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钙及钙调蛋白依赖性激酶在神经元缺氧损伤中的作用

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中国当代儿科杂志 2007年第4期9卷 324-326页

作者：周晖孙小妹罗小丽毛萌四川大学华西第二医院儿科四川成都610041

目的探讨钙及钙调蛋白依赖性激酶(calmodulin dependent kinase,CaMK)在神经元缺氧损伤中的作用及机制。方法体外培养大鼠胚脑皮质神经元,随机分为单纯缺氧组及钙阻滞剂干预组,其中钙阻滞剂干预组采用尼莫地平(nimodipine)、MK-801分别... 详细信息

目的探讨钙及钙调蛋白依赖性激酶(calmodulin dependent kinase,CaMK)在神经元缺氧损伤中的作用及机制。方法体外培养大鼠胚脑皮质神经元,随机分为单纯缺氧组及钙阻滞剂干预组,其中钙阻滞剂干预组采用尼莫地平(nimodipine)、MK-801分别阻断L-VSCC受体、NMDA受体的传导,采用MTT法测定各组神经元缺氧前后细胞活性,用Fluo-4AM荧光探针测定各组细胞内钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡ及CaMKⅣ的表达。结果尼莫地平及MK-801组细胞活性较单纯缺氧的对照组高;尼莫地平可迅速降低缺氧神经元的细胞内钙,MK-801可长时间降低缺氧神经元的细胞内钙。尼莫地平可抑制CaMKⅡ的表达,MK-801对CaMKⅡ的表达无明显影响,但可抑制CaMKⅣ的表达。结论尼莫地平和MK-801可分别通过抑制CaMKⅡ和CaMKⅣ表达实现对缺氧神经元的保护作用。

关键词：神经元缺氧损伤钙钙调蛋白依赖性激酶大鼠

唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ和Ⅳ基因表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2016年第1期42卷 19-23,I0002页

作者：刘娟娟李鹏董伟冯晓洁温黎明孙红戚孟春华北理工大学口腔医学院口腔颌面外科教研室河北唐山063000 华北理工大学基础医学院病理学教研室河北唐山063000

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞(OC)分化及信号分子钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱ、Ⅳ基因表达的影响,阐明其作用机制。方法:应用小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。细胞分为对照组和ZOL组,用核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL... 详细信息

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞(OC)分化及信号分子钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱ、Ⅳ基因表达的影响,阐明其作用机制。方法:应用小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。细胞分为对照组和ZOL组,用核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导5d,ZOL组同时加用ZOL处理2d,第5天收集细胞后检测OC生成及CaMKⅡ、CaMKⅣ基因表达情况。结果:ZOL组中多核OC数、骨吸收陷窝数和面积分别为33.0±1.0、46.0±3.5和(4 125.9±674.8)μm2,明显低于对照组的66.6±3.2、86.0±9.2和(9 418.3±1 260.8)μm2(P蛋白表达水平分别下降了39.3%和58.9%,CAMKⅣmRNA和蛋白表达水平分别下降了51.7%和46.8%(P蛋白荧光强度明显下降(P调CaMKⅡ和CaMKⅣ基因表达。信号分子CaMKⅡ和CaMKⅣ可能参与了唑来膦酸对OC形成和功能的抑制作用,并在该过程中发挥重要的作用。

关键词：唑来膦酸破骨细胞钙调蛋白依赖性激酶

野艾蒿总黄酮对HepG2细胞脂质代谢中AMPK蛋白相关信号转导通路的作用研究

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药物分析杂志 2019年第8期39卷 1396-1403页

作者：李洋周成江包头医学院包头014060 内蒙古林业总医院牙克石022150

目的:通过研究野艾蒿总黄酮对腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)相关信号转导通路的影响,从而探明其调节HepG2细胞脂质代谢过程中存在的作用机制。方法:以HepG2细胞作为研究对象建立脂质堆积模型,将实验细胞分为对照组和药物组,Western blot检... 详细信息

目的:通过研究野艾蒿总黄酮对腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)相关信号转导通路的影响,从而探明其调节HepG2细胞脂质代谢过程中存在的作用机制。方法:以HepG2细胞作为研究对象建立脂质堆积模型,将实验细胞分为对照组和药物组,Western blot检测经药物作用后该模型中乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)磷酸化表达情况以及AMPK上游钙调蛋白依赖性激酶(Ca2+ dependent protein kinase kinase,CaMKK)活性改变对药物激活AMPK的影响;超高效液相色谱法检测野艾蒿总黄酮激活AMPK对HepG2细胞内AMP/ATP水平的影响。结果:(1)油红染色结果显示,野艾蒿总黄酮能够通过AMPK来促进HepG2细胞脂质代谢。(2)Western blot结果显示,药物组与对照组相比,ACC的磷酸化表达均具有显著性差异(P性抑制剂作用下仍能够上调HepG2细胞中AMPK的磷酸化表达。(4)超高效液相色谱结果显示药物组与对照组相比,一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量及AMP/ATP含量比值均未发生显著变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:野艾蒿总黄酮能够依靠药物-AMPK-ACC这一调脂通路来影响HepG2细胞脂质代谢,但其激活AMPK途径与CaMKK活性和AMP/ATP含量比值变化无关。

