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生命的化学(中国生物化学会通讯) 1984年第1期 18-20页

作者：崔桂芳上海生物化学研究所

关于“钙调蛋白”本刊曾于81年(1),3和83年3(2),50发表了二篇文章,介绍了它的发现、结构和功能重要性。下面发表崔桂芳同志撰写的“钙调蛋白基因”一文,则是对前二文的补充和深入。如要对此问题有较全面的了解,建议三篇文章一并阅读。

关键词：钙调蛋白基因编码区电鳗 cDNA 氨基酸编码

平欧杂种榛钙调蛋白基因ChaCaM的克隆与表达分析

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园艺学报 2018年第7期45卷 1347-1358页

作者：杨丹李清朱利泉赵天田梁丽松王贵禧马庆华中国林业科学研究院林业研究所/国家林业和草原局林木培育重点实验室北京100091 西南大学农学与生物科技学院重庆400716 国家林业和草原局榛子工程技术研究中心北京100091

以平欧杂种榛(Corylus heterophylla×***)品种‘达维’为材料,基于转录组测序数据,利用RACE技术克隆钙调蛋白基因,通过生物信息学进行序列预测分析,并利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同组织和自交不亲和授粉后不同时间雌蕊中的表达... 详细信息

以平欧杂种榛(Corylus heterophylla×***)品种‘达维’为材料,基于转录组测序数据,利用RACE技术克隆钙调蛋白基因,通过生物信息学进行序列预测分析,并利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同组织和自交不亲和授粉后不同时间雌蕊中的表达模式。克隆获得一个钙调蛋白基因序列,命名为ChaCaM(Gen Bank登录号:KY211037),其开放阅读框为450 bp,编码149个氨基酸,分子量16.8476 kD。生物信息学分析表明,ChaCaM为酸性稳定蛋白,属于疏水性蛋白,无跨膜域和信号肽存在,主要定位于细胞质基质中,存在糖基化和磷酸化位点。序列分析表明,ChaCaM包含两个EFh结构域,与其他物种的CaM高度相似。系统进化树表明,ChaCaM与烟草、可可和萝卜等的CaM亲缘关系极近,聚类在同一分支下。基因表达分析表明,ChaCaM在平欧杂种榛不同组织中的表达具有差异,且在自交不亲和授粉后的雌蕊中具有明显的表达量变化。ChaCaM具有典型的钙调蛋白基因特征,主要定位于细胞质基质中;表现为组成型表达,推测其参与了榛属植物的自交不亲和反应。

关键词：平欧杂种榛钙调蛋白基因自交不亲和生物信息学分析表达分析

无瓣海桑Sonnerati aapertala钙调蛋白基因的克隆及序列分析

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厦门大学学报（自然科学版） 2002年第6期41卷 796-799页

作者：陈亮杨大林熊玲媛邵寒娟林涛王鸣刚厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

用高等植物钙调蛋白的保守序列设计两端引物 ,以红树植物海桑属无瓣海桑Sonneratiaapertala总DNA为模板 ,扩增出无瓣海桑钙调蛋白基因 ,并以之构建重组质粒pT ACaM .经测序分析比对 ,发现无瓣海桑钙调蛋白基因全长 1418bp ,其中第 1外显... 详细信息

用高等植物钙调蛋白的保守序列设计两端引物 ,以红树植物海桑属无瓣海桑Sonneratiaapertala总DNA为模板 ,扩增出无瓣海桑钙调蛋白基因 ,并以之构建重组质粒pT ACaM .经测序分析比对 ,发现无瓣海桑钙调蛋白基因全长 1418bp ,其中第 1外显子 76bp ,第 2外显子 371bp ,中间为一 946bp的内含子所隔开 .编码 148氨基酸的蛋白质 ,其编码区序列与已知的其他高等植物的钙调蛋白基因核苷酸序列同源性高达 85 %以上 .而蛋白质序列同源性达95

关键词： Sonneratia apertala 序列分析钙调蛋白基因无瓣海桑同源性基因克隆红树植物

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甜菊钙调蛋白基因的克隆及结构分析

厦门大学学报（自然科学版） 2002年第4期41卷 476-480页

作者：熊玲媛徐金森陈睦传厦门大学生命科学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

钙调蛋白 (Calmodulin)是生物细胞内一种重要的调控蛋白 ,通过其与靶酶的相互作用控制细胞正常的生长发育及细胞对外界环境变化的反应 .我们从甜菊顶芽和花芽中提取总RNA ,逆转录合成cDNA第一链 ,以此为模板 ,参考GenBank上已发表植物... 详细信息

