检索结果-南通市图书馆

中国国境卫生检疫杂志 2020年第4期43卷 235-237页

作者：王红李君萍李晓宾寇俊婷章健山西国际旅行卫生保健中心(太原海关口岸门诊部) 山西太原030000 成都微瑞生物科技有限公司

目的利用镧系荧光技术建立定量检测A型肉毒毒素方法,并验证该方法的检测效果。方法分别用A型肉毒毒素单克隆抗体和鸡IgY抗体标记镧系荧光纳米微球,在硝酸纤维素膜上包被A型肉毒毒素多克隆抗体作为检测线,包被山羊抗鸡IgY的IgG抗体作为... 详细信息

目的利用镧系荧光技术建立定量检测A型肉毒毒素方法,并验证该方法的检测效果。方法分别用A型肉毒毒素单克隆抗体和鸡IgY抗体标记镧系荧光纳米微球,在硝酸纤维素膜上包被A型肉毒毒素多克隆抗体作为检测线,包被山羊抗鸡IgY的IgG抗体作为质控线,建立A型肉毒毒素检测方法,分析方法的准确度、特异性、灵敏度和可重复性。结果建立的A型肉毒毒素镧系荧光法可在20 min内完成检测,灵敏度为5 IU/ml,与黄曲霉素B1、呕吐毒素、T2毒素、相思子毒素和蓖麻毒素无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论镧系荧光法的建立为A型肉毒毒素快速、高效检测提供了可靠保障。

关键词：肉毒毒素镧系荧光免疫层析

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基于镧系高敏荧光的生物毒素现场快速检测方法的研究

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军事医学 2021年第7期45卷 537-542,547页

作者：刘军波金志颖白雪欣万伟杨浩李岩伟吴俊清章健高姗王景林军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室石家庄050024 成都微瑞生物科技有限公司成都611730

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效... 详细信息

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法。其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测。3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5~50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B_(1)、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景。

关键词：蓖麻毒素 A型肉毒毒素产气荚膜梭菌ε毒素镧系荧光免疫层析生物安全

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肉毒神经毒素特异性纳米抗体的制备及应用研究

肉毒神经毒素特异性纳米抗体的制备及应用研究

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作者：吕若梅昆明理工大学

学位级别：硕士

【背景】肉毒神经毒素（Botulinum neurotoxin,Bo NT）有A～G七个主要的血清型,可导致人类肉毒中毒的有A、B、E、F四种型别,其中以A、B型中毒病例最多。Bo NT主要作用于人或动物的神经细胞,可以阻断神经递质的传递,从而导致肌肉松弛麻痹... 详细信息

【背景】肉毒神经毒素（Botulinum neurotoxin,Bo NT）有A～G七个主要的血清型,可导致人类肉毒中毒的有A、B、E、F四种型别,其中以A、B型中毒病例最多。Bo NT主要作用于人或动物的神经细胞,可以阻断神经递质的传递,从而导致肌肉松弛麻痹,严重者会因呼吸肌麻痹致死,是重要的致死性毒素战剂和生物恐怖剂,因此建立Bo NT精准的检测方法是非常必要的。绝大多数检测方法都离不开高质量的抗体,而纳米抗体具有亲和力高,稳定性好、易生产改造等优点是众多抗体的良好替代品。因此,制备实用性的纳米抗体并应用在Bo NT检测方法上具有重要的军事意义和科学价值。【目的】本研究的目的是根据检测试验方案的需要,制备出抗Bo NT特异性的纳米抗体,并把制备出的纳米抗体应用于Bo NT的检测中,建立针对Bo NT/A和Bo NT/B的多种检测技术。【方法与结果】（1）将本实验室保存的肉毒梭菌复苏活化、扩大培养及产毒培养,再通过酸沉淀和硫酸铵沉淀完成毒素的粗提取,最后通过凝胶过滤层析和疏水层析完成精细纯化,获得纯度较高的A型肉毒毒素和B型肉毒毒素,通过小鼠致死试验验证毒素的LD分别为1.01 ng/kg和2.5 ng/kg。（2）对文献调研中获得的抗Bo NT纳米抗体进行表位分析,选择其中6个纳米抗体进行改造。改造方式包括:N端添加Trx蛋白标签;C端添加6×his标签将抗Bo NT/A和Bo NT/B的抗体进行配对串联;与HRP融合表达,并对HRP进行活化。将设计改造的6个纳米抗体通过大肠杆菌表达系统进行重组表达,并利用亲和层析技术和凝胶过滤层析进行纯化,最终获得高纯度的纳米抗体。根据生物膜干涉技术测定各个重组纳米抗体的亲和力,结果显示,与纳米抗体原有亲和力相比,融合了各种标签或蛋白对其亲和力并无影响,并且靶向同一抗原两个不同表位的纳米抗体串联有助于提高亲和力,各重组纳米抗体的亲和力在1～0.01 n M之间。（3）利用改造后的重组纳米抗体建立了针对Bo NT/A和Bo NT/B的ELISA检测方法,并制备了镧系高敏荧光试纸条,经过各条件优化,可使ELISA的最低检测限为0.1 ng/ml,镧系高敏荧光试纸条的最低检测限为0.05 ng/ml。【结论】本研究制备出了抗Bo NT特异性的纳米抗体,并把制备出的纳米抗体应用于检测中,建立针对Bo NT/A和Bo NT/B的ELISA检测方法和镧系高敏荧光检测试纸条。本研究建立的检测方法与国际“金标准”小鼠致死试验相比,所需时间更短,操作更简便。且纳米抗体独具的特性使得各检测方法成本更低,稳定性更好,批间差异更小,具有良好的可实施性。在2021年德国罗伯特科赫研究所（Robert Koch Institute）组织的生物武器核查实验室国际联试EQAE-Bo NT中,本研究所建立的方法能够对考核样品中Bo NT/A和Bo NT/B进行正确的检测和鉴定,发挥了重要的作用。

关键词：肉毒神经毒素纳米抗体检测 ELISA 镧系荧光

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