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加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第15期25卷 57-63页

作者：唐冰镕李花刘旺华胡康丽湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室长沙410208

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10-3g·kg-1),加味四君... 详细信息

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10-3g·kg-1),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg-1)。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P1);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P1)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P1);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P1)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。

关键词：脑缺血脑水肿加味四君子汤健脾益气利水闭合蛋白密封蛋白-1 闭锁连接蛋白-1

健脾益气利水方对脑缺血大鼠脑水肿及其脑组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达的影响

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中华中医药杂志 2019年第11期34卷 5424-5428页

作者：李花胡康丽刘旺华何倩戴思思唐冰镕杨程湖南中医药大学中医学院长沙410208 中医诊断学湖南省重点实验室长沙410208 数字中医药协同创新中心长沙410208

目的:探讨健脾益气利水方(JPF)对脑缺血大鼠脑水肿及脑组织紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响。方法:将105只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组,JPF小、中、大剂量... 详细信息

目的:探讨健脾益气利水方(JPF)对脑缺血大鼠脑水肿及脑组织紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响。方法:将105只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组,JPF小、中、大剂量组。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7d后处死,运用伊文思蓝(EB)渗出法检测血脑屏障的通透性,运用免疫组化法检测大鼠缺血侧脑组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组缺血侧脑组织EB的含量显著增加(P连接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1表达保护血脑屏障,减轻脑缺血再灌注大鼠脑水肿。

关键词：脑缺血脑水肿血脑屏障健脾益气利水法闭合蛋白密封蛋白-1 闭锁连接蛋白-1

血管扩张刺激磷蛋白磷酸化在失血性休克大鼠肠屏障功能障碍中的作用

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血管扩张刺激磷蛋白磷酸化在失血性休克大鼠肠屏障功能障碍中的作...

作者：张晔第三军医大学

学位级别：硕士

严重创伤或失血性休克(hemorrhagic shock, HS)后常出现肠屏障功能障碍,表现为肠上皮通透性出现增高,引起肠道细菌移位(bacterial translocation, BT)和肠源性脓毒血症,甚至导致全身炎症反应综合征(systemic inflammatory respone syndr... 详细信息

