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氯硝柳胺及其衍生物与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用

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高等学校化学学报 2009年第7期30卷 1314-1321页

作者：郭维吴勇权郑绿茵许丽荣范小林赣南师范学院江西省有机药物化学重点实验室赣州341000

以氯硝柳胺为原料合成了聚乙二醇200基氯硝柳胺.采用荧光光谱、同步荧光光谱、紫外吸收光谱和圆二色谱研究了氯硝柳胺及其衍生物与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)的相互作用.结果表明,两种药物分子对KLH的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver-B... 详细信息

以氯硝柳胺为原料合成了聚乙二醇200基氯硝柳胺.采用荧光光谱、同步荧光光谱、紫外吸收光谱和圆二色谱研究了氯硝柳胺及其衍生物与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)的相互作用.结果表明,两种药物分子对KLH的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver-Burk方程计算出不同温度下结合常数K,但是聚乙二醇200基氯硝柳胺与KLH的作用相对较弱;由Van′t Hoff方程计算出ΔH和ΔS平均值,结合力主要为静电作用力;热力学函数计算结果表明,氯硝柳胺及其衍生物与KLH的作用过程是一个熵增加、Gibbs自由能降低的自发分子间作用过程;根据Frster非辐射能量转移机制求得给体与受体间的结合距离r均小于7nm;同步荧光光谱表明,氯硝柳胺及其衍生物能够被血蓝蛋白存储和转运,但结合时对蛋白构象有一定影响;圆二色谱测得加入两种药物后,KLH的α-螺旋含量均降低,二级结构发生改变.通过比较氯硝柳胺及其衍生物与KLH的相互作用,初步探讨了分子结构与其结合能力之间的联系.

关键词：钥孔戚血蓝蛋白紫外吸收光谱荧光光谱同步荧光光谱圆二色谱

钥孔戚血蓝蛋白诱导Balb/c小鼠脾细胞Th1/Th2失衡的研究

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山东医药 2008年第10期48卷 21-23页

作者：宋宁李淑瑾丛斌魏春华丛军倪志宇河北医科大学基础医学院河北省赵县人民医院

目的探讨钥孔戚血蓝蛋白(KLH)诱导Balb/c小鼠脾细胞Th1/Th2失衡的特点,为药物干预Th1/Th2失衡奠定基础。方法以KLH(完全弗氏佐剂(CFA)免疫Balb/C小鼠并分离其脾细胞,ELISA法检测脾细胞上清中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12p40和Th2... 详细信息

目的探讨钥孔戚血蓝蛋白(KLH)诱导Balb/c小鼠脾细胞Th1/Th2失衡的特点,为药物干预Th1/Th2失衡奠定基础。方法以KLH(完全弗氏佐剂(CFA)免疫Balb/C小鼠并分离其脾细胞,ELISA法检测脾细胞上清中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12p40和Th2型细胞因子IL-4、IL-5,以及血清Th1型抗体IgG2a和Th2型抗体IgG1水平。结果①免疫小鼠出现脾肿大、脾细胞计数升高。②免疫小鼠脾细胞IL-2于24 h明显升高,48 h达高峰;IL-4、IFN-γ和IL-5于24 h轻度升高,96 h达高峰;各时间点IL-12p40均较低。③不同剂量基础或强化免疫均可致细胞因子升高,IL-4/IFN-γ升高。④免疫小鼠血清IgG1、IgG2a升高,以IgG1明显。结论KLH+CFA可诱导Balb/c小鼠脾细胞发生Th2型优势反应。

关键词：钥孔戚血蓝蛋白 Balb/c小鼠 Th1/Th2

光谱法研究硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用

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分析化学 2009年第3期37卷 378-382页

作者：郭维郑绿茵吴勇权许丽荣范小林赣南师范学院江西省有机药物化学重点实验室

采用荧光光谱和紫外吸收光谱研究了不同温度下硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)的相互作用。结果发现,KLH的特征荧光峰猝灭,硝苯柳胺对KLH的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver-Burk方程计算出不同温度下硝苯柳胺与KLH之间的结合常数... 详细信息