关键词：野艾蒿总黄酮腺苷酸蛋白活化激酶活性分析乙酰辅酶A羧化酶钙调蛋白依赖性激酶 AMP/ATP

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酿酒酵母CMK2在氧化胁迫应答中的作用

四川大学学报（自然科学版） 2010年第3期47卷 674-678页

作者：王一慧朱珈仪刘科四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

CMK2是酵母中和哺乳动物钙调蛋白激酶CaM kinasesⅡ同源的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,具有重要调控作用.本文利用PCR方法扩增含内源启动子的CMK2基因序列,克隆到pRS316上并在C末端连接6个组氨酸标签,构建真核表达载体,转化不同酵母进行... 详细信息

CMK2是酵母中和哺乳动物钙调蛋白激酶CaM kinasesⅡ同源的一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,具有重要调控作用.本文利用PCR方法扩增含内源启动子的CMK2基因序列,克隆到pRS316上并在C末端连接6个组氨酸标签,构建真核表达载体,转化不同酵母进行表达,并通过免疫印迹鉴定.发现氧化胁迫后细胞中CMK2发生磷酸化.生长实验结果显示cmk2缺失的细胞对氧化胁迫非常敏感,而△cmk2中转入pRS316-cmk2-HIS6可以部分恢复△cmk2细胞对双氧水的敏感性.表明CMK2参与细胞氧化胁迫应答途径,并发挥正调控作用.

关键词：酿酒酵母钙调蛋白依赖性激酶氧化胁迫应答

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朊病毒病中CaM信号通路变化特点的研究

朊病毒病中CaM信号通路变化特点的研究

作者：张仁庆黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

朊病毒病(prion disease),又称可传播性海绵状脑病(Transmissible spongiform encephalopathies,TSE),是一类侵袭人和动物神经系统的退行性疾病,具有极长的潜伏期和100%的致死率。近年来,在全球范围内无论在人群中还是在动物群中,朊病... 详细信息

朊病毒病(prion disease),又称可传播性海绵状脑病(Transmissible spongiform encephalopathies,TSE),是一类侵袭人和动物神经系统的退行性疾病,具有极长的潜伏期和100%的致死率。近年来,在全球范围内无论在人群中还是在动物群中,朊病毒病的发病率均呈上升趋势,同时因其具有极长潜伏期、高传染性和100%致死性而对公共卫生安全造成了极大的潜在危害。朊病毒病的感染因子是朊病毒,该病毒是一种不含核酸、可自我复制和感染性的蛋白质(Pr PSc)。可使对蛋白酶敏感的正常朊蛋白(Pr PC)转变为结构异常的、对蛋白酶抵抗的痒病样朊蛋白(Pr PSc)。大量的Pr PSc在中枢神经系统沉积导致神经细胞死亡丢失、反应性胶质细胞增生和海绵空泡样变性,这也是朊病毒病的典型病理改变。钙调蛋白(CaM)是一种普遍存在的钙结合蛋白,可最多结合四个钙离子,并作为钙信号的主要转导物。Ca的结合诱导CaM中的构象变化,即暴露其疏水残基,其促进Ca/CaM复合物与许多靶向蛋白的相互作用,并随后调节它们的功能。CaM及其下游底物的异常改变已经在一些神经退行性疾病中报道,但在朊病毒病中却鲜有描述。在本研究中,利用Western blot、组织免疫化学、组织免疫荧光等方法检测了CaM及其相关蛋白在羊瘙痒因子139A感染小鼠、263K感染仓鼠脑组织和朊病毒感染的细胞系SMB-S15中的潜在变化。通过Western blot方法发现,在139A感染小鼠脑组织中CaM水平异常升高,下游激酶CaMKII、磷酸化的CaMKII(p-CaMKII)及p-CaMKIV表达水平增加。CaMKs的下游调控蛋白c AMP调控元件结合蛋白(c AMP response element binding protein,CREB)及其磷酸化形式(p-CREB)均呈上调趋势,而其下游调控蛋白脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达则明显下调,通过免疫组织化学实验发现,CaM主要分布于139A感染小鼠的皮层、丘脑和小脑区域。在对羊瘙痒因子263K感染的仓鼠脑组织的研究中发现,CaM表达水平在朊病毒感染早期开始增加并且一直维持在较高水平直到终末期。免疫组织化学测定显示增加的CaM主要累积在263K感染仓鼠的皮质、丘脑和小脑区域。免疫荧光实验结果显示了CaM与Neu N阳性细胞存在共定位。然而,相关激酶,如CaMKII、CaMKIV及其磷酸化形式,以及下游蛋白如CREB和BDNF在263K感染仓鼠脑组织中减少。进一步研究显示在263K感染仓鼠的脑组织中CaM的S-亚硝基化(SNO)形式明显增加。在朊病毒感染细胞系中,SMB-S15细胞的CaM水平较之对照细胞SMB-PS明显增加,同时下游蛋白如CaMKII、p-CaMKII、CREB以及BDNF也增加,尤其体现在细胞核中。而在朊病毒感染的SMB-S15细胞系中,并未检测到SNO-CaM。综上所述,我们的体内及体外实验结果显示CaM在朊病毒感染中异常增加。在培养的细胞以及羊瘙痒因子139A感染的仓鼠脑组织中,增加的CaM可以触发其下游激酶的激活。但在羊瘙痒因子263K感染的仓鼠的脑组织中,增加的CaM似乎不再激活其下游激酶,可能是由于在朊病毒感染期间其增加的CaM主要来自SNO-CaM,从而影响了其自身的活性。

关键词：朊病毒病钙调蛋白钙调蛋白依赖性激酶 CREB BDNF