期),低氧期舱内氧浓度降至6%~7%,每日造模8 h(10∶00-18∶00),同时IH+EDA组大鼠每天造模前按照5 mg/kg剂量标准予以腹腔注射依达拉奉,IH+NS组大鼠按照同等剂量标准腹腔注射生理盐水。造模8周后采集大鼠血液标本及肾脏组织标本,测定各组大鼠血肌酐(Crea)、尿素(Urea)水平;HE、Masson染色后光镜下观察肾脏病理形态变化、纤维化程度;化学法测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力;免疫组织化学染色法测定肾组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;Western blot法测定肾组织Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平;RT-PCR法测定消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-18 mRNA扩增水平。结果:间歇缺氧暴露后,大鼠血清Crea、Urea明显升高(P间歇低氧暴露后相反的变化趋势,肾脏病理损害减轻(P间歇缺氧可能通过氧化应激活化Caspase-1参与的细胞焦亡信号通路介导肾脏损伤过程,而依达拉奉可能通过清除氧自由基、下调机体氧化应激水平,抑制焦亡通路的活化,起到保护肾脏的作用。

关键词：间歇缺氧肾脏损伤细胞焦亡氧化应激依达拉奉

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幼年间歇缺氧大鼠肝脏中IGF-1及IGFBP-3基因表达的研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2016年第6期30卷 478-481页

作者：闫静高天喜祝康夏翠侯瑾西安交通大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科病院西安710004

目的:利用幼年间歇缺氧大鼠模型,研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在肝脏中的表达,试图为OSAHS患儿可能存在的生长发育迟缓提供客观依据。方法:将24只大鼠随机分为3组,即对照组及轻、重度低氧组,对... 详细信息

目的:利用幼年间歇缺氧大鼠模型,研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在肝脏中的表达,试图为OSAHS患儿可能存在的生长发育迟缓提供客观依据。方法:将24只大鼠随机分为3组,即对照组及轻、重度低氧组,对照组正常喂养,不加处理,将其他2组分别饲养于已模拟符合儿童OSAHS轻、重度条件的间歇缺氧箱内。每天循环间歇缺氧8h,共35d。至实验最后1d,处死取新鲜肝脏组织于液态氮固定,并置于-80℃冰箱冻存,进行IGF-1及IGFBP-3的分子生物学实验。结果:肝脏中IGF-1的mRNA表达半定量分析显示,3组之间差异有统计学意义(P缺氧组高于对照组及重度缺氧组,差异有统计学意义(均P缺氧组差异无统计学意义(P>0.05)。IGFBP-3的mRNA表达半定量分析显示,3组之间差异无统计学意义(P>0.05)。IGF-1在肝脏组织中表达量分析显示,3组之间差异有统计学意义(P缺氧组及重度缺氧组,差异有统计学意义(P缺氧组与重度缺氧组差异无统计学意义(P>0.05)。IGFBP-3在肝脏中的表达量,3组之间差异有统计学意义(P缺氧组及重度缺氧组,差异有统计学意义(P缺氧组与重度缺氧组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:轻度缺氧组、重度缺氧组及对照组间IGF-1及IGFBP-3在肝脏中的转录与翻译水平与缺氧严重程度无明显关系。

关键词：间歇缺氧幼年大鼠胰岛素样生长因子-1 胰岛素样生长因子结合蛋白-3

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正常氧干预对不同程度间歇缺氧大鼠脑组织损伤影响的研究

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正常氧干预对不同程度间歇缺氧大鼠脑组织损伤影响的研究

作者：王林复旦大学

学位级别：硕士

研究目的通过建立不同程度的间歇缺氧动物模型,模拟不同程度睡眠呼吸暂停低通气综合征(SAHS)患者的缺氧状态,研究不同程度间歇缺氧对大鼠脑细胞凋亡发生发展的意义;对缺氧动物模型实施21%氧干预后,观察其对脑组织病理变化的影响,加深对S... 详细信息

