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黑龙江畜牧兽医 1998年第10期 1-2页

作者：孙刚李英霞邢文洁张永国朱琪林洪强潘兴广武文杰史丽荣黑龙江省兽医卫生防疫站哈尔滨国营农场管理局兽医卫生防疫站

应用间接酶联免疫吸附试验对来自哈尔滨市Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４个种禽场鸡群１８４份血清进行了鸡传染性鼻炎血清学调查，共检出阳性血清３３份，血清阳性率达１７．９％。４个种禽场都检出血清阳性，说明鸡传染性鼻炎在哈尔滨市感染率较高。

关键词：鸡病传染性鼻炎抗体间接酶联免疫吸附试验

食品中残留19-去甲睾酮免疫原的合成与鉴定

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食品科学 2006年第5期27卷 195-198页

作者：余德河胥传来彭池方王武康郭金花金征宇江南大学食品学院江苏无锡214036

19-去甲睾酮(19-nortestosteroneNT),属于半抗原生物小分子,具有免疫反应性,但不具有免疫原性。本文中19-去甲睾酮经羧甲基羟胺肟化,质谱(MS)检验后,采用混合酸酐法将肟化产物与牛血清蛋白(bovineserumalbuminBSA)偶联,紫外分光光度法... 详细信息

19-去甲睾酮(19-nortestosteroneNT),属于半抗原生物小分子,具有免疫反应性,但不具有免疫原性。本文中19-去甲睾酮经羧甲基羟胺肟化,质谱(MS)检验后,采用混合酸酐法将肟化产物与牛血清蛋白(bovineserumalbuminBSA)偶联,紫外分光光度法测定其交联率为24。用此合成产物进行动物体免疫,获得了NT的多克隆抗体。经间接酶联免疫测定,其抗血清的稀释度可以达到1:102400,证明诺龙免疫原的合成成功,为诺龙酶联免疫试剂盒的研究奠定基础。

关键词： 19-去甲睾酮(NT) 混合酸酐法多克隆抗体间接酶联免疫免疫原

油菜根肿孢子（Plasmodiophora brassicae）免疫检测方法的初步构建

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油菜根肿孢子（Plasmodiophora brassicae）免疫检测方法的初步构...

作者：邓洁四川大学

学位级别：硕士

根肿菌是世界范围内流传的一种危害严重的植物致病菌，其感染的宿主不仅十字花科植物如油料作物(油菜)，蔬菜类作物(花椰菜、甘蓝、白菜等)，还能够感染一些十字花科的野生植物等。休眠孢子在大田存留6—20y仍难杀灭，传播方式多样，可... 详细信息

根肿菌是世界范围内流传的一种危害严重的植物致病菌，其感染的宿主不仅十字花科植物如油料作物(油菜)，蔬菜类作物(花椰菜、甘蓝、白菜等)，还能够感染一些十字花科的野生植物等。休眠孢子在大田存留6—20y仍难杀灭，传播方式多样，可导致十字花科蔬菜的大面积减产，危害粮食生产的安全。目前采用的防治方法不论是农田熏蒸消毒、化学杀灭，还是生物学防治都只是相对抑制或减少孢子数量，没有完全杀灭孢子作用，而采用与单子叶植物轮作可使孢子数量降低到不构成危害的程度，是一种有效的防治手段。另外，根肿菌是一种专性寄生菌，其菌体很难进行离体培养和人工驯化，这就给研究造成一定的难度。所以寻求一种简单易行的快速检测手段，不仅可对现在的十字花科蔬菜种植区进行根肿病发病率进行普查，而且可为农民的耕作方式提出指导，通过适当的轮作达到防治根肿病的目的，具有十分重要的理论和应用价值。本文从四川双流县蔬菜种植基地，感染根肿菌的油菜等十字花科作物中分离、提纯孢子，探索了根肿孢子侵染粘附过程中的影响因素以及用ELISA方法初步摸索了检测土壤或者病根组织孢子浓度的方法，主要研究内容及结果如下： 1 优化了密度梯度离心提纯孢子的方法，应用检测杂菌含量方法检验提纯效果。优化的30/40/50/60％蔗糖浓度梯度配比密度梯度离心方法得到孢子效果最好，所得孢子层纯度较高，但得率低：30％/60％和30％/50％得率相对较高，但样品纯度差些。 2 首次结合超声波方法解决了孢子样品中杂菌污染和样品不均匀的问题。本实验采用了密度梯度与超声波相结合的方法有效的去除了孢子群表面絮状粘连，优化后的超声波处理孢子最佳的条件为345W

