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新霉素的直接竞争酶联免疫分析法

食品科学 2011年第10期32卷 212-217页

作者：徐乃丰胥传来匡华屈昌龙许阳彭池方江南大学食品学院江苏无锡214122

首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法。通... 详细信息

首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法。通过一系列参数的优化,包括包被溶液、封闭溶液、竞争时间、抗体稀释液、pH值、反应温度、显色时间等,最终得到其IC20(抑制率为20%时的标准溶液质量浓度)<1ng/mL、半数抑制量(IC50)为7.6ng/mL,线性方程为y=-0.2798x+0.7456,R2=0.991。直接ELISA总耗时只需大约1h。

关键词：新霉素间接竞争酶联免疫吸附试验直接竞争酶联免疫吸附试验

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孔雀石绿单克隆抗体的制备及其鉴定

中国兽医科学 2007年第4期37卷 359-362页

作者：龚朋飞王权陈永军中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232

用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗,单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定,探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示,经细胞融合和筛选... 详细信息

用人工合成的无色孔雀石绿-兔血清白蛋白(LMG-RSA)作抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术筛选抗无色孔雀石绿的单抗,单抗经纯化后对其特异性和灵敏性进行了鉴定,探讨了建立孔雀石绿的免疫学检测方法。结果显示,经细胞融合和筛选得到了1株分泌抗无色孔雀石绿单克隆抗体的杂交瘤细胞5E9。经鉴定,该杂交瘤细胞的染色体数为98.82±5.6,间接ELISA检测小鼠腹水的抗体效价达1.3×105,该细胞连续培养10代以上,生物学性状稳定,间接竞争ELISA(ciELISA)结果显示,无色孔雀石绿50%抑制的质量浓度为18.5μg/L,除孔雀石绿外,与其他类似结构和相关类型的药物没有交叉反应,表明该单抗用于孔雀石绿的检测有较大的应用价值。

关键词：孔雀石绿单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附试验

抗酮洛芬多克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立

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分析试验室 2012年第5期31卷 1-5页

作者：王晓敏庄惠生上海交通大学环境科学与工程学院上海200240

分别将酮洛芬与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制得免疫原和包被原,经过免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,抗体经纯化后效价为1:128000。使用自制的抗体,建立了测定酮洛芬的间接竞争酶联免疫吸附(ic-ELISA)新方法。ic-ELISA的线性... 详细信息

分别将酮洛芬与牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制得免疫原和包被原,经过免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,抗体经纯化后效价为1:128000。使用自制的抗体,建立了测定酮洛芬的间接竞争酶联免疫吸附(ic-ELISA)新方法。ic-ELISA的线性范围为0.010～10.0μg/L,IC50为0.235μg/L,最低检测限为0.0040μg/L,线性回归方程为y=-22.97ρ+104.5(R2=0.980),与布洛芬、双氯酚酸的交叉反应率均小于4%,方法可用于水体中酮洛芬的检测。

关键词：酮洛芬多克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附试验

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阿维菌素单克隆抗体的制备与鉴定

中国兽医科学 2006年第12期36卷 1019-1023页

作者：郭东华徐世文李术东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

将与牛血清白蛋白(BSA)偶联的阿维菌素人工合成抗原AVM-BSA免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了2株分泌抗阿维菌素特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2F2和2H10。生物学特性鉴定的结果表明,2株杂交瘤细胞株诱生腹水的效价为... 详细信息

将与牛血清白蛋白(BSA)偶联的阿维菌素人工合成抗原AVM-BSA免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得了2株分泌抗阿维菌素特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2F2和2H10。生物学特性鉴定的结果表明,2株杂交瘤细胞株诱生腹水的效价为1∶6 400,分泌的抗体亚型均为IgM;间接竞争酶联免疫吸附试验结果表明,抗体的50%抑制质量浓度(IC50)为101 ng/mL,2株单克隆抗体与伊维菌素、多拉菌素、红霉素和白霉素均无交叉反应,证实单克隆抗体2H10具有很强的特异性,可用于阿维菌素药物残留免疫分析方法的建立。

关键词：阿维菌素单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附试验

β-玉米赤霉烯醇单克隆抗体的研制及CiELISA检测方法的建立

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中国兽医科学 2020年第11期50卷 1469-1474页

作者：朱根生王凤丽夏苏干原俊朝邹辉顾建红袁燕刘学忠刘宗平卞建春扬州大学兽医学院江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为建立一种针对β-玉米赤霉烯醇(β-ZOL)快速准确的检测方法,笔者用活性酯法将β-ZOL与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联合成人工完全抗原,纯化鉴定后免疫BALB/c小鼠。经筛选最终获得1株稳定分泌抗β-ZOL抗体的细胞株1F5。利用... 详细信息

为建立一种针对β-玉米赤霉烯醇(β-ZOL)快速准确的检测方法,笔者用活性酯法将β-ZOL与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联合成人工完全抗原,纯化鉴定后免疫BALB/c小鼠。经筛选最终获得1株稳定分泌抗β-ZOL抗体的细胞株1F5。利用该抗体建立检测β-ZOL的间接竞争酶联免疫吸附试验(CiELISA)方法。结果显示,β-ZOL的药物抑制标准曲线在浓度为5~500 ng/m L时线性关系良好,标准曲线方程为y=0.406 3x-0.204 2(R^2=0.990 4),IC_(50)为53.19 ng/m L,检测下限(LOD)为6 ng/m L。该单克隆抗体对β-ZOL的抑制率为100%,与α-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉烯酮、β-雌二醇、呕吐毒素、伏马毒素等基本无交叉反应。牛奶样品β-ZOL添加回收试验显示,β-ZOL的回收率为91.24%~110.07%,变异系数为6.17%~8.73%。说明建立的检测β-ZOL的CiELISA方法稳定可靠。