研究目的通过建立不同程度的间歇缺氧动物模型,模拟不同程度睡眠呼吸暂停低通气综合征(SAHS)患者的缺氧状态,研究不同程度间歇缺氧对大鼠脑细胞凋亡发生发展的意义;对缺氧动物模型实施21%氧干预后,观察其对脑组织病理变化的影响,加深对SAHS的认识,为早期干预SAHS病情的发生与发展提供科学依据;观察对间歇缺氧进行21%氧干预后,大鼠脑内HIF-1, iNOS表达的变化,探讨二者在间歇缺氧神经细胞凋亡中的作用,同时阐明这一变化对评估缺血性脑血管疾病的治疗价值的意义。材料与方法健康SD大鼠42只,适应性饲养1周。实验起始阶段：42只中随机选取6只作为0周的参考值(A组)。剩余36只大鼠随机分为三组,对照组(n=12);轻度间歇缺氧组(n=12,相当于轻度OSAS, AHI=15);重度间歇缺氧组(n=12,相当于重度OSAS, AHI=40),各组以普通饲料、普通饮水饲养60天。每日9：00至16：00时将各组大鼠置于各实验箱中,共7h,16:00后使大鼠生活于大气环境中。各组在试验30天后随机取6只大鼠(BN组,BQ组,BZ组),予以取脑、原位细胞凋亡检测(TUNEL)、电镜检查,应用免疫组化,Western Blot对脑内HIF-1α, iNOS进行蛋白水平的检测。各组剩余大鼠(CN组,CQ组,CZ组)予以正常氧环境下继续饲养,30天后行上述相同检查。结果应用SPSS17.0软件进行统计分析。结果1.神经细胞形态学变化：1.1HE染色光学显微镜下,神经细胞核呈蓝黑色,胞浆呈淡红色。A组,BN组SD大鼠海马区可见数层锥体神经元,细胞形态规则;BQ, BZ各组中,从形态学观察有不同程度的改变,海马区锥体神经元出现核固缩、胞质浓缩、细胞体急剧变小等现象,以此判断可能有细胞凋亡的发生。经过21%氧干预30天后,试验结果发现：干预组(CQ, CZ组)神经细胞凋亡情况有所好转,但部分神经元细胞仍有排列不规则,形态改变的情况,未能恢复至初始水平。1.2透视电镜检查发现：经过30天间歇缺氧,间歇缺氧组的脑组织病理较正常氧组有显著变化,且重度间歇缺氧组较轻度间歇缺氧组改变更为明显,表现为大鼠脑组织神经细胞核双层膜结构破坏,部分线粒体水肿扩张,细胞质中可见空泡。经过21%氧干预30天后,干预组神经细胞凋亡情况有所好转,但部分神经细胞仍有细胞形态的变化,未能恢复至初始水平。1.3TUNEL实验显示：对照组(A组,BN组)SD大鼠海马区可见神经细胞形态规则,排列整齐紧密;缺氧组(BQ, BZ)中,被染成棕黄色或棕褐色凋亡细胞增多,以重度间歇缺氧组增多最为明显(14.83±2.48VS18.67±2.66VS32.67±4.18VS49.17±4.36)。间歇缺氧组(BQ, BZ组)明显高于对照组(A,BN组),差异有统计学意义(P间歇缺氧组和重度间歇缺氧组之间两两比较差异有统计学意义(P间歇缺氧干预组(CQ, CZ组)神经细胞凋亡情况有所好转(24.00±3.90VS31.67±2.50),但未能恢复至初始水平。间歇缺氧干预组(CQ, CZ组)高于对照组(A, BN, CN组),差异有统计学意义(P缺氧组(BQ, BZ组)之间比较差异有统计学意义(P间歇缺氧组还是重度间歇缺氧组均可见较多的着色细胞(37.01±4.0473,53.34±8.0801)。间歇缺氧组(BQ, BZ组)明显高于对照组(A, BN组),差异有统计学意义(P间歇缺氧组和重度间歇缺氧组之间两两比较差异有统计学意义(P间歇缺氧组(BQ,BZ组)比较差异有统计学意义,和对照组(A, BN, CN组)比较差异无统计学意义(P>0.05)。iNOS阳性染色细胞主要集中在大脑皮层及海马区,不仅见于神经元,神经胶质细胞中亦有表达。WestemBlot检测结果显示：缺氧后,实验组(BQ, BZ组)iNOS较对照组(A,BN组)表达增多,以慢性重度间歇缺氧组最为明显(140.01±1.7147VS151.52±19.9948VS376.52±38.9234VS585.17±35.1067)。间歇缺氧组(BQ, BZ组)明显高于对照组(

关键词：睡眠呼吸暂停低通气综合症间歇缺氧凋亡 iNOS HIF-1α 氧化应激缺氧干预

细胞焦亡介导慢性间歇缺氧大鼠肾损伤及依达拉奉的干预作用

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细胞焦亡介导慢性间歇缺氧大鼠肾损伤及依达拉奉的干预作用

作者：杨治安兰州大学

学位级别：硕士

目的:睡眠呼吸暂停低通气综合征引起多系统多器官的损害严重威胁人类的身心健康。通过制作慢性间歇缺氧SD大鼠模型,模拟OSAHS患者夜间睡眠过程中反复缺氧的内环境,探索慢性间歇缺氧导致大鼠肾脏损伤过程中是否有细胞焦亡的参与,同时将... 详细信息