关键词：根肿休眠孢子十字花科间接酶联免疫超声波

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黄瓜中四种农药残留免疫检测方法的建立

黄瓜中四种农药残留免疫检测方法的建立

作者：陈子文江南大学

学位级别：硕士

农药一般分为杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂等。嘧霉胺、啶氧菌酯属于杀菌剂,异丙隆属于除草剂,赤霉素属于植物生长调节剂。它们常被施于农作物上用来防治病虫害或者调控植物生长。在实际农业生产中,不遵守休药期或过量使用,... 详细信息

农药一般分为杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂等。嘧霉胺、啶氧菌酯属于杀菌剂,异丙隆属于除草剂,赤霉素属于植物生长调节剂。它们常被施于农作物上用来防治病虫害或者调控植物生长。在实际农业生产中,不遵守休药期或过量使用,极易导致粮食和农产品中的农药残留,给人们的健康带来极大的危害。因此,开发现场、快速检测方法是指导农药规范使用的重要途径。间接竞争酶联免疫分析(ic-ELISA)和免疫层析试纸条分析(ICS)方法具有操作简单、成本低、灵敏度高、时间短等优点。本论文以嘧霉胺、啶氧菌酯、异丙隆、赤霉素四种农药为目标,成功开发了免疫快速检测方法,并应用于实际测定。首先,根据嘧霉胺、啶氧菌酯、异丙隆及赤霉素的结构特点,开展了结构改造,制备半抗原,再分别与载体蛋白偶联合成了各自的完全抗原,免疫小鼠,利用杂交瘤细胞技术,筛选获得了特异性的单克隆抗体。嘧霉胺抗体1E7、啶氧菌酯抗体3C2、异丙隆抗体3G9、赤霉素抗体4H11四种单克隆抗体的亲和常数分别为5.54×10 L/mol、2.42×10L/mol、4.49×10 L/mol、1.90×10 L/mol。对待测液的有机溶剂(甲醇含量)、pH和离子强度(NaCl含量)进行优化,在最优条件下,四种农药:嘧霉胺、啶氧菌酯、异丙隆、赤霉素的单克隆抗体的半数抑制浓度(IC)分别为4.00 ng/mL、0.10 ng/mL、1.94 ng/mL、71.48 ng/mL;线性范围(IC～IC)分别是1.20～15.53 ng/mL、0.04～0.25 ng/mL、0.46～8.19ng/mL、21.76～234.87 ng/mL。嘧霉胺1E7、啶氧菌酯3C2、异丙隆3G9与结构类似物交叉率小于5%。而赤霉素4H11与结构类似物赤霉素A1、赤霉素A3、赤霉素A4、赤霉素A7交叉率分别为:6.8%、5.8%、4.5%、3.5%。即四种单克隆抗体的交叉率均小于10%,特异性良好。以制备的单克隆抗体和完全抗原为基础,以黄瓜为检测基质,通过添加回收实验,评估ic-ELISA检测方法。在20.0 ng/g、40.0 ng/g、80.0 ng/g的添加水平下,嘧霉胺标准品回收率在96.6%～99.7%之间,变异系数在1.1%～1.8%之间;在0.5 ng/g、1.0 ng/g、2.0ng/g的添加水平下,啶氧菌酯标准品回收率在95.2%～98.5%之间,变异系数在1.5%～6.5%之间;在10.0 ng/g、20.0 ng/g、40.0 ng/g的添加水平下,异丙隆的标准品回收率在84.9%～97.4%之间,变异系数在1.5%～5.0%之间;在50.0 ng/g、100.0 ng/g、200.0 ng/g的添加水平下,赤霉素的标准品回收率在92.7%～99.9%之间,变异系数在3.3%～4.5%之间。进一步通过优化金标抗体浓度、喷膜抗原浓度等,分别研制了嘧霉胺、啶氧菌酯、异丙隆、赤霉素的免疫层析试纸条。实验结果表明,黄瓜样品中嘧霉胺、啶氧菌酯、异丙隆、赤霉素的消线值分别为50 ng/g,100 ng/g,25 ng/g,200 ng/g。综上,本论文成功建立了嘧霉胺、啶氧菌酯、异丙隆、赤霉素的酶联免疫检测方法和免疫层析试纸条分析方法,实现了农产品中四种农药残留的快速检测,满足实际需求。

