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基于EST-SSR的钟花樱与近缘种的聚类分析及嫁接亲和性研究

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广西植物 2024年

作者：刘夔李梓函张依郝文洁姜蕾叶琦付涛宁波城市职业技术学院/浙江园林绿化技术协同创新中心

该研究以16种樱属植物为研究材料，利用EST-SSR分子标记技术对其进行聚类分析，旨在为钟花樱及其近缘种的物种分类、物种资源保护、砧木选择和杂交亲本选择提供分子水平的依据和技术支持。结果表明：（1）遗传多样性分析发现17对EST-SS... 详细信息

该研究以16种樱属植物为研究材料，利用EST-SSR分子标记技术对其进行聚类分析，旨在为钟花樱及其近缘种的物种分类、物种资源保护、砧木选择和杂交亲本选择提供分子水平的依据和技术支持。结果表明：（1）遗传多样性分析发现17对EST-SSR引物共检测出98个等位基因，每对引物平均5.76个等位基因，有效等位基因（Ne）为1.16～7.64个，平均值为3.22个；观察杂合度（Ho）为0.04～0.54，平均值为0.28；期望杂合度（He）为0.58～0.92，平均值为0.77;Shannon’s指数（I）为1.38～2.65，平均值为2.14；多态信息含量（PIC）为0.62～0.92，平均值为0.78。（2）聚类分析结果发现除了野生早樱和黑樱桃之外，其余14个物种亲缘关系密切，聚为一大类（遗传相似系数Gs介于0.653 1～0.918 4），其中，钟花樱和高盆樱之间的亲缘关系最高（Gs=0.918 4），钟花樱和野生早樱之间的亲缘关系最低（Gs=0.775 5），因此，建议使用亲缘关系较远的野生早樱和黑樱桃与钟花樱进行杂交实验。（3）在我国南方的生产实践中，已出现以华中樱为砧木、以钟花樱为接穗嫁接的高接苗。因此，从理论上讲，与钟花樱的亲缘关系较近的华中樱、山樱、散毛樱和浙闽樱等也可以作为砧木，但还应考虑砧木的抗性、长势、繁殖和寿命等。通过嫁接实验得知，华中樱和山樱作为砧木嫁接钟花樱成活率最高（≥80%），与分子实验基本一致，比较适合作为嫁接钟花樱的砧木。该研究结果为钟花樱的选育、繁殖、保护和利用以及樱属之间的物种分类提供了分子依据。

关键词：樱属钟花樱遗传多样性亲缘关系育种 EST-SSR

基于InDel标记的钟花樱DNA指纹图谱构建及杂交后代分子鉴定

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基于InDel标记的钟花樱DNA指纹图谱构建及杂交后代分子鉴定

作者：阳秀玫中南林业科技大学

学位级别：硕士

钟花樱(Prunus campanulata(Maxim.)Yü et Li)是一种常见的早春花木,具有树形优美、花色艳丽的特点,开发潜力大,以其为亲本的杂交后代同样具有很高的观赏价值。然而,目前没有对丰富多样的钟花樱种质资源进行系统性保护,尚未开展基于分... 详细信息

