检索结果-南通市图书馆

间接竞争elisa方法快速检测猪肉组织中的氯丙嗪

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南京农业大学学报 2020年第1期43卷 172-177页

作者：王敏王玮吕青骎徐幸莲周光宏李春保南京农业大学食品科技学院/国家肉品质量安全控制工程技术研究中心/农业农村部肉及肉制品质量监督检验测试中心(南京)

[目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno... 详细信息

[目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,elisa),同时优化检测条件并对该方法进行评价。[结果]采用自行制备的特异性鼠抗CPZ单克隆抗体,建立间接竞争elisa检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原包被稀释倍数为1∶10000,单克隆抗体浓度为1μg·mL-1,酶标二抗稀释倍数为1∶1000,最低检测限为0.51 ng·mL-1,线性检测范围为1.37~111.11 ng·mL^-1。线性回归直线方程为y=-1.2526x+2.8532,相关系数(R 2)为0.9866,总变异系数(CV)为6.97%,空白猪肉添加回收率为96.90%~118.79%。[结论]建立的间接竞争elisa方法特异性强,灵敏度、精密度、准确度和重现性良好,可用于猪肉组织中CPZ残留的快速检测。

关键词：氯丙嗪猪肉单克隆抗体间接竞争elisa 检测

鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白间接竞争elisa方法的建立及初步应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2023年第7期45卷 704-709,728页

作者：郭鹏宇赵妍刘胜旺中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室禽呼吸道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争elisa方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检... 详细信息

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争elisa方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检测纯化的rg G (P-rg G)与本研究室制备的g G蛋白单克隆抗体(MAb) 3C8的反应原性。将MAb 3C8采用Protein G亲和层析柱纯化后与HRP偶联(HRP-3C8),利用间接elisa法测定纯化HRP-3C8的效价。结果显示,P-rg G与MAb 3C8发生了特异性反应,在30 ku处出现特异性条带。纯化的HRP-3C8效价达1∶51 200。以P-rg G作为包被抗原,以纯化的HRP-3C8作为检测抗体,通过对各反应条件优化后初步建立了ILTV g G蛋白间接竞争elisa (ic-elisa)检测方法。条件优化结果显示,P-rg G包被量为12.5 ng/孔,HRP-3C8抗体稀释度为1∶10 000,将待检样品与HRP-3C8抗体在37℃孵育40 min后加入elisa板再反应20 min,TMB底物反应10 min。将待检样品的抑制率(PI)≥31.08%判为阳性;采用该方法分别检测ILTV、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV),通过计算PI,评估该方法的特异性;按照Reed-Muench法测定ILTV K317株的鸡胚半数感染量(EID_(50)),再将该病毒2倍倍比稀释(1∶10~1∶2 560)后,以该ic-elisa方法检测,评估该方法的敏感性;利用同批次和不同批次P-rg G分别包被elisa板,采用该ic-elisa方法检测ILTV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除了能检测ILTV外,其余相关病毒均为阴性结果;将ILTV稀释至1∶320时检测结果仍为阳性,相当于75 EID_(50)/0.1 m L;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法及荧光定量PCR (q PCR)分别检测50份临床ILTV、IBV和FPV感染鸡的口咽拭子和喉头组织、10份ILTV活疫苗,该方法检测结果显示,阳性检测率为73.3%(44/60),阴性率为26.7%(16/60)。q PCR的检测结果显示,阳性检测率为81.7%(49/60),阴性率为18.3%(11/60),二者的阴、阳性符合率分别为90.9%和87.8%,总符合率为88.3%。本研究建立的ILTV g G蛋白ic-elisa方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于检测实验室和临床ILTV感染的不同样品,为ILTV及其疫苗的检测提供了新的技术手段。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gG蛋白单克隆抗体间接竞争elisa

间接竞争elisa测定花生植株内源水杨酸含量

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物生理学报 2013年第12期49卷 1447-1453页

作者：鄢洪海王学武张茹琴况川迟玉成夏淑春青岛农业大学农学与植物保护学院山东青岛266109 青岛市植物保护站山东青岛266100 山东省花生研究所山东青岛266101

以SA-N=CH-(CH2)3-CH=N-OVA为包被抗原,利用SA-NH-CH2-NH-BSA为免疫原产生的抗体,来建立能定量测定花生组织中游离水杨酸(SA)的间接竞争elisa工作程序,并明确该方法的工作条件以及基本参数。结果表明:该方法对SA标准品的最低检测量为10... 详细信息