关键词： β-玉米赤霉烯醇单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附试验回收试验

达氟沙星多克隆抗体制备及间接竞争ELISA方法的建立

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动物医学进展 2022年第12期43卷 84-89页

作者：张欣欣齐永华岳锋路少鹏李文明郭东光潘鹏涛王选年新乡学院动物疫病分子诊断河南省工程实验室河南新乡453000 郑州大学河南郑州450000

为制备达氟沙星(DAN)多克隆抗体,建立检测DAN残留的间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法,采用混合酸酐法制备免疫原DAN-BSA和包被原DAN-OVA,用DAN-BSA免疫新西兰大白兔获得DAN多抗血清,建立检测DAN的ic-ELISA检测方法。结果显示,成功合成了DAN-... 详细信息

为制备达氟沙星(DAN)多克隆抗体,建立检测DAN残留的间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法,采用混合酸酐法制备免疫原DAN-BSA和包被原DAN-OVA,用DAN-BSA免疫新西兰大白兔获得DAN多抗血清,建立检测DAN的ic-ELISA检测方法。结果显示,成功合成了DAN-BSA和DAN-OVA,并获得DAN的多克隆抗体;用该抗体建立的ic-ELISA检测方法的半数抑制浓度为0.39μg/L,最低检测限为0.04μg/L,检测范围为0.09μg/L~6.16μg/L。结果表明,成功制备了抗DAN的多克隆抗体,并建立了检测DAN的ic-ELISA方法,为进一步开发DAN快速检测试剂盒奠定了基础。

关键词：达氟沙星完全抗原多克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附试验

牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立

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中国畜牧兽医 2015年第10期42卷 2625-2630页

作者：韩青王静徐豪杨娟临沂出入境检验检疫局临沂276034 威海出入境检验检疫局威海264205

本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑... 详细信息

本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度（IC50）为2.1ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限（LOD）为2μg/L。在5、10和20μg/L添加浓度下,回收率为79.2%-90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。

关键词：间接竞争酶联免疫吸附试验替米考星牛奶残留

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全氟辛酸特异性单域重链抗体的制备

环境与职业医学 2015年第8期32卷 744-748页

作者：张星王颖程亚庭冯艳王艳上海交通大学公共卫生学院上海200025 上海交通大学基础医学院上海200025 南方人类基因组研究中心上海200120

[目的]基于抗原抗体特异性结合的原理,制备一种针对全氟辛酸(PFOA)小分子的特异性抗体,以用于PFOA的现场快速检测。[方法]采用碳二亚胺法将PFOA与牛血清白蛋白(BSA)偶联,将此完全抗原作为包被抗原,用重链抗体噬菌体文库进行筛选获得阳... 详细信息

[目的]基于抗原抗体特异性结合的原理,制备一种针对全氟辛酸(PFOA)小分子的特异性抗体,以用于PFOA的现场快速检测。[方法]采用碳二亚胺法将PFOA与牛血清白蛋白(BSA)偶联,将此完全抗原作为包被抗原,用重链抗体噬菌体文库进行筛选获得阳性克隆,聚合酶链反应扩增重链抗体片段并与含有人抗体Fc段的质粒连接,采用原核表达系统进行抗体蛋白表达和纯化,间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)进行验证。[结果]成功合成完全抗原PFOA-BSA,偶联比为8。采用重链抗体库进行4轮筛选,获得7株阳性克隆,经进一步的原核表达系统进行蛋白表达和纯化,得到5种与预期大小相符的、含有人抗体Fc段的抗体蛋白。经间接竞争ELISA方法初步检测验证,获得1个可与PFOA特异结合的单域重链抗体。[结论]最终获得针对PFOA的特异性抗体,有望用于建立快速检测不同介质中PFOA的免疫学检测方法。

关键词：全氟辛酸完全抗原重链抗体文库间接竞争酶联免疫吸附试验

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呋喃妥因代谢物AHD单抗的制备及鉴定

畜牧与兽医 2014年第1期46卷 20-23页

作者：石金磊陈永军刘迎春蒋蔚张花景李欣彤乔元彪王权中国农科院上海兽医研究所上海200241

将呋喃妥因代谢物1-氨基-乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)分别与牛血清蛋白(BSA)和Jeffamine修饰的卵清蛋白(OVA)偶联,经紫外光谱扫描鉴定,成功合成了免疫抗原CPAHD-BSA和包被抗原CPAHD-Jeffamine-OVA。应用... 详细信息

将呋喃妥因代谢物1-氨基-乙内酰胺脲(AHD)的衍生物1-氨基乙内酰脲-4-羧苯基肟(CPAHD)分别与牛血清蛋白(BSA)和Jeffamine修饰的卵清蛋白(OVA)偶联,经紫外光谱扫描鉴定,成功合成了免疫抗原CPAHD-BSA和包被抗原CPAHD-Jeffamine-OVA。应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得了稳定分泌抗4-NPAHD单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为B10E7。使用本细胞株制备的McAb对4-NPAHD的半数抑制质量浓度(IC50)为3.65 ng/mL,与同类抗生素及其代谢物未发现交叉反应,显示高度的灵敏性和特异性。本抗体的研制为建立间接竞争酶联免疫方法奠定了基础。

关键词：呋喃妥因代谢物 AHD 单克隆抗体间接竞争酶联免疫吸附试验