钙调蛋白 (Calmodulin)是生物细胞内一种重要的调控蛋白 ,通过其与靶酶的相互作用控制细胞正常的生长发育及细胞对外界环境变化的反应 .我们从甜菊顶芽和花芽中提取总RNA ,逆转录合成cDNA第一链 ,以此为模板 ,参考GenBank上已发表植物的钙调蛋白基因序列合成 5’端和 3’端引物 ,利用多聚酶链式反应 (PCR)扩增并克隆得到了甜菊钙调蛋白基因的两个异型基因 .序列分析表明 ,它们均由 4 5 0个核苷酸组成 ,编码 14 8个氨基酸 .在核苷酸序列上与迄今已知的多种植物钙调蛋白基因均有很高的同源性 ,同源率在 83%以上 ,编码的氨基酸序列同源性更高 ,同源率高达 95 %以上 .这两个基因之间存在差异 ,其核苷酸序列同源率为 85 % ,编码区的氨基酸序列的同源率为 99% ,仅在第 12

关键词：结构分析甜菊钙调蛋白基因 cDNA克隆聚合酶链式反应基因克隆氨基酸序列

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新疆盐生植物的钙调蛋白基因克隆与序列分析

植物生理学通讯 2005年第2期41卷 163-167页

作者：蔡伦张富春曾幼玲马纪新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046

采用RT-PCR扩增的方法,从新疆盐生植物花花柴(Karelinia caspica)、盐爪爪(Kalidium foliadum)和盐桦(Betulahalophila)中分别克隆获得了450bp的cDNA片段。基因测序和序列同源性分析的结果表明,所克隆的基因片段均包含了钙调蛋白基因完... 详细信息

采用RT-PCR扩增的方法,从新疆盐生植物花花柴(Karelinia caspica)、盐爪爪(Kalidium foliadum)和盐桦(Betulahalophila)中分别克隆获得了450bp的cDNA片段。基因测序和序列同源性分析的结果表明,所克隆的基因片段均包含了钙调蛋白基因完整的读码框架。新疆花花柴钙调蛋白基因与盐爪爪钙调蛋白基因同源性达86%,盐爪爪与盐桦同源性达86.77%,花花柴与盐桦同源性达85.11%。新疆盐生植物钙调蛋白基因与其它已发表的植物钙调蛋白基因同源性均在80%以上,显示植物钙调蛋白基因具有高度保守性。

关键词：盐生植物新疆序列分析基因克隆钙调蛋白基因基因同源性 cDNA片段 PCR扩增同源性分析花花柴基因测序基因片段保守性

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甘蔗钙调蛋白基因的克隆及序列分析

热带作物学报 1995年第S1期16卷 59-64页

作者：金志强彭世清孔德謇郑学勤林俊芳陈如凯中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室福建农业大学甘蔗综合研究所

从甘蔗（ＳａｃｃｈａｒｕｍｓｐｅｃｉｃｓｈｙｂｒｉｄＣＶ．）茎顶端分生组织分离总ＲＮＡ，经反转录合成ｃＤ－ＮＡ第一条链，以此为模板进行多聚酶链式反应（ＰｏｌｙｍｃｒａｓｅＣｈａｉｎＲｃａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ），产物为一... 详细信息

从甘蔗（ＳａｃｃｈａｒｕｍｓｐｅｃｉｃｓｈｙｂｒｉｄＣＶ．）茎顶端分生组织分离总ＲＮＡ，经反转录合成ｃＤ－ＮＡ第一条链，以此为模板进行多聚酶链式反应（ＰｏｌｙｍｃｒａｓｅＣｈａｉｎＲｃａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ），产物为一长为４５０ｂｐ的ＤＮＡ片段。经克隆及序列测定表明，其核苷酸序列及所推导的氨基酸序列，与其他植物的钙调蛋白（ＣａｌｍｅｄｕｌｉｎＣａＭ）基因的核苷酸序列及所编码的氢基酸序列，具很高的同源性。

关键词：甘蔗多聚酶链式反应(PCR) 钙调蛋白钙调蛋白基因

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红树植物拟海桑钙调蛋白基因的克隆及分析

台湾海峡 2002年第2期21卷 193-198,T002页

作者：熊玲媛林涛周涵韬徐金森葛运生陈睦传陈亮厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

钙调蛋白 (Calmodulin)是生物细胞内一种重要的调控蛋白 ,通过其与靶酶的相互作用控制细胞正常的生长和发育 .作者以高抗盐红树植物海桑属拟海桑 (Sonnera tiaparacaseolaris)总DNA为模板 ,参考GenBank上植物钙调蛋白基因序列合成 5′端... 详细信息

钙调蛋白 (Calmodulin)是生物细胞内一种重要的调控蛋白 ,通过其与靶酶的相互作用控制细胞正常的生长和发育 .作者以高抗盐红树植物海桑属拟海桑 (Sonnera tiaparacaseolaris)总DNA为模板 ,参考GenBank上植物钙调蛋白基因序列合成 5′端和 3′端引物 ,利用多聚酶链式反应 (PCR)扩增了拟海桑钙调蛋白基因 ,与克隆载体pBsk(+)重组 ,转化EscherichiacoliDH5α得到重组克隆子 ,DNA序列分析表明 ,所得片段的编码区在核苷酸序列上与迄今已知的几种植物钙调蛋白基因有很高的同源性 ,同源率在 85%以上 ;与水稻、苹果、衣藻等相似 ,其基因编码区被一个位于第 75位核苷酸之后的内含子所中断 .