以SA-N=CH-(CH2)3-CH=N-OVA为包被抗原,利用SA-NH-CH2-NH-BSA为免疫原产生的抗体,来建立能定量测定花生组织中游离水杨酸(SA)的间接竞争elisa工作程序,并明确该方法的工作条件以及基本参数。结果表明:该方法对SA标准品的最低检测量为10 ng·mL-1,线性检测范围为10 ng·mL^10μg·mL-1。在该范围内,标准曲线的批内和批间变异系数分别为1.90%和6.81%;花生叶片和根组织中添加SA的平均回收率分别为93.9%和91.0%。

关键词：花生内源水杨酸间接竞争elisa

间接竞争elisa检测食品中的邻苯二甲酸二丁酯

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

食品与机械 2019年第5期35卷 67-71,155页

作者：尚淑娜生威王璐璐赵秋霞王硕食品营养与安全国家重点实验室〔天津科技大学〕天津300457 天津科技大学食品工程与生物技术学院天津300457

以4-氨基邻苯二甲酸为原料,通过酯化反应合成半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丁酯,将合成的半抗原通过重氮化反应与钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联制备免疫抗原,与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联制备包被抗原。通过免疫新西兰大白兔获得邻苯二甲酸二... 详细信息

以4-氨基邻苯二甲酸为原料,通过酯化反应合成半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丁酯,将合成的半抗原通过重氮化反应与钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联制备免疫抗原,与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联制备包被抗原。通过免疫新西兰大白兔获得邻苯二甲酸二丁酯抗血清,利用纯化获得的抗体和包被抗原建立邻苯二甲酸二丁酯间接竞争酶联免疫检测方法(elisa)。该方法的IC50为40.68μg/L,最低检测限IC15为1.98μg/L,方法对邻苯二甲酸二丁酯具有较好的特异性。经对白酒、牛奶、食用油样品进行检测,添加回收率为84.57%~102.40%,用气相色谱-质谱法(GC-MS)进行验证,两种方法均呈现良好的线性相关性(R2=0.9908)。研究建立的方法可以被应用于食品中塑化剂邻苯二甲酸二丁酯的快速检测。

关键词：间接竞争elisa 邻苯二甲酸二丁酯多克隆抗体酶联免疫分析法食品分析

水体中微囊藻毒素-LR的间接竞争elisa检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

环境科学 2006年第6期27卷 1166-1170页

作者：盛建武何苗余少青施汉昌钱易清华大学环境科学与工程系环境模拟与污染控制国家重点联合实验室北京100084

在自制包被完全抗原浓度为5μg／mL、单克隆抗体工作稀释度为1：3000、酶标二抗鼠工作稀释度为1：3000、微囊藻毒素-LR浓度在0．001-30μg／L、显色底物为邻苯二胺，采用间接竞争酶联免疫吸附试验对水体中的微囊藻毒素-LR进行检测，结... 详细信息

在自制包被完全抗原浓度为5μg／mL、单克隆抗体工作稀释度为1：3000、酶标二抗鼠工作稀释度为1：3000、微囊藻毒素-LR浓度在0．001-30μg／L、显色底物为邻苯二胺，采用间接竞争酶联免疫吸附试验对水体中的微囊藻毒素-LR进行检测，结果表明，该方法与高效液相色谱的检测结果相关系数大于0．99，多次重复实验相对标准偏差小于10％，最低检测限能达到0．01μg／L。定量检测区间为0．01～3μg／L，该方法对[4-精氨酸]微囊藻毒素能特异性识别，对来自实际水样中的干扰有相当的耐受力．

关键词：微囊藻毒素-LR 单克隆抗体间接竞争elisa 检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

间接竞争elisa检测TGEV方法的建立

间接竞争ELISA检测TGEV方法的建立

作者：钟涛东北农业大学

学位级别：硕士

本研究用经Ni2+-NTA金属螯合层析柱纯化后获得纯化的重组N蛋白作为抗原检测试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂,用非离子去污剂暴露出TGEV的核衣壳蛋白,利用竞争原理针对粪便中的TGEV建立了一种快速的间接竞争elisa检测方法... 详细信息