目的:睡眠呼吸暂停低通气综合征引起多系统多器官的损害严重威胁人类的身心健康。通过制作慢性间歇缺氧SD大鼠模型,模拟OSAHS患者夜间睡眠过程中反复缺氧的内环境,探索慢性间歇缺氧导致大鼠肾脏损伤过程中是否有细胞焦亡的参与,同时将依达拉奉作为干预保护因素,探究其是否具有通过阻断或抑制细胞焦亡通路进而减轻肾脏损伤的作用,为预防和治疗OSAHS的全身性损害提供一种新的方案。方法:24只SPF级雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为正常对照组(NC组)、间歇缺氧组(IH组)、间歇缺氧+生理盐水组(IH+NS组)、间歇缺氧+依达拉奉组(IH+EDA组),每组各6只。将IH组、IH+NS组、IH+EDA组大鼠置于间歇缺氧舱内饲养造模,每日持续8小时,同时IH+EDA组大鼠于每日造模前按照5 mg/kg剂量标准予以腹腔注射依达拉奉注射液,IH+NS组大鼠按照同等剂量标准予以腹腔注射生理盐水形成相互对照,共计8周。造模结束后,测定大鼠血肌酐(Crea)、尿素(Urea)水平,HE染色法观察镜下肾脏病理形态变化,Masson染色法观察肾脏纤维化程度,化学法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,免疫组化法检测焦亡通路相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平,蛋白免疫印迹法检测Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法测定肾脏组织中GSDMD、IL-18 m RNA表达倍数,后利用统计学软件SPSS Statistics 25.0对实验数据进行统计分析。结果:(1)间歇缺氧组、间歇缺氧+生理盐水组血清肌酐(Crea)、尿素(Urea)水平较正常对照组明显升高(P间歇缺氧+依达拉奉组中两者水平较间歇缺氧组有所降低(P间歇缺氧组、间歇缺氧+生理盐水组肾小管管腔出现扭曲并镜下结构发生紊乱、个别管腔出现狭窄甚至闭塞,肾小球/肾小囊球囊间隙出现胶原纤维沉积,而间歇缺氧+依达拉奉组镜下观察肾小管病理损害程度有所减轻,但纤维化程度改善不明显;(3)间歇缺氧组、间歇缺氧+生理盐水组肾组织MDA含量较正常对照组明显增加(P间歇缺氧+依达拉奉组MDA含量较间歇缺氧组有所降低(P间歇缺氧暴露造成体内氧化/抗氧化平衡的紊乱;(4)间歇缺氧组、间歇缺氧+生理盐水组肾组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达、GSDMD m RNA及IL-18 m RNA表达倍数较正常对照组均明显增加(P间歇缺氧+依达拉奉组中以上指标较间歇缺氧组有所降低(P间歇缺氧刺激会造成肾脏组织发生形态学病理损伤并纤维化,肾功能受到一定程度损害;(2)慢性间歇缺氧可通过氧化应激来活化NLRP3/Caspase-1/GSDMD/IL-1β细胞焦亡经典信号通路介导肾脏损伤过程;(3)依达拉奉可能通过清除氧自由基、下调机体氧化应激水平抑制细胞焦亡经典信号通路,控制级联放大炎症反应,减轻肾脏损伤程度。

关键词：间歇缺氧肾脏损伤细胞焦亡氧化应激依达拉奉

丙泊酚对间歇缺氧内皮细胞NF-KB激活及HIF-1α mRNA表达作用研究

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丙泊酚对间歇缺氧内皮细胞NF-KB激活及HIF-1α mRNA表达作用研究

作者：王惠山东大学

学位级别：硕士

研究背景：反复低氧再氧合导致的氧化应激和炎症反应引起血管内皮损伤是阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAHS）引起心脑血管疾病的主要原因之一。丙泊酚作为一种临床上常用的静脉麻醉药物,同时具有独特的抑制氧自由基生成,清除自由基... 详细信息