关键词：红树植物克隆拟海桑钙调蛋白基因聚合酶链式反应 DNA PCR

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丹参、豇豆钙调蛋白基因的克隆及分析

丹参、豇豆钙调蛋白基因的克隆及分析

作者：张成陕西师范大学

学位级别：硕士

钙调蛋白(Calmodulin)是一种小分子酸性、耐热蛋白，等电点在3.9～4.3之间。钙调蛋白普遍存在于真核生物中，它的结构比较保守、变异小，在钙离子信号系统中起重要作用。钙调蛋白生理功能涉及面广泛：酶活性调节、激酶反应、细胞分裂与... 详细信息

钙调蛋白(Calmodulin)是一种小分子酸性、耐热蛋白，等电点在3.9～4.3之间。钙调蛋白普遍存在于真核生物中，它的结构比较保守、变异小，在钙离子信号系统中起重要作用。钙调蛋白生理功能涉及面广泛：酶活性调节、激酶反应、细胞分裂与分化、细胞骨架与细胞运动、细胞分泌和渗透调节、光合作用、光形态建成、离子吸收转运、植物生殖生育、激素反应、细胞膜通道及基因表达调控等方面。迄今为止已成功地克隆了大麦、大豆、甘蓝、拟南芥、玉米等植物的钙调蛋白基因。丹参为唇形科多年生草本植物，是我国的一种传统中药材。它在多方面有药用作用：预防心、脑血管疾病、抗肿瘤、抗炎症、抗病原微生物、抗氧化、抗衰老、促进修复再生等。我国数千年来应用传统中药治疗预防疾病，中草药是中华民族知识宝库中的重要组成部分。豇豆是一种常用蔬菜，其营养价值很高，含多种蛋白质、糖类、磷、铁、钙、和维生素及尼克酸，食物纤维等营养成分。丹参和豇豆钙调蛋白基因的克隆均未见报道。本研究从丹参和豇豆叶片中提取总RNA。使用四种方法提取丹参总RNA：异硫氰酸胍法、CTAB硼砂法、SDS酸酚法、总核酸提取法。使用异硫氰酸胍法提取豇豆总RNA。通过比较各种提取丹参总RNA的方法，发现使用异硫氰酸胍法不仅方法简单、步骤较少，而且得到的丹参总RNA质量较高、产量较大，可以成功的应用于下游分子生物学实验。讨论了在不同条件下提取植物总RNA的影响因素，得出以下结论：研磨过程应适当增长，并保证植物材料浸泡在液氮中;整个实验过程应尽量在低温下进行，如果实验要求高温，也应适当减少植物总RNA处于高温的时间;多次乙醇洗涤有可能造成RNA降解或流失;植物总RNA提取最好采用幼嫩叶片作为材料，避免使用含杂质较多的子叶、茎等部位。本研究克隆了丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)、豇豆(Vigna

关键词：丹参豇豆钙调蛋白基因

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绿豆、小麦钙调蛋白基因的克隆及分析

绿豆、小麦钙调蛋白基因的克隆及分析

作者：杨静陕西师范大学

学位级别：硕士

钙调蛋白(Calmodulin)是生物体中广泛存在的一类结构保守的调节蛋白。钙调蛋白通过和Ca结合，并与靶酶相互作用，调控细胞的发育和对外界刺激的反应。它参与多种生理过程，如基因表达、调节细胞分裂和代谢、生殖发育和细胞膜通道调控等... 详细信息