采用荧光光谱和紫外吸收光谱研究了不同温度下硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)的相互作用。结果发现,KLH的特征荧光峰猝灭,硝苯柳胺对KLH的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver-Burk方程计算出不同温度下硝苯柳胺与KLH之间的结合常数K分别为3.81×104L/mol(25℃)和3.01×104L/mol(37℃);由Van′tHoff方程计算出ΔH和ΔS平均值分别为-15.09kJ/mol和37.055Jmol-1K-1,二者之间的作用力主要为静电作用力;该过程是一个熵增加、Gibbs自由能降低的自发分子间作用过程;根据Frster非辐射能量转移机制求得给体与受体间的结合距离r为4.61nm,能量转移效率为0.0403。同步荧光光谱表明,硝苯柳胺能够被血蓝蛋白存储和转运,但结合时对蛋白构象有一定影响。

关键词：荧光光谱同步荧光光谱紫外吸收光谱硝苯柳胺钥孔戚血蓝蛋白

聚乙二醇200基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用

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分析科学学报 2010年第1期26卷 11-14页

作者：吴勇权郭维许丽荣唐彪生赵娇娇郑绿茵范小林赣南师范学院江西省有机药物化学重点实验室江西赣州341000

采用荧光光谱、紫外吸收光谱和圆二色谱(CD)研究了聚乙二醇200基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)的相互作用。结果表明,聚乙二醇200基硝苯柳胺对KLH的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver-Burk方程计算出不同温度下结合常数K,由Van’t... 详细信息

采用荧光光谱、紫外吸收光谱和圆二色谱(CD)研究了聚乙二醇200基硝苯柳胺与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)的相互作用。结果表明,聚乙二醇200基硝苯柳胺对KLH的荧光猝灭机制属于静态猝灭;由Lineweaver-Burk方程计算出不同温度下结合常数K,由Van’t Hoff方程计算出△H和△S平均值,结合力主要为静电作用力;根据F rster非辐射能量转移机制求得给体与受体间的结合距离r=5.76 nm;同步荧光光谱表明,聚乙二醇200基硝苯柳胺能够被KLH存储和转运,但结合时对蛋白的构象有一定的影响;圆二色光谱的数据表明相互作用后KLH的二级结构发生了改变:KLH的α-螺旋的含量从43.1%下降到37.8%。

关键词：硝苯柳胺钥孔戚血蓝蛋白荧光光谱紫外吸收光谱圆二色谱

八肽胆囊收缩素对经钥孔戚血蓝蛋白免疫小鼠T淋巴细胞亚群的影响

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中国病理生理杂志 2007年第3期23卷 423-427页

作者：宋宁李淑瑾丛斌魏春华丛军张风华马春玲倪志宇姚玉霞河北医科大学基础医学院河北石家庄050017 河北省赵县人民医院河北赵县051530

目的:探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对经钥孔戚血蓝蛋白(KLH)免疫小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法:雌性BALB/c小鼠KLH免疫同时分别给予不同剂量CCK-8。流式细胞法检测小鼠外周血及脾细胞中CD4+、CD8+T细胞阳性百分率;RT-PCR法检测脾细胞中Th... 详细信息

目的:探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对经钥孔戚血蓝蛋白(KLH)免疫小鼠T淋巴细胞亚群的影响。方法:雌性BALB/c小鼠KLH免疫同时分别给予不同剂量CCK-8。流式细胞法检测小鼠外周血及脾细胞中CD4+、CD8+T细胞阳性百分率;RT-PCR法检测脾细胞中Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-4 mRNA表达;ELISA法检测其培养上清中IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察小鼠肺组织病理变化。结果:CCK-8下调KLH免疫小鼠外周血及脾细胞中上升的CD4+、CD8+T细胞阳性百分率,降低CD4+/CD8+比值;进一步提高其IFN-γ mRNA表达和培养上清中IFN-γ分泌量,同时下调上升的IL-4 mRNA表达和培养上清中IL-4分泌量;减轻KLH免疫所致小鼠肺部炎症。结论:CCK-8可调节适应性免疫应答,抑制T细胞尤其是CD4+T细胞活性;抑制Th2功能,提高Th1功能,因此可能在变态反应性疾病的发病和防治中具有一定作用。

关键词：胆囊收缩素钥孔戚血蓝蛋白 T淋巴细胞亚群

钥孔戚血蓝蛋白诱导BALB/c小鼠变态反应性肺炎及机制初探

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国际呼吸杂志 2008年第13期28卷 769-771+833页