关键词：农药残留单克隆抗体间接酶联免疫免疫层析试纸条

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去氢甲睾酮单克隆抗体的制备与鉴定

细胞与分子免疫学杂志 2011年第10期27卷 1103-1105页

作者：张勋董英王云徐燕江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013

目的:制备去氢甲睾酮(DMT)的单克隆抗体(mAb),为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础。方法:通过采用碳二亚胺法合成的完全抗原DMT-KLH免疫BALB/c小鼠,经过效价测定,ELISA方法建立,细胞融合、筛选和亚克隆,建立了去氢甲睾酮mAb杂... 详细信息

目的:制备去氢甲睾酮(DMT)的单克隆抗体(mAb),为采用免疫法分析食品中该激素的残留提供基础。方法:通过采用碳二亚胺法合成的完全抗原DMT-KLH免疫BALB/c小鼠,经过效价测定,ELISA方法建立,细胞融合、筛选和亚克隆,建立了去氢甲睾酮mAb杂交瘤细胞株,并采用ELISA方法测定mAb纯化后的效价、IC50、交叉反应率和抗体亲和力等参数,以及对猪肉样品中的DMT加标含量进行测定。结果:经过3次亚克隆成功建立1株分泌去氢甲睾酮mAb的杂交瘤细胞株,纯化后抗体的蛋白浓度为0.87mg/mL,效价为1∶32000,IC50值为7.57μg/L,亲和常数为3.09×109L/mol与丙酸睾酮酯、群勃龙的交叉反应率均小于1%,猪肉样品中平均加标回收率为97.73%。结论:成功筛选到分泌DMT mAb的杂交瘤细胞株,并对其产生的mAb的效价、IC50值、特异性、稳定性、IgG亚类和亲和力等特性进行了鉴定,为下一步开展DMT免疫学检测方法研究奠定了基础。

关键词：去氢甲睾酮碳二亚胺法间接酶联免疫单克隆抗体

汉坦病毒基因分型和应用重组抗原进行HFRS抗体快速检测的研究

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汉坦病毒基因分型和应用重组抗原进行HFRS抗体快速检测的研究

作者：吴守丽福建医科大学

学位级别：硕士

本研究使用RT-nested PCR分型检测方法及核苷酸序列测定技术,对来源于福建省内HFRS监测点的鼠肺标本及病人血清进行基因分型并对部分标本的核苷酸序列进行分析比较。RT-PCR分型检测结果显示:24份阳性鼠肺标本中检出率为95.8%;20份病人... 详细信息

本研究使用RT-nested PCR分型检测方法及核苷酸序列测定技术,对来源于福建省内HFRS监测点的鼠肺标本及病人血清进行基因分型并对部分标本的核苷酸序列进行分析比较。RT-PCR分型检测结果显示:24份阳性鼠肺标本中检出率为95.8%;20份病人血清标本中仅11份扩增阳性,检出率分别为:83%(≤1周),12.5%(>1周)。扩增阳性标本中仅1份RT-PCR分型为HTN型,其余均为SEO型,这与核苷酸序列分型结果相一致。表明近年福建省流行的汉坦病毒仍以SEO型为主。核酸序列比较分析发现,福建省内同一地区流行的SEO型汉坦病毒核苷酸的同源性很高,大于99%,而不同地区病毒间核酸序列变异比较大,尤其是永春和松溪这两个地区的毒株差异达到20%左右,可能是SEO型中两个新的亚型。在***中表达汉坦病毒A株NP重组抗原,采用电洗脱、亲和层析等方法纯化重组蛋白,纯化的重组蛋白e112直接包被聚乙烯96孔板,用于间接法ELISA检测HFRS患者血清中IgG抗体,与IFAT比较,其敏感性和特异性分别为94.7%、95.6%,适用于大规模的流行病学调查;或以胶体金标记重组抗原,运用金标快速免疫层析法可同时检测HFRS患者血清中IgM和IgG抗体,与IFAT/ELISA比较,其敏感性和特异性分别为97.9%、98.2%,具有简便、快速等优点,适用于各种层次尤其是基层医疗单位、农村卫生院等缺乏实验条件和专业人员的地方对HFRS疑似患者作出早期诊断。