钟花樱(Prunus campanulata(Maxim.)Yü et Li)是一种常见的早春花木,具有树形优美、花色艳丽的特点,开发潜力大,以其为亲本的杂交后代同样具有很高的观赏价值。然而,目前没有对丰富多样的钟花樱种质资源进行系统性保护,尚未开展基于分子标记技术的DNA指纹图谱构建研究,且杂交后代鉴定主要通过形态特征判定,存在周期过长的问题。目前尚未见到基于钟花樱全基因组开发InDel标记的研究报道,没有可参考的候选标记。本文以‘湘妍’全基因组序列为基础,对18份钟花樱种质资源进行重测序,系统地挖掘钟花樱的InDel位点信息,并对随机选择的标记进行筛选和验证,将一批具有多态性的InDel标记应用于钟花樱核心种质资源DNA指纹图谱构建和杂交后代鉴定。主要研究结果如下:(1)以‘湘妍’为参考基因组,对18份钟花樱种质资源进行基因组重测序,得到InDel位点总计1048575个,其中插入位点583382个,缺失位点465193个。其中 Chrl～8染色体上分别有 144213、216256、145041、131224、169912、134917、101247、5765个,大小为1～10 bp的InDel位点有943059个,11～100 bp 有 102876个,100 bp以上有2604个。在8条染色体上随机选择大小为100 bp以上的位点94个进行引物设计。(2)随机筛选40对引物进行多态性验证,其中具有多态性的引物有31对,没有多态性的引物有9对,多态性比例为77.5%,应用分辨率较高的IDDE2、IDDE4、IDDE7、IDDG1和IDDH5共5对多态性引物能将7份核心种质资源钟花樱完全区分,得到相应DNA指纹图谱。(3)随机筛选54对引物,以亲本‘湘妍’和‘飞寒’的DNA为模板进行PCR扩增,验证引物多态性并得到引物共16对,多态性比例为29.6%,其中在‘湘妍’×‘飞寒’杂交实生苗中扩增出差异性条带的引物共5对,对‘湘妍’×‘飞寒’杂交实生苗共12株进行鉴定,鉴定结果全为真杂种,鉴定率为100%。(4)随机筛选84对引物,以亲本‘湘妍’和‘湘韵’的DNA为模板进行PCR扩增,验证引物多态性并得到引物共21对,多态性比例为25%,其中在‘湘妍’×‘湘韵’杂交实生苗中扩增出差异性条带的引物共2对,对‘湘妍’×‘湘韵’杂交实生苗共79株进行鉴定,鉴定结果表明其中64株为真杂种,鉴定率为81%。

关键词：钟花樱 InDel标记 DNA指纹图谱杂种鉴定

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野生钟花樱嫁接繁育研究

林业与环境科学 2024年第4期40卷 80-86页

作者：王运昌谢金兰肖腊兴范剑明林军黄锦荣罗万业陈新强梅州市国有洲瑞林场广东梅州514257 梅州市农林科学院林业研究所/广东省林下特色资源(梅州)开发应用工程技术研究中心广东梅州514011

为提高钟花樱Prunus campanulata的繁殖系数,更好地保护和利用野生钟花樱种质资源,以钟花樱实生苗为砧木,野生钟花樱优株为接穗,研究嫁接时间、嫁接方法、砧木大小对嫁接成活率及嫁接苗生长的影响。结果表明,野生钟花樱在广东梅州以冬季... 详细信息

为提高钟花樱Prunus campanulata的繁殖系数,更好地保护和利用野生钟花樱种质资源,以钟花樱实生苗为砧木,野生钟花樱优株为接穗,研究嫁接时间、嫁接方法、砧木大小对嫁接成活率及嫁接苗生长的影响。结果表明,野生钟花樱在广东梅州以冬季1月中旬嫁接最为适宜,嫁接成活率达93.33%,显著高于其他嫁接时间(P钟花樱嫁接成活率、嫁接苗苗高和嫁接苗地径产生显著影响(P1.0 cm的砧木嫁接成活率显著高于地径1.0 cm的1年生实生苗作为砧木。

关键词：钟花樱嫁接繁育

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钟花樱野生群落的生态特征

南京林业大学学报（自然科学版） 2004年第6期28卷 111-114页

作者：许克福王贤荣阎道良伊贤贵安徽省马鞍山市园林绿化管理处安徽马鞍山243011 南京林业大学江苏南京210037

通过对钟花樱野生群落典型样地的调查,分析了该群落植物组成、结构、类型,以及各主要种群的相对多度、相对频度、重要值及优势种。结果表明,钟花樱野生群落种类组成有44科78属98种,钟花樱一般零散分布于次生林中或成熟林的边缘地带,在... 详细信息

通过对钟花樱野生群落典型样地的调查,分析了该群落植物组成、结构、类型,以及各主要种群的相对多度、相对频度、重要值及优势种。结果表明,钟花樱野生群落种类组成有44科78属98种,钟花樱一般零散分布于次生林中或成熟林的边缘地带,在成熟林中很难更新,为群落中的优势树种,各样地的群落种类组成差异较明显,年龄结构显示钟花樱为衰退种群。

关键词：钟花樱群落生态学特征

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钟花樱组织培养中多因子正交试验研究

安徽农业大学学报 2008年第2期35卷 169-173页

作者：王贤荣荣冬青南京林业大学森林资源与环境学院南京210037

采用正交设计方法,研究6-BA、NAA、2,4-D及外植体4种不同因素及其组合对钟花樱愈伤组织及丛生芽诱导率的影响。试验结果统计分析表明,外植体是诱导愈伤组织和诱导丛生芽的最主要因素。诱导愈伤组织的最佳组合为MS+1.0 mg.L-1BA+1.0 mg.L... 详细信息

