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METTL3介导的LncRNA mir99aHG通过抑制mir-136-5p表达诱导卵巢颗粒细胞凋亡的机制研究

中国计划生育和妇产科 2024年第6期16卷 58-64页

作者：常建芳孙延庆联勤保障部队解放军第960医院生殖医学科山东济南250000

目的研究LncRNA mir99aHG(mir99aHG)在化疗药物导致的卵巢颗粒细胞凋亡中的作用及其潜在的调节机制。方法采集正常女性和卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)患者的卵泡液,检测mir99aHG表达。将卵巢颗粒细胞KGN分为对照组、顺... 详细信息

目的研究LncRNA mir99aHG(mir99aHG)在化疗药物导致的卵巢颗粒细胞凋亡中的作用及其潜在的调节机制。方法采集正常女性和卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)患者的卵泡液,检测mir99aHG表达。将卵巢颗粒细胞KGN分为对照组、顺铂组、顺铂+Nc shRNA组、顺铂+sh-mir99aHG组、顺铂+vector组、顺铂+OE-METTL3组、顺铂+OE-METTL3+OE-mir99aHG组、顺铂+OE-mir99aHG组、顺铂+Nc mimic组、顺铂+mir-136-5p mimic组及顺铂+sh-mir99aHG+Nc inhibitor组和顺铂+sh-mir99aHG+mir-136-5p inhibitor组。KGN细胞经相应载体或质粒处理后,采用RIP分析mir99aHG的m6A修饰水平;在线数据库预测mir99aHG与mir-136-5p的结合位点,并通过荧光素酶报告基因分析进行验证;采用ccK-8和流式细胞术分析KGN细胞的活力和凋亡水平;ELISA检测caspase-3酶活性;Western blot检测凋亡相关蛋白BcL-2和Bax表达水平。结果与正常女性相比,POF患者卵泡液中mir99aHG表达水平显著上调(Pmir99aHG表达显著上调,METTL3表达及蛋白水平显著下调(Pc shRNA组相比,sh-mir99aHG组KGN细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低(Pmir99aHG显著富集。与vector组相比,OE-METTL3组mir99aHG的m6A水平显著升高,mir99aHG mRNA表达水平显著降低(Pmir99aHG可逆转OE-METTL3对KGN细胞活力、凋亡及相关蛋白表达的影响。mir-136-5p与mir99aHGA存在结合位点,mir99aHGA负调控mir-136-5p表达。与Nc-mimic组相比,mir-136-5p mimic组细胞活力及BcL-2蛋白表达明显升高,细胞凋亡率、caspase-3酶活性及Bax蛋白表达明显降低(Pmir-136-5p inhibitor逆转了sh-mir99aHG对细胞KGN细胞活力、凋亡及相关蛋白表达的影响(Pmir99aHG在卵巢颗粒细胞中上调,METTL3通过m6A甲基化修饰抑制mir99aHG表达,促进mir99aHG靶标mir-136-5p的上调,从而抑制卵巢颗粒细胞凋亡,改善化疗药物顺铂介导的卵巢早衰。

关键词：卵巢颗粒细胞长链非编码mir-99a-let-7c簇宿主基因 N6-甲基腺苷修饰 N6腺苷甲基转移酶样3 微小核糖核酸-136-5p

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