严重创伤或失血性休克(hemorrhagic shock, HS)后常出现肠屏障功能障碍,表现为肠上皮通透性出现增高,引起肠道细菌移位(bacterial translocation, BT)和肠源性脓毒血症,甚至导致全身炎症反应综合征(systemic inflammatory respone syndrome, SIRS)和多器官功能障碍综合征(multiple organ disfunction syndrome, MODS),危及患者生命。基础研究表明,肠上皮细胞间的紧密连接,选择性的调节分子和离子从细胞间通过肠上皮,在肠上皮通透性和肠屏障功能的调节中有重要作用,紧密连接功能主要取决于由一系列结构蛋白。在失血性休克后,肠屏障功能障碍与紧密连接的重要结构蛋白闭锁连接蛋白-1 (zonula occludens-1, ZO-1)表达降低和从紧密连接蛋白复合体解离有关;高脂肠内营养可防治失血性休克后的ZO-1蛋白丢失,保护肠屏障功能。在人微血管内皮细胞,免疫沉淀发现,ZO-1可结合一种作为屏障功能重要调节靶点的磷酸化蛋白,这种磷酸化蛋白就是血管扩张刺激磷蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein, VASP),VASP最早发现于血小板,是一种黏着斑的结合和调节蛋白。在内皮细胞中,VASP可受PKA磷酸化Ser-157位点后,改变与ZO-1的结合,从而调节内皮细胞的屏障功能。由于肠上皮细胞(intestinal epithelial cell, IEC)也表达VASP蛋白,VASP磷酸化在失血性休克后的肠屏障功能障碍中有何作用,机制如何,是否与ZO-1有关? 方法:本实验采用失血性休克大鼠模型,以血清二胺氧化酶(diamineoxidase, DAO)活性、血浆D-乳酸含量以及肠粘膜上皮组织形态反映肠粘膜屏障功能,研究VASP磷酸化在失血性休克后肠屏障功能障碍中的作用和调节机制: 1. VASP磷酸化在失血性休克后肠屏障功能障碍中的作用 (1)观察失血性休克后大鼠肠屏障功能的变化,肠粘膜组织VASP、磷酸化VASP(Ser-157)蛋白表达的变化,分析休克后VASP及磷酸化VASP蛋白表达变化与肠屏障功能变化的关系。 (2)观察PKA激动剂cAMP(可磷酸化VASP的Ser-157位点)对失血性休克后大鼠肠屏障功能的影响,阐明VASP磷酸化在失血性休克后肠屏障功能障碍中的作用。 2. VASP磷酸化调节失血性休克后肠屏障功能障碍与ZO-1的关系 (1)观察失血性休克后大鼠肠粘膜组织ZO-1蛋白表达的变化,分析休克后ZO-1蛋白表达变化与肠屏障功能变化的关系。 (2)观察cAMP对失血性休克大鼠肠粘膜组织ZO-1蛋白表达的影响,分析VASP磷酸化调节失血性休克后肠屏障功能的可能机制。结果: 1.与正常对照相比,失血性休克后大鼠血清DAO活性、血浆D-乳酸含量增高,休克1h增高幅度较小,休克2h和4h增高幅度较大(P1),肠粘膜上皮组织形态显示明显的损伤改变;失血性休克后肠粘膜组织的VASP蛋白表达逐渐降低(P1),磷酸化VASP(Ser-157)表达增高(P1),但增高幅度从休克2h开始降低。cAMP可增高休克2h肠粘膜组织的磷酸化VASP(Ser-157)表达(P1),同时降低休克2h大鼠血清DAO活性、血浆D-乳酸含量,减轻肠粘膜上皮组织形态的损伤改变。 2.与正常对照相比,失血性休克后肠粘膜组织的ZO-1蛋白表达逐渐降低(P1),与休克2h组相比,cAMP可增高休克2h的肠粘膜组织ZO-1蛋白表达(P1)。结论:VASP磷酸化是失血性休克大鼠肠屏障功能损伤的重要相关因素,可能通过紧密连接蛋白ZO-1,参与休克后肠屏障功能障碍的调节。

关键词：失血性休克肠屏障功能障碍血管扩张刺激磷蛋白闭锁连接蛋白-1

葛根芩连汤调控MMP-9/p38 MARK途径修复溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜上皮屏障功能

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中国实验方剂学杂志 2021年第4期27卷 8-15页

作者：李亚兰刘佳静马沛广董瑞娟葛东宇刘红双彭桂英李军祥北京中医药大学生命科学学院北京100029 北京中医药大学东方医院北京100078

目的:探讨葛根芩连汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜上皮屏障功能的保护作用,并通过基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路探究其治疗UC的作用机制。方法:48只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮... 详细信息

目的:探讨葛根芩连汤对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜上皮屏障功能的保护作用,并通过基质金属蛋白酶-9(MMP-9)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路探究其治疗UC的作用机制。方法:48只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(0.3 g·kg^(-1))及葛根芩连汤高、中、低剂量组(2.84,1.42,0.71 g·kg^(-1))。采用3%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液构建UC小鼠模型,葛根芩连汤和柳氮磺吡啶于造模后第8天灌胃给药,连续7 d,正常组给予等量生理盐水处理。末次给药后取结肠组织,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化,免疫组化(IHC)观察结肠组织紧密连接(TJ)蛋白,如闭合蛋白(Occludin),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),MMP-9 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中磷酸化(p)-p38 MAPK,p38 MAPK和MMP-9蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量显著下降(P1),疾病活动指数(DAI)评分显著升高(P1),结肠黏膜上皮破损并可见黏膜和黏膜下层炎细胞浸润明显,Occludin,ZO-1蛋白表达显著降低(P1),TNF-α,IL-1β,MMP-9 mRNA相对表达量显著升高(P1),p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著升高(P1);与模型组比较,柳氮磺吡啶组、葛根芩连汤各剂量组小鼠体质量和DAI评分均有明显改善(P1),结肠组织损坏明显改善,Occludin,ZO-1蛋白明显增多(P1),TNF-α,IL-1β,MMP-9 mRNA相对表达量显著下降(P1),p-p38MAPK和MMP-9蛋白表达显著下降(P1),其中葛根芩连汤各组中以中剂量组的变化最为明显。结论:葛根芩连汤能够通过抑制MMP-9和炎性细胞因子TNF-α,IL-1β的表达,阻断p38 MAPK信号通路的激活,增加TJ蛋白的表达,从而修复肠道黏膜屏障功能。