作者：宋宁李淑瑾丛斌魏春华丛军倪志宇马春玲姚玉霞于峰河北医科大学基础医学院河北省法医学实验室河北医科大学第二医院呼吸内科河北省赵县人民医院石家庄

目的探讨钥孔戚血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）诱导 BALB/c 小鼠变态反应性肺炎的特点及机制,为深入研究慢性肺部炎症性疾病奠定基础。方法以 KLH 免疫 BALB/c 小鼠,HE染色观察小鼠肺组织病理变化;[;H]TdR 法检测脾细胞增殖... 详细信息

目的探讨钥孔戚血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin,KLH）诱导 BALB/c 小鼠变态反应性肺炎的特点及机制,为深入研究慢性肺部炎症性疾病奠定基础。方法以 KLH 免疫 BALB/c 小鼠,HE染色观察小鼠肺组织病理变化;[;H]TdR 法检测脾细胞增殖;流式细胞法检测外周血及脾细胞中 CD4;、C138;T 细胞阳性百分率;RT-PCR 法检测脾细胞中 Th1型细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）和 Th2型细胞因子白介素4（IL-4）mRNA 表达;ELISA 法检测脾细胞培养上清中 IFN-γ、IL-4含量及血清中 Th1型抗体 IgG;a和 Th2型抗体 IgG;水平。结果①KLH 免疫致小鼠变态反应性肺炎;②KLH 免疫促进小鼠脾细胞增殖;③KLH 免疫致小鼠CD4;T 细胞过度活化;④KLH 免疫致小鼠 Th2优势反应。结论 KLH 免疫使小鼠免疫细胞活化并发生变态反应性肺炎,CD4;T 细胞过度活化和 Th2优势应答可能参与了其发病过程。

关键词：钥孔戚血蓝蛋白 BALB/c 小鼠变态反应性肺炎 Th1/Th2 CD4 /CD8

重金属离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用的光谱性质研究

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重金属离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用的光谱性质研究

作者：刘静依赣南师范学院

学位级别：硕士

血蓝蛋白是软体动物的呼吸蛋白，在软体生物生命活动中占有重要地位。研究重金属离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用，有利于探索重金属对软体生物的毒害作用机理。本论文主要采用了紫外可见光谱法，荧光光谱法以及循环伏安法研究重金属离子H... 详细信息