钙调蛋白(Calmodulin)是生物体中广泛存在的一类结构保守的调节蛋白。钙调蛋白通过和Ca结合，并与靶酶相互作用，调控细胞的发育和对外界刺激的反应。它参与多种生理过程，如基因表达、调节细胞分裂和代谢、生殖发育和细胞膜通道调控等功能。现已从多种植物，如拟南芥、大麦、水稻、辣椒、甜菜、丹参和豇豆中成功克隆了钙调蛋白基因。绿豆是一年生豆科草本植物，它既是一种粮食作物，也是药用植物。以种子和种皮(绿豆衣)入药，具清热祛暑、解毒之功效。小麦是世界上重要的粮食作物之一，在谷类作物中其产量占到17％，是世界35％人口的主要食品作物。因此，本研究选择这两种重要的粮食作物作为实验材料具有一定实际价值。绿豆(Phaseolus radiatus L.)钙调蛋白基因未见报道，从小麦中已克隆出钙调蛋白基因。本研究首次从绿豆(Phaseolus radiatus L.)中克隆了钙调蛋白基因，并且克隆了小麦(Triticum aestivum L.)钙调蛋白基因，对基因结构进行了分析。分别从小麦、绿豆叶片中提取总RNA，逆转录为cDNA。通过PCR，扩增得到钙调蛋白基因。绿豆和小麦钙调蛋白cDNA全长均为447bp，包含了完整的读码框，编码148个氨基酸。通过把小麦和绿豆钙调蛋白基因序列、推导的蛋白质序列进行相似性分析，发现小麦钙调蛋白基因和绿豆钙调蛋白基因核苷酸的相似性为84.6％，氨基酸的相似性为95.6％。本文得到的小麦钙调蛋白基因与已知的小麦钙调蛋白基因相比，相似性高达85％以上。与已知的其它多种植物钙调蛋白基因相比也有很高的相似性，核苷酸序列相似性在80％以上，编码的氨基酸序列相似性在90％以上。在Genebank进行了注册，绿豆钙调蛋白基因注册号为DQ778070，小麦钙调蛋白基因注册号为EF577270。将绿豆、小麦钙调蛋白基因分别正向、反向插入pCambia1304表达载体，经PCR和酶切验证，绿豆、小麦钙调蛋白基因确已插入植物表达载体;再将植物反义表达载体分别通过农杆菌介导法转入丹参植物体内，分析钙调蛋白对植物的生长发育的作用。这为进一步研究钙调蛋白的功能奠定了基础。用TMHMM、ProtScale、SOPMA、Pfam等在线生物信息学软件分析了绿豆钙调蛋白和小麦钙调蛋白的亲／疏水性、跨膜结构域、卷曲螺旋结构及功能域，并对它进行了亚细胞定位和二级结构预测。结果表明绿豆钙调蛋白和小麦钙调蛋白亲水性大于疏水性，是亲水性蛋白质;并且它们不具有信号肽，位于细胞质中，在细胞质中合成并以可溶性状态保留在细胞质中;二级结构主要为α-螺旋，含有四个功能域(efhand)，可以和钙离子结合激活下游反应，起到信号传导的功能。热激蛋白(heat shock protein，Hsp)是一类受到高温或其它一系列逆境诱导的蛋白质。细胞中主要的热激蛋白包括Hsp60，Hsp70，Hsp90和低分子量Hsp的家族。热激蛋白能消除热胁迫的影响，有效地保护细胞和生物体。在高温条件下，许多生物体(包括植物)中，都能够产生热激蛋白。本研究同时从油菜(Brassica campestris L.)中克隆了热激蛋白基因片断，对基因序列进行了分析。通过PCR扩增得到了834 bp的片断，编码278个氨基酸。通过在NCBI上进行比对，发现它和拟南芥热激蛋白基因有很高的同源性：核苷酸的同源性在88.1％，氨基酸的同源性在90％以上。利用DNAstar和DNAman等在线生物软件分析了油菜热激蛋白的核苷酸序列、推导的蛋白质序列、开放读码框的亲水性／疏水性，卷曲螺旋结构，并对蛋白质二级结构进行了预测。

关键词：绿豆小麦油菜钙调蛋白基因热激蛋白基因

基于CODEHOP的欧李钙调蛋白基因片段的克隆

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烟台大学学报（自然科学与工程版） 2017年第4期30卷 292-300页

作者：邬晓勇孙雁霞梁勇陈月星苟小军成都大学药学与生物工程学院四川成都610106

为克隆欧李钙调蛋白基因序列,本研究采用CODEHOP方法设计了一对简并引物,F1:5'-GGCTGACCAACTGACCga(c/t)ga(c/t)ca(a/g)at-3';F2:5'-CACGTCAGCCTCTCTGatcat(c/t)tc(a/g)tc-3';并采用传统简并引物设计方法设计了简并引物N1:5’-AAATGGC(A/C/G)GATCAGCT(A/C/T)AC-3’;N2:5:’-CACTT(A/G)GCCATCATGAC(C/T)TT-3’.从欧李的幼苗组织中成功克隆出了钙调蛋白基因片段,并第一次完成了对该序列的测序.通过利用NCBI的Blast进行分析等方法证实了该序列与其他植物的钙调蛋白序列具有高度的同源性,该序列与梅花、桃、甜樱桃的钙调蛋白序列同源性都在90%以上.研究证明CODEHOP软件相比传统的设计简并引物的方法具有可信性和高效性,并且钙调蛋白目的基因的成功克隆对钙调蛋白以及欧李高钙特性的研究提供了基础数据.

关键词：欧李钙调蛋白基因简并引物一致简并杂合寡核苷酸引物(CODEHOP) 克隆