关键词：汉坦病毒套式 PT-PCR 基因分型序列分析重组抗原间接酶联免疫吸附试验免疫层析法

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依诺沙星完全抗原的制备与抗体检测

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2012年第8期 112-113页

作者：赵银丽李洁胡晓星邓瑞广张改平河南工业大学生物工程学院郑州450001 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室郑州450002

依诺沙星（Enoxacin,ENX）是喹诺酮类抗生素,在人医和兽医临床广泛应用。依诺沙星在兽医临床的应用,导致其在动物组织中残留而影响食品安全。检测兽药残留的方法主要有色谱学方法和免疫学方法,试验首先合成依诺沙星的完全抗原,然后免疫... 详细信息

依诺沙星（Enoxacin,ENX）是喹诺酮类抗生素,在人医和兽医临床广泛应用。依诺沙星在兽医临床的应用,导致其在动物组织中残留而影响食品安全。检测兽药残留的方法主要有色谱学方法和免疫学方法,试验首先合成依诺沙星的完全抗原,然后免疫小鼠,用间接酶联免疫吸阳试验（ELISA）测定抗体,为下一步建立依诺沙星残留检测方法奠定基础。

关键词：依诺沙星抗体检测完全抗原喹诺酮类抗生素制备间接酶联免疫残留检测方法兽医临床

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莱克多巴胺残留检测方法研究进展

中国兽药杂志 2004年第11期38卷 44-47页

作者：于洪侠杨曙明中国农业科学院国家饲料质量监督检验中心北京100081

介绍了不同动物产品中莱克多巴胺残留检测方法的前处理方法及其差异;综述了色谱法的种类及其检测限、灵敏度、精密度,对其优缺点作了简单说明;着重对ELISA法的抗原合成方法及其对抗体质量的影响、抗体的特异性、与色谱法的相关性及检测... 详细信息

介绍了不同动物产品中莱克多巴胺残留检测方法的前处理方法及其差异;综述了色谱法的种类及其检测限、灵敏度、精密度,对其优缺点作了简单说明;着重对ELISA法的抗原合成方法及其对抗体质量的影响、抗体的特异性、与色谱法的相关性及检测质量等方面进行了较为详细的分析,并简单介绍了免疫传感器法.

关键词：莱克多巴胺兽药残留检测方法液相色谱法 ELISA 间接酶联免疫饲料添加剂

胜利油田702名采油作业工作人员麻疹抗体水平调查

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医学动物防制 2013年第12期29卷 1393-1394页

作者：肖太钦胜利油田疾病预防控制中心山东东营257000

目的查明胜利油田采油作业工作人员麻疹保护性抗体水平，为防治麻疹提供科学依据。方法随机抽取采油工作人员702名，采用间接酶联免疫法（ELISA）检测麻疹IgG抗体进行麻疹保护水平评价。结果702名调查对象中，具有人群保护水平的抗体为3... 详细信息

目的查明胜利油田采油作业工作人员麻疹保护性抗体水平，为防治麻疹提供科学依据。方法随机抽取采油工作人员702名，采用间接酶联免疫法（ELISA）检测麻疹IgG抗体进行麻疹保护水平评价。结果702名调查对象中，具有人群保护水平的抗体为36．9％，性别差异无统计学意义（X2=0．1，P〉0．05），不同年龄间差异有统计学意义（X2=16．61，P〈0．01）。明确免疫史人群与无免疫史或免疫史不详人群比较，抗体水平差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论人群保护性抗体水平较低，不能形成有效的保护屏障。因此，必须加强对人群的麻疹疫苗接种工作，尤其是20～30岁年龄组工人。

关键词：麻疹 IgG抗体抗体水平间接酶联免疫

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儿童幽门螺旋菌血清抗体的临床意义

黑龙江医学 1996年第4期20卷 20-21页

作者：姜连娣张伟芳夏秀红卢红光哈尔滨铁路中心医院哈尔滨铁路中心医院实验室哈尔滨市传染病院黑龙江省眼病防治研究所