本研究用经Ni2+-NTA金属螯合层析柱纯化后获得纯化的重组N蛋白作为抗原检测试剂,抗重组N蛋白的单克隆抗体作为抗体诊断试剂,用非离子去污剂暴露出TGEV的核衣壳蛋白,利用竞争原理针对粪便中的TGEV建立了一种快速的间接竞争elisa检测方法。并对方法中封闭液的选择及工作条件进行了确定,结果表明0.5%聚乙烯醇在37℃封闭2h效果最理想。该方法对感染TGEV的20头份仔猪的粪便样品进行检测,并用统计学方法对仔猪粪便样品的检测数据进行了分析,确定了阳性值判定标准为:在阴性对照(N)OD492nm>0.9情况下,抑制率大于14.5%为阳性。特异性实验结果表明,建立的间接竞争elisa对猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道病毒的检测均为阴性反应。以TGEV TH-98株的强毒株人工口服感染未进初乳的初生仔猪,24h后收集仔猪粪便样品,用间接竞争elisa和RT-PCR方法分别对粪便进行病原体检测,结果表明,在仔猪感染62h以后,用间接竞争elisa方法可检测到在肠道内扩增的TGEV;RT-PCR方法在感染后57h即可检测到TGEV。RT-PCR方法比间接竞争elisa要早近5h检测到TGEV。对63h以后的粪便作10倍稀释时,间接竞争elisa方法可检测到粪便中的TGEV,而RT-PCR方法对粪便作20倍、40倍稀释时,仍可检出TGEV。表明RT-PCR方法较间接竞争elisa方法敏感。

关键词： TGEV 重组N蛋白间接竞争elisa 单克隆抗体

恩诺沙星完全抗原的合成及间接竞争elisa方法的建立

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

环境科学学报 2017年第8期37卷 2904-2910页

作者：李树莹唐云飞盛建武刘丽何苗清华大学环境学院环境模拟与污染控制国家联合重点实验室环境与健康传感技术研究中心北京100084

为了建立环境新型抗生素类污染物恩诺沙星的免疫检测方法,采用间接竞争elisa方法,用酶标仪测定酶标二抗与底物反应生成的有色产物量来确定恩诺沙星含量.研究了恩诺沙星完全抗原的合成方法,以及间接竞争elisa的优化条件和实际水样的检测... 详细信息

为了建立环境新型抗生素类污染物恩诺沙星的免疫检测方法,采用间接竞争elisa方法,用酶标仪测定酶标二抗与底物反应生成的有色产物量来确定恩诺沙星含量.研究了恩诺沙星完全抗原的合成方法,以及间接竞争elisa的优化条件和实际水样的检测效果.结果表明,通过碳二亚胺法(EDC+NHS)成功合成了恩诺沙星的理想完全抗原,采用BCA法测定完全抗原浓度,紫外吸收法和MADLI-TOF MS法测得完全抗原的偶联比为14~16.建立的恩诺沙星间接竞争elisa检测方法,检测限为1.92μg·L^(-1),定量检测区间为7.33~238.24μg·L^(-1).采用优化后的实验条件测定了清华大学地下水和饮用水配制的恩诺沙星加标样品,发现所有样品的变异系数和回收率分别为3%~11%和82%~122%,表明建立的间接竞争elisa方法适用于实际水样中恩诺沙星的快速简便检测.

关键词：恩诺沙星间接竞争elisa 完全抗原水样

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争elisa检测技术研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学通报 2015年第10期42卷 2033-2040页

作者：谢珲章先王歆凡鹏程时玉菲方维焕浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州310058

【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争elisa检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤... 详细信息

【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争elisa检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接elisa方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件,建立稳定的间接竞争elisa检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争elisa检测方法,在AFB1浓度为1.04-25.00μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03μg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85%-120%,变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实,该方法与进口elisa试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。

关键词：黄曲霉毒素B1 单克隆抗体间接竞争elisa

单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争elisa检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国海洋大学学报（自然科学版） 2012年第7期42卷 64-69页

作者：马玉彬史晓丽李阳董英萍张立涛张志峰中国海洋大学海洋生物遗传育种教育部重点实验室山东青岛266003 中国科学院青岛生物能源与过程研究所生物燃料重点实验室山东省能源生物遗传资源重点实验室山东青岛266101

硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争elisa检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达... 详细信息

硫醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR),是线粒体硫化物代谢的关键酶。本研究以生活在潮间带下区及潮下带中的底栖生物—单环刺螠SQR重组蛋白为材料,建立了单环刺螠SQR间接竞争elisa检测方法,为定量分析SQR蛋白水平表达奠定了基础。将SQR重组蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,检测效价高达1:64 000。采用免疫印迹实验,将该抗体与重组蛋白和体壁总蛋白杂交,均得到了单一的条带,表明该抗体特异性好。优化SQR间接竞争elisa检测条件,得出最佳的抗原包被浓度为250ng/mL,一抗浓度为1∶20 000,二抗浓度为1∶12 000,此条件下建立的标准曲线检测范围为2.5～1 000ng/mL。精确度检测结果显示,批内差异在0.42%～7.27%、批间差异在2.58%～7.78%范围内,表明该条件下精确度具有良好的准确性和重复性。以上结果表明,已成功建立单环刺螠SQR间接竞争elisa检测方法。

关键词：单环刺螠硫醌氧化还原酶间接竞争elisa 多克隆抗体