关键词：葛根芩连汤溃疡性结肠炎闭合蛋白闭锁连接蛋白-1 基质金属蛋白酶-9 p38丝裂原活化蛋白激酶

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桃红四物汤抗癫痫作用机制研究

中草药 2017年第15期48卷 3117-3121,3126页

作者：徐龙进唐吉友周晓娟李涛李晓梅山东省疾病预防控制中心山东济南250014 山东省千佛山医院神经内科山东济南250014 潍坊中医院脑病三科山东潍坊261041

目的研究桃红四物汤的抗癫痫作用机制。方法建立戊四氮(PTZ)点燃大鼠癫痫模型,随机分为对照组、模型组和桃红四物汤低、中、高剂量组。桃红四物汤剂量分别为0.7、1.4、2.1 g/kg,给药体积为10 m L/kg,每日ig给药1次,连续给药2周。给药第0... 详细信息

目的研究桃红四物汤的抗癫痫作用机制。方法建立戊四氮(PTZ)点燃大鼠癫痫模型,随机分为对照组、模型组和桃红四物汤低、中、高剂量组。桃红四物汤剂量分别为0.7、1.4、2.1 g/kg,给药体积为10 m L/kg,每日ig给药1次,连续给药2周。给药第0、14天观察大鼠癫痫发作程度。给药结束处死大鼠,伊文思蓝(EB)法测定血脑屏障通透性,Western blotting法和免疫荧光法测定脑组织及不同部位3种紧密连接蛋白:闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Occludin蛋白表达水平。结果高、中、低剂量桃红四物汤可显著降低大鼠癫痫发作程度和血脑屏障通透性(P连接蛋白表达水平有关。

关键词：桃红四物汤癫痫血脑屏障紧密连接蛋白闭锁连接蛋白-1 基质金属蛋白酶-9 Occludin

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参苓白术散对克罗恩病大鼠肠黏膜屏障的影响

湖南中医药大学学报 2023年第11期43卷 2034-2040页

作者：邹巍莹刘密余炼宾东华湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

目的观察参苓白术散对克罗恩病(Crohn's disease,CD)大鼠肠黏膜屏障的影响。方法60只SD大鼠随机均分为空白组、模型组、美沙拉秦组(0.21 g·kg^(-1)·d^(-1))及参苓白术散高、中、低剂量组(5.88、11.76、23.52 g·kg^(-1)·d^(-1))。采... 详细信息

目的观察参苓白术散对克罗恩病(Crohn's disease,CD)大鼠肠黏膜屏障的影响。方法60只SD大鼠随机均分为空白组、模型组、美沙拉秦组(0.21 g·kg^(-1)·d^(-1))及参苓白术散高、中、低剂量组(5.88、11.76、23.52 g·kg^(-1)·d^(-1))。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-three nitrobenzene sulfonic acid,TNBS)灌肠液制作CD模型。给药各组予以相应药物灌胃,空白组、模型组予以等剂量灭菌注射用水。监测每组大鼠在用药期间的体征变化,14 d后进行结肠黏膜损伤指数(colon injury morphology index,CMDI)评分、组织病理学观察,qPCR检测闭合蛋白(Occludin)、闭锁连接蛋白-1(zonulaoccludens-1,ZO-1)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)的mRNA表达水平,Western blot法检测各组大鼠结肠组织中Occludin、ZO-1、E-cadherin蛋白表达水平。结果与空白组对比,模型组大鼠体质量明显下降,活动能力减弱,普遍出现稀便情况,少量大鼠出现便血及黏液便情况;CMDI评分显著升高(P蛋白表达均明显降低(P蛋白表达显著升高(P蛋白的表达,促进CD大鼠结肠黏膜屏障功能的修复,有效缓解CD大鼠肠黏膜屏障损伤。

关键词：参苓白术散克罗恩病美沙拉秦闭合蛋白 E-钙黏蛋白闭锁连接蛋白-1