血蓝蛋白是软体动物的呼吸蛋白，在软体生物生命活动中占有重要地位。研究重金属离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用，有利于探索重金属对软体生物的毒害作用机理。本论文主要采用了紫外可见光谱法，荧光光谱法以及循环伏安法研究重金属离子Hg(II)、Cd(II)、Cu(II)和Pb(II)分别与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用。第一章，主要综述重金属离子与蛋白质相互作用的研究进展，同时介绍了药物分子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用的研究工作。阐述了重金属离子与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)相互作用的研究意义。第二章，汞离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用的光谱性质研究。在紫外光谱中，Hg(II)离子的加入对KLH的紫外特征吸收有明显的增色效应，特别是对210nm处由肽键上羰基上的n-π*电子跃迁引起的吸收峰影响较为明显，并且明显有红移现象，表明Hg(II)的加入使得KLH分子所处微环境的疏水性增大，蛋白质分子伸展，其中的α-螺旋含量减少，改变了蛋白质分子的二级构象。荧光光谱性质表明，Hg(II)离子的加入降低了KLH荧光强度，反应的动态猝灭常数Ksv值为8.04×10及动态猝灭速率Kq值为8.04×10，说明Hg(II)与KLH的猝灭反应为静态猝灭。另外计算得到Hg(II)与KLH的结合常数为1.53×10L/mol及结合位点数为0.9053。热力学函数值表明两者之间主要作用力为疏水键作用。循环伏安实验表明，KLH的加入会改变Hg(II)的电化学行为，降低Hg(II)的氧化电流强度，验证了Hg(II)与KLH相互作用。第三章，镉离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用的光谱性质研究。在紫外光谱中，Cd(II)离子的加入对KLH的紫外特征吸收没有明显的影响，表明Cd(II)的加入没有改变蛋白质分子的二级结构。荧光光谱性质表明，Cd(II)离子的加入降低了KLH荧光强度，反应的动态猝灭常数Ksv值为7.82×10及动态猝灭速率Kq值为7.82×10，说明Cd(II)与KLH的猝灭反应为静态猝灭。另外计算得到Cd(II)与KLH的结合常数为4.76×106L/mol及结合位点数为1.3268。热力学函数值表明两者之间主要作用力为范德华力作用。循环伏安实验表明，KLH的加入会改变Cd(II)的电化学行为，降低Cd(II)的氧化电流强度，验证了Cd(II)与KLH相互作用。第四章，铜离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用的光谱性质研究。在紫外光谱中，Cu(II)离子的加入对KLH的紫外特征吸收有明显的增色效应，特别是对210nm处由肽键羰基上n-π*电子跃迁所引起的吸收有明显影响，并且有明显的红移现象，表明Cu(II)的加入使得KLH分子所处微环境的疏水性增大，蛋白质分子伸展，其中的α-螺旋含量减少，改变了蛋白质分子的二级构象。荧光光谱性质表明，Cu(II)离子的加入降低了KLH荧光强度，反应的动态猝灭常数Ksv值为4.15×10以及动态猝灭速率Kq值4.15×10，说明Cu(II)与KLH的猝灭反应为静态猝灭。另外计算得到Cd(II)与KLH的结合位点数0.9053及结合常数6.62×10L/mol。热力学函数值表明两者之间主要作用力为疏水键作用力。循环伏安实验表明，KLH的加入改变Cu(II)的电化学行为，增大体系的氧化电流强度，验证Cu(II)与KLH相互作用。第五章，铅离子与钥孔戚血蓝蛋白相互作用的光谱性质研究。在紫外光谱中，Pb(II)离子的加入对KLH的紫外特征吸收有明显的增色效应，特别是对210nm处由肽键羰基上n-π*电子跃迁所引起的吸收有明显影响，并且有明显的红移现象，表明Pb(II)的加入使得KLH分子所处微环境的疏水性增大，蛋白质分子伸展，其中的α-螺旋含量减少，改变了蛋白质分子的二级构象。荧光光谱性质表明，Pb(II)离子的加入降低了KLH荧光强度。计算动态猝灭常数Ksv值3.57×10以及动态猝灭速率Kq值3.57×10，说明反应是静态猝灭。另外计算得到Pb(II)与KLH反应的结合位点数0.9669及结合常数2.66×10L/mol。热力学函数值表明两者之间主要作用力为范德华力作用。循环伏安实验表明，KLH的加入改变Pb(II)的电化学行为，明显降低Pb(II)的氧化电流强度，验证Pb(II)与KLH相互作用。第六章，分别从紫外光谱法、荧光光谱法和电化学方法三个方面比较这四种重金属元素对KLH分子结构变化的不同，探讨每种元素与KLH分子相互机理与作用方式，总结这四种重金属元素与KLH相互作用规律。

关键词：重金属钥孔戚血蓝蛋白紫外可见光谱法荧光光谱法

抗原钥孔戚血蓝蛋白(KLH)对金鱼(Carassius auratus)体液免疫的影响研究

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渔业研究 2017年第3期39卷 165-171页

作者：郭睿杨小强江小斌王洪城陈秀霞方冬兰龚晖福州市海洋与渔业技术中心福建福州350026 福建省农业科学院生物技术研究所福建福州350003

以钥孔戚血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)为抗原、Montanide ISA 763 A为佐剂开展金鱼免疫试验,检测血清抗体水平,评估金鱼体液免疫应答情况,以期为其免疫策略的制定提供依据。试验在水温15~18℃时进行,采用(20±3)g体重的健康... 详细信息

以钥孔戚血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)为抗原、Montanide ISA 763 A为佐剂开展金鱼免疫试验,检测血清抗体水平,评估金鱼体液免疫应答情况,以期为其免疫策略的制定提供依据。试验在水温15~18℃时进行,采用(20±3)g体重的健康鱼150尾,随机均分为三组,第一组使用(KLH+Montanide ISA 763 A)免疫,第二组仅使用KLH免疫,第三组注射等量的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered solution,PBS)为对照,历经三次免疫并对4次采样的血清样本进行ELISA检测。结果显示,第一组和第二组均检测到较高的抗KLH抗体水平,在第二次、第三次免疫后,添加ISA佐剂的第一组抗体仍维持较高水平,而在仅用KLH免疫的第二组抗体水平下降,并降低到对照组水平,表明使用(KLH+Montanide ISA 763 A)免疫金鱼可以获得更加持久和稳定的免疫效果,而仅注射KLH的免疫效果较为短暂。研究还说明金鱼在低温情况下,可以产生良好的体液免疫应答。

关键词：钥孔戚血蓝蛋白金鱼体液免疫 Montanide ISA 763 A

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氯硝柳胺与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用研究

氯硝柳胺与钥孔戚血蓝蛋白的相互作用研究