采用正交设计方法,研究6-BA、NAA、2,4-D及外植体4种不同因素及其组合对钟花樱愈伤组织及丛生芽诱导率的影响。试验结果统计分析表明,外植体是诱导愈伤组织和诱导丛生芽的最主要因素。诱导愈伤组织的最佳组合为MS+1.0 mg.L-1BA+1.0 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-12,4-D+叶片,其诱导率为94.5%;诱导丛生芽的最佳组合为MS+1.0 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1NAA+带芽茎段,其诱导率为37.5%;增殖培养中,以MS+1.0 mg.L-1BA+0.05 mg.L-1NAA效果最好,增殖率为460%;当株高在2 cm以上时,转入1/2MS+0.8 mg.L-1IBA+0.2 mg.L-1NAA生根培养基上,接种30 d后,生根率可达90%,移栽成活率达92%。

关键词：钟花樱正交试验组织培养

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钟花樱离体繁殖技术体系研究

钟花樱离体繁殖技术体系研究

作者：付影福建农林大学

学位级别：硕士

钟花樱(Cerasus campanulata)具有冠型美,色彩艳丽,花期长等特点,是优良的园林观赏树种,但是钟花樱自身结实量少,采种期短,采种困难,且扦插繁殖以嫩枝扦插为主,受限制较多,致使钟花樱可用资源极少,处于渐危状态。本研究对钟花樱离体繁... 详细信息

钟花樱(Cerasus campanulata)具有冠型美,色彩艳丽,花期长等特点,是优良的园林观赏树种,但是钟花樱自身结实量少,采种期短,采种困难,且扦插繁殖以嫩枝扦插为主,受限制较多,致使钟花樱可用资源极少,处于渐危状态。本研究对钟花樱离体繁殖技术体系进行了探索,分别对外植体的表面灭菌、启动培养、继代增殖培养、生根培养以及炼苗移栽等方面进行了研究,着重探讨了组织培养过程中最佳培养基配方及培养程序,为以后钟花樱的遗传转化及品种改良等研究奠定技术基础,并为钟花樱的组培快繁提供了技术理论依据,具有重要的经济和科学价值。主要研究结果如下: 1钟花樱不同外植体材料消毒的难易程度相差较大。顶芽消毒最易,叶消毒最难,茎段的消毒效果居中。顶芽的消毒以70%酒精处理30-45s后,再以0.1%HgCl溶液灭菌5min的处理效果最好,存活率达74.2%;茎段灭菌以70%酒精处理1min后,再以0.1%HgCl溶液灭菌7min的处理效果最好,存活率达65.5%;叶的灭菌较为困难,消毒效果最好的为70%酒精处理30-45s后,再以0.1%HgCl溶液灭菌8min的处理,但其污染率也高达60.7%,存活率仅为14.3%。 2启动培养试验结果表明: (1)在附加不同浓度NAA的MS培养基上,钟花樱嫩枝均可诱导愈伤组织分化,但未能诱导出芽。NAA浓度对外植体启动速度有极显著影响,当NAA浓度为0.1mg·L时,外植体启动速度最快,平均启动速度为10.71d。 (2)以MS为基本培养基,6-BA浓度0.1-5.0mg·L均可诱导愈伤组织分化和芽体分化。6-BA浓度对钟花樱嫩枝的启动培养速度、愈伤组织分化率和芽诱导率均有极显著影响。当6-BA浓度为5.0mg·L时,外植体启动速度最快,平均启动速度仅为11.07d:愈伤组织分化率也最大,为89.47%;当6-BA浓度为4.0mag·L时,芽诱导率达到最大,为52.60%。 (3)在附加不同浓度6-BA、NAA的MS、改良WH、改良MS培养基上,各处理均有不同程度的愈伤组织形成。统计分析结果表明:基本培养基对愈伤组织分化率影响显著,6-BA浓度对愈伤组织分化率影响极显著,NAA浓度对愈伤组织分化率无显著影响:基本培养基和6-BA浓度对芽诱导率和平均芽数量均有显著性的影响。适合钟花樱嫩枝启动培养的培养基组合为:MS+6-BA2.0mg·L+NAA 0.1mg·L,愈伤组织分化率较低,为38.89%:芽诱导率和平均芽数量均最大,分别为94.44%、3.78。 3在增殖培养试验中,6-BA浓度对增殖系数有极显著影响,NAA浓度对增殖系数有显著影响。6-BA、NAA、蔗糖三者对钟花樱增殖培养效果影响的主次关系为:6-BA＞NAA＞蔗糖。MS+6-BA3.0mg·L+NAA 0.01mg·L+蔗糖30g·L组合,增殖系数最高达7.44。 4 MS+NAA 0.1mg·L+GA 0.3mg·L较有利于壮苗培养。经过壮苗培养,芽长势好,木质化程度高,有利于提高生根率和移栽成活率。MS+NAA 0.1 mg·L+GA 0.3mg·L较有利于壮苗培养。 5生根培养试验结果表明: (1)基本培养基、IBA和IAA三者对生根率的影响的主次关系为:IBA＞IAA＞基本培养基。基本培养基、IBA浓度、IAA浓度对生根率均有极显著性影响。处理:1/2 MS+IBA 1.0mg·L+IAA0.5mg·L+蔗糖20g·L的生根率最高,达82.35%,且植株长势好,生根快,根长3-4cm。 (2)ABT、ABT各浓度均可诱导生根,以处理:1/2 MS+ABT 1.5mg·L+蔗糖20g·L生根率最高,达93.05%;其次为:1/2MS+ABT 3.0mg·L蔗糖20g·L,生根率达71.30%,但植株长势较差。 6炼苗移栽:不同炼苗方式对组培苗成活率有极显著影响。将生根瓶苗移离培养室,常温条件下闭瓶锻炼6d,开瓶锻炼6d,组培苗平均成活率最高,为93.81%。不同基质处理对移栽成活率有极显著影响。最有利于移栽的基质为蛭石:珍珠岩=1:1,平均成活率高达94.07%。