研究背景：反复低氧再氧合导致的氧化应激和炎症反应引起血管内皮损伤是阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAHS）引起心脑血管疾病的主要原因之一。丙泊酚作为一种临床上常用的静脉麻醉药物,同时具有独特的抑制氧自由基生成,清除自由基的功能。经证实对手术中缺血再灌注的脏器具有保护作用,且在一定范围内,随浓度的增加抑制炎症反应的强度越大。但国内外关于丙泊酚对间歇缺氧细胞的保护作用研究较少,目前认为缺氧再氧合与缺血再灌注的病理生理过程有相似之处。由此我们推测：丙泊酚对缺氧再氧合的细胞亦有一定保护作用,且不同浓度丙泊酚抑制炎症反应的程度有差异。目的：探讨不同浓度的丙泊酚对间歇缺氧处理的脐静脉内皮细胞（eahy926）中HIF-1a mRNA表达及NF-KB分子激活的影响,据此,推测丙泊酚对OSAHS患者心血管系统的保护作用及其机制。研究方法：人脐静脉内皮细胞（eahy926细胞株）间歇低氧（IH）/再氧合（ROX）气体环境模型为实验组,自然环境状态下培养的脐静脉内皮细胞（eahy926细胞系）作为对照组,低氧再氧合组根据丙泊酚浓度不同分为3组：T1（未用丙泊酚组）,T2（丙泊酚浓度3ug/ml）,T3（丙泊酚浓度6ug/ml/）,对照组亦根据丙泊酚浓度不同分为3组：N1（未用丙泊酚组）,N2（丙泊酚浓度3ug/ml）,N3（丙泊酚浓度6ug/ml/）。各组分别重复6次。用Western blot进行核内NF-kB半定量分析,Real-time PCR对HIF-1a表达进行基因水平定量分析。研究结果： 1. western-blot:间歇低氧组中T1组细胞核内的NF-kB的灰度比值（NF-KB灰度值/TBP灰度值）明显高于对照组N1组,差异有统计学意义（p＜0.01）。间歇低氧组中T2、T3组NF-KB的灰度比值低于T1组,其中T3组明显低于T1组（p＜0.01）;.N1、N2、N3各组NF-KB灰度比值,无显著性差异。 2. Real-time PCR:间歇低氧组的T1组HIF-1a mRNA的表达量即HIF-1amRNA的CP比值（HIF-1aCP值/内参CP值）明显高于对照组的N1组的HIF-1amRNA的CP比值（p＜0.01）,T1、T2、T3组HIF-1a mRNA的CP比值依次递减,T2组低于T1组（p＜0.05）,T3组明显低于T1组（P＜0.01）。N1、N2、N3组之间HIF-1amRNA的CP比值无显著性差异。结论：丙泊酚对处于间歇缺氧的脐静脉内皮细胞具有保护作用,其作用机制部分是通过抑制NF-kB激活和HIF-1a mRNA表达,而且在一定范围内,随浓度的升高对细胞保护作用增强。

关键词：间歇缺氧脐静脉内皮细胞 NF-KB HIF-1amRNA 丙泊酚

RAGE在间歇缺氧致动脉粥样硬化作用中的体外研究

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RAGE在间歇缺氧致动脉粥样硬化作用中的体外研究

作者：周娜南昌大学

学位级别：硕士

背景和目的:阻塞性呼吸睡眠暂停低通气综合征(OSAHS)的主要临床特征是睡眠状态下的间歇缺氧(IH),也是导致包括动脉粥样硬化在内的很多心血管疾病的独立危险因素。在临床观察中发现OSAHS病人外周血单核细胞RAGE含量明显高于正常人,持续... 详细信息

