检索结果-南通市图书馆

银染mrna差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

中国兽医学报 2006年第4期26卷 369-372页

作者：韩红玉姜连连赵其平董辉陈兆国林矫矫黄兵中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

以柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料,用银染mrna差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板,用O ligo(dT)12GG为锚定引物和... 详细信息

以柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料,用银染mrna差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板,用O ligo(dT)12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RT-PCR,产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5条差异条带,进行2次PCR扩增,产物回收后与PGEM-T-easy V ector连接转化。经PCR鉴定正确后,再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现,地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段(可能为新的基因片段),这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫抗药性银染mrna差异显示基因克隆

来源：

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

银染mrna差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性...

引用

中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会

作者：韩红玉姜连连赵其平董辉陈兆国黄兵中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室

球虫病是一个普遍存在并严重危害畜禽业的一种肠道寄生虫病,是养鸡生产中最耗资和最普遍的疾病之一.目前,球虫病的控制主要依赖于药物防治,由于抗球虫药的长期使用,使得鸡球虫抗药性的产生已成为无法避免的问题,但球虫抗药性产生的机理... 详细信息

球虫病是一个普遍存在并严重危害畜禽业的一种肠道寄生虫病,是养鸡生产中最耗资和最普遍的疾病之一.目前,球虫病的控制主要依赖于药物防治,由于抗球虫药的长期使用,使得鸡球虫抗药性的产生已成为无法避免的问题,但球虫抗药性产生的机理至今仍然不清楚.利用分子生物学手段去探讨抗药性基因可能是球虫抗药性研究的一条重要途径,如果能分离到球虫抗药性相关基因,将有助于弄清球虫抗药性的产生方式和作用机制,从而阻止敏感虫株诱变为抗药性虫株,可从根本上防止球虫抗药性的产生。因此运用现代分子生物学技术分离、鉴定鸡球虫抗药性相关基因将具有十分重要的意义。为了探索球虫抗药性产生和发展的原因,确定与这一过程相关的基因,我们采用了银染mrna 差异显示技术,初步分析了Eimeria tenella 抗药株与敏感株之间差异表达的基因。首先以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫(***)敏感株孢子化卵囊和两个抗药株(马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株)孢子化卵囊为材料,提取各自的Total RNA,用DNase 消化后酚:氯仿抽提、紫外分光光度计定量及甲醛变性凝胶电泳鉴定其完整性后用于DD-PCR.分别取三个虫株一定量的Total RNA 为模板,用三种引物dT12AG、dT12CG、dT12GG等量混合为dT12MG 作为锚定引物,同时分别以dT12AG、dTl2CG、dT12GG 为锚定引物,利用SuperScripⅡ反转录酶进行反转录,合成cDNA 第一链做模板进行PCR,通过试验从4种锚定引物和20种随机引物中确定了其中dT12GG 锚定引物和2种随机引物扩增的结果较好。同时通过试验选择不同的模板量、不同的引物量、不同的退火温度和延伸时间进行PCR 扩增,最终确定了最佳的PCR 反应条件:25ul 反应体系中0.8umol/LdT12GG、0.8umol/L 随机引物、200umol/LdNTP、1.8mmol/LMgcl2和0.3ulTag酶。最佳循环条件为94℃5min;94℃30s、41℃2min、72℃lmin 2个循环;94℃30s、45℃2min、7212 lmin 38个循环;72℃10min。PCR 扩增后产物经6%尿素变性聚丙稀酰胺凝胶进行电泳,电泳结束后用银染的方法进行染色显示差异条带。从两个抗药株的电泳条带中分别回收5条差异条带,进行二次PCR 扩增,产物纯化回收后与PGEM-T-easy Vector 连接转化培养。经PCR 鉴定正确后,再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较,结果发现地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA 片段可能为新的基因片段。目前,我们正在利用其他方法扩增全长cDNA,并对其功能进行深入探讨,这些全长基因的分离和鉴定将为探索球虫抗药性的机理增添新的理论依据。

关键词：柔嫩艾美耳球虫抗药性银染mrna差异显示基因克隆

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

超级杂交水稻两优培九光抑制胁迫下差异表达的基因及其遗传来源

超级杂交水稻两优培九光抑制胁迫下差异表达的基因及其遗传来源

引用

作者：姜国强山东农业大学

学位级别：硕士

本文运用改进的银染mrna差异显示技术,以超级杂交水稻两优培九(Oryza sativa,indica cultivar-group)及其母本培矮64S、父本9311为试材,研究了杂种在光抑制过程中差异表达的基因并探讨了其遗传来源。主要结果如下:1.银染聚丙烯酰胺凝胶... 详细信息

本文运用改进的银染mrna差异显示技术,以超级杂交水稻两优培九(Oryza sativa,indica cultivar-group)及其母本培矮64S、父本9311为试材,研究了杂种在光抑制过程中差异表达的基因并探讨了其遗传来源。主要结果如下:1.银染聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱用3个锚定引物与8个随机引物组成的24对引物组合分别与母本光抑制处理和对照、杂种光抑制处理和对照、父本光抑制处理和对照共6组水稻旗叶的总RNA进行RT-PCR,共得到24×6种PCR产物。以每对引物组合的扩增产物为一组进行PAGE并银染,共得到24张银染聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱。其中HT11G×HAP28这对引物组合没有扩增出有明显差异的杂种cDNA条带。2.差异条带及其基因表达类型从银染聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱上共发现167个光抑制处理与对照的表达水平有差异的杂种cDNA条带,说明杂种中大量基因的表达确实发生了变化并以此对光抑制逆境胁迫作出应答。这些差异条带在电泳图谱上表现为相应位置上光抑制处理与对照样品逆转录扩增产生的核酸条带的

关键词：水稻光抑制银染mrna差异显示基因克隆遗传来源

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：