关键词：钟花樱离体繁殖启动培养增殖培养植株再生

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钟花樱群落特征与繁殖技术研究

钟花樱群落特征与繁殖技术研究

作者：闫道良南京林业大学

学位级别：硕士

樱属(Cerasus)植物钟花樱(Cerasus cerasoides(***)var. campanulata(Koidz)*** et Shang )因其具有极高的可观赏性,深受人们的喜爱,但对其研究利用却很少,为开发利用这一优良野生资源,本文着重对钟花樱的野生群落结构特征,组培繁殖等... 详细信息

樱属(Cerasus)植物钟花樱(Cerasus cerasoides(***)var. campanulata(Koidz)*** et Shang )因其具有极高的可观赏性,深受人们的喜爱,但对其研究利用却很少,为开发利用这一优良野生资源,本文着重对钟花樱的野生群落结构特征,组培繁殖等方面进行了基础性的研究。首先,本文系统总结了樱属植物(包括钟花樱)在分类学、形态学、生态学、栽培繁殖、种子生理等方面的研究与发展现状,指出了樱属植物在研究、开发利用等方面需焏待解决的问题。首次对分布在江西崇义境内的钟花樱群落结构特征进行了重点研究,对群落的物种组成、垂直结构、物种的频度、重要值、种群动态及物种多样性等进行了全面分析。通过对6 个样地3000m2 的物种组成分析表明,樟科、山茶科、蔷薇科、壳斗科、金缕梅科等20 个优势科的物种个体数1588 株占全部科个体数1745 的91%。钟花樱群落物种组成以单属种组成占大多数,出现了热带中典型的科属植物,群落具有向热带过渡的性质。对群落中优势种的重要值分析,檵木最大(17.96),其次为钟花樱(17.89)、油茶(17.42)、毛竹(15.92)等。种群年龄结构分析表明,钟花樱、红栲、杉木、马尾松、南酸枣、漆树均为衰退种群,椤木石楠、虎皮楠、檵木、山茶为增长种群。钟花樱种群的龄级主要分布在中龄级(7.5cm≦D钟花樱的更新换代。　本文通过以钟花樱的幼嫩植物体种子为原材料培养无菌苗来获取用以大量增殖的外植体—茎段,整个试验过程着重在激素的配比组合及培养基方面进行了研究。对芽的诱导,较好的激素组合为MS+6-BA1.0+NAA0.1,芽的增殖率为3.121,芽均高0.673cm。对芽增殖与伸长较好的培养基为1/2MS+6-BA1.0+NAA0.1+GA30.5+肌醇25,芽的增殖系数4.7,芽均高1.314cm。通过5 次连续继代培养,芽的增殖系数达到7.31,丛芽率81.0%,可满足生产上大量繁殖的需要。根的再生在暗培养3d 后,以1/2MS+NAA0.2+IBA0.8+6-BA0.05—0.5 的培养基组合最适宜,生根率达90.0%。　在种子萌发试验中,低温湿沙贮藏显著打破种子休眠,提高发芽率。通过湿沙贮藏2个月的钟花樱种子发芽率为91.7%,而干藏4 个月后为39.3%,6 个月后下降到17.0%。种皮对种子的萌发有抑制作用,这可能是内源激素的作用。认为通过去种皮促使种子萌发与组培相结合可大量繁殖再生幼苗。