背景和目的:阻塞性呼吸睡眠暂停低通气综合征(OSAHS)的主要临床特征是睡眠状态下的间歇缺氧(IH),也是导致包括动脉粥样硬化在内的很多心血管疾病的独立危险因素。在临床观察中发现OSAHS病人外周血单核细胞RAGE含量明显高于正常人,持续正压通气治疗能减少病人外周血单核细胞RAGE表达。OSAHS致动脉粥样硬化的具体发病机制尚不明确。目前研究表明RAGE/AGEs配体系统在动脉粥样硬化的发生发展中起到了重要的作用。为了探讨RAGE/AGEs在OSAHS致动脉粥样硬化中的作用,本实验拟使用THP-1(人单核细胞白血病细胞)模拟IH导致动脉粥样硬化的体外细胞模型,使用RNA干扰法沉默THP-1细胞的RAGE基因表达,检测其对IH条件下的THP-1细胞单核细胞趋化、巨噬细胞转化、泡沫细胞细胞形成等的影响。方法:1.首先检测THP-1细胞在IH 0h、12h、24h、48h后RAGE、NF-kB p65、AGEs表达量。2.然后使用靶向RAGE的shRNA构建的慢病毒转染THP-1细胞,并筛选出沉默RAGE效率最高的稳定细胞株用于后续实验。实验分为四组:空白对照组:正常培养;实验对照组A:RAGE(-/-)+正常培养;实验对照组B:IH培养。D:实验组:RAGE(-/-)+IH培养。***-1细胞及沉默RAGE的THP-1细胞按上述分组处理,24小时后比较四实验组间单核细胞聚集指标MCP-1、CCR2,巨噬细胞转化指标CD14、CD68表达量差异。***-1细胞及沉默RAGE的THP-1细胞经PMA(100ng/ml)诱导分化为巨噬细胞,诱导分化所得THP-1细胞源性巨噬细胞按上述实验分组,并在培养基中加入终浓度为50ug/ml ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫细胞化,24小时后油红O染色评估四组间泡沫细胞形成差异。结果:***处理后,THP-1细胞RAGE、NF-kB p65表达经WB验证在一定范围内随时间呈递增趋势,RAGE在IH后24小时表达量达高峰(RAGE/GAPDH 1.043±0.10),并可持续至IH 48小时(RAGE/GAPDH 1.289±0.18,P<0.05),NF-k B p65在IH 12小时后表达量达高峰(NF-kB p65/GAPDH 0.30±0.04,P<0.05),可持续至IH 24小时(NF-k B p65/GAPDH 0.32±0.03,P<0.05),并于IH后48小时(NF-kB p65/GAPDH 0.21±0.03,P<0.05)开始降低。上清液中AGEs48小时内表达量随IH时间的增加而增加(P<0.05)。2.单核细胞趋化指标MCP-1、CCR2,与空白对照组相比,IH培养组THP-1细胞MCP-1、CCR2表达量增加(P<0.05);与IH培养比较,RAGE(-/-)+IH培养组THP-1细胞MCP-1、CCR2表达量减少(P<0.05)。3.巨噬细胞分化指标CD14、CD68,与空白对照组相比,IH培养组THP-1细胞CD14、CD68表达量增加(P<0.05);与IH培养比较,RAGE(-/-)+IH培养组THP-1细胞CD14、CD68表达量减少(P<0.05)。4、IH可以促进巨噬细胞泡沫细胞生成,沉默RAGE基因可以抑制IH导致的巨噬细胞泡沫化。结论:***-1细胞RAGE、NF-kB p65、AGEs的表达量在一定时间范围内随IH时间的增加而增加。***可以促进IH导致的THP-1细胞单核细胞趋化、巨噬细胞分化以及泡沫细胞生成。

关键词： THP-1 慢病毒间歇缺氧 RAGE

间歇缺氧小鼠血清一氧化氮水平变化趋势的研究

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中国心血管病研究 2019年第11期17卷 1028-1031页

作者：路申潞王瑞英牛雅琼彭智柯熊上郑晓斌葛婕丽罗宏山西医科大学第二临床医学院山西省太原市030000 山西医科大学第二临床医学院心血管内科山西省太原市030000 太原市第八人民医院神经内科太原市医学会呼吸内科

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目的观察慢性间歇缺氧(CIH)小鼠一氧化氮(NO)水平的变化趋势.方法将12只11周龄雄性小鼠随机等分为两组,CIH组以间歇缺氧饲养,对照组(UC)以常氧饲养,分别于第2、6、9周抽血,采用ELISA法检测小鼠NO水平.结果①CIH组与UC组比较:第2、6周CIH组小鼠NO水平均明显低于UC组[分别为(1.3±0.59)μmol/L比(3.34±0.92)μmol/L,(3.9±0.83)μmol/L比(7.11±1.68)μmol/L],差异有统计学意义(t=3.67,P0.05).②CIH组间比较:第6周NO水平明显高于第2周,差异有统计学意义(P间歇缺氧过程中NO水平明显均低于对照组,至血管内皮保护功能下降;②间歇缺氧第2周出现NO水平降低,早期即可导致血管内皮保护功能下降;③两组第6周小鼠血清NO水平均明显高于第2周,第9周小鼠血清NO水平均明显低于第6周,可能衰老及炎症反应[诱导性一氧化氮合酶(iNOS)]参与调控血管内皮的保护作用;④CIH组第6周NO水平代偿性升高,第9周失代偿下降,建议OSA治疗时机选择最好在间歇缺氧6周前.

关键词：间歇缺氧一氧化氮:诱导性一氧化氮合酶

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