关键词：钟花樱群落特征植株组培再生种子生理

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不同混合基质对钟花樱容器苗生长的影响

广东农业科学 2021年第2期48卷 50-55页

作者：陈端妮叶小玲胡晓敏梁荣朱军叶超宏冯钦钊陈红锋广州天适集团有限公司广东广州510335 英德市旺地樱花种植有限公司广东英德513000 广东天适樱花悠乐园有限公司广东广州510920 中国科学院华南植物园广东广州510650

【目的】以1年生钟花樱实生苗为材料,探究不同混合基质对钟花樱容器苗生长的影响,并筛选出合适的基质组合。【方法】设置5种由育苗圃园土、泥炭土、椰糠和珍珠岩组成的混合基质,比较各组合的钟花樱容器苗存活率和生长指标。【结果】园土... 详细信息

【目的】以1年生钟花樱实生苗为材料,探究不同混合基质对钟花樱容器苗生长的影响,并筛选出合适的基质组合。【方法】设置5种由育苗圃园土、泥炭土、椰糠和珍珠岩组成的混合基质,比较各组合的钟花樱容器苗存活率和生长指标。【结果】园土+珍珠岩、泥炭土+珍珠岩、椰糠+珍珠岩、园土+椰糠+珍珠岩等4个混合基质组合间对钟花樱容器苗的地径、株高、分枝长度和冠幅影响无显著差异,其中椰糠+珍珠岩组合的钟花樱容器苗移栽1年后存活率仅66.7%,显著低于其他组合(≥80%);园土+泥炭土+珍珠岩组合的钟花樱容器苗移栽1年后存活率达100%,其地径、株高、分枝长度和冠幅分别平均增长5.63 mm、105.46 cm、68.61 cm和70.00 cm,显著高于其他处理。【结论】通过模糊隶属函数分析方法评价,在设置的试验环境下,1年生钟花樱容器苗的最佳混合基质组合为V_(园土)∶V_(泥炭土)∶V_(珍珠岩)=1∶1∶1。

关键词：钟花樱容器苗混合基质生长指标

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江西崇义钟花樱种群年龄结构及种群动态研究

南京林业大学学报（自然科学版） 2006年第5期30卷 47-50页

作者：王贤荣闫道良伊贤贵南京林业大学森林资源与环境学院江苏南京210037 南京大学盐生植物实验室江苏南京210093

通过分析江西崇义钟花樱(Cerasus ***)种群的年龄结构、编制静态生命表和绘制存活曲线,得出钟花樱种群的年龄结构主要分布在第Ⅲ和第Ⅳ立木级,个体数量比重占65.1%,这对维持其种群优势有重要意义。幼老年种群株数严重偏少,种群整体呈衰... 详细信息

通过分析江西崇义钟花樱(Cerasus ***)种群的年龄结构、编制静态生命表和绘制存活曲线,得出钟花樱种群的年龄结构主要分布在第Ⅲ和第Ⅳ立木级,个体数量比重占65.1%,这对维持其种群优势有重要意义。幼老年种群株数严重偏少,种群整体呈衰退状态。钟花樱种群数量的存活曲线呈偏正态分布,表明钟花樱幼苗死亡率高,其生境或种子存活率受到限制。因此,建议适度干扰或开辟林窗以利于钟花樱的自然繁衍,并着力对钟花樱种子进行人工采集及繁育试验。

关键词：钟花樱种群年龄结构种群动态江西崇义县