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维生素d依赖型钙结合蛋白d28k及MC6蛋白异常与C型尼曼-皮克病小鼠神经元骨架病理改变

中华神经科杂志 2005年第9期38卷 575-578页

作者：张宇红卜碧涛曹小丽王雪贞李江林方思雨占克斌华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科

目的探讨C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠模型神经元病变时,维生素d依赖型钙结合蛋白d28k(calbindin d28k)和MC6蛋白异常表达与神经元细胞骨架病变之间的相关性.方法利用免疫组化、免疫荧光标记以及免疫印迹等方法检测NPC1小鼠和野生型对照组小... 详细信息

目的探讨C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠模型神经元病变时,维生素d依赖型钙结合蛋白d28k(calbindin d28k)和MC6蛋白异常表达与神经元细胞骨架病变之间的相关性.方法利用免疫组化、免疫荧光标记以及免疫印迹等方法检测NPC1小鼠和野生型对照组小鼠(各8只)脑组织不同部位神经元变性过程中calbindin d28k及MC6蛋白表达,细胞骨架蛋白抗有丝分裂活化蛋白激酶-2 (MAP2)和神经丝(neurofilament,NF)的病理变化.结果 NPC1小鼠4周龄时,calbindin d28k表达为0.68±0.32,稍微高于野生型小鼠(0.53±0.20,P＝0.665),以后5～8周龄的连续变化0.71±0.33, 1.22±0.73均低于对照组的1.20±0.47和 2.28±1.42(P＝0.34,0.045).NPC1鼠小脑浦肯野神经元发生变性早期,calbindin d28k 蛋白表达增高,晚期表达降低.小脑白质、脑干、基底节和部分大脑中出现异常calbindin d28k蛋白颗粒和MC6蛋白.异常的MC6蛋白与calbindin d28k高度共表达.相同部位的神经元NF也明显病理改变.浦肯野神经元则没有发现MC6以及MAP2、NF病理改变.结论 calbindin d28k在NPC1小鼠神经元变性早期可能有短暂的神经元保护作用.随着病程发展calbindin d28k表达异常,并与MC6蛋白密切相关.两者均与神经元细胞骨架结构破坏明显相关.浦肯野细胞变性与MC6和MAP2、NF关系不大.由此推测calbindin d28k参与NPC1小鼠模型神经元细胞骨架病变机制;同时,浦肯野神经元变性、死亡的途径与其他的神经元可能不同.

关键词：尼曼-皮克病小鼠钙结合蛋白,维生素d依赖性细胞骨架钙结合蛋白d28k C型尼曼-皮克病蛋白异常表达细胞骨架蛋白神经元病变小鼠模型

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不同发育阶段大鼠睾丸中Calretinin的表达

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国际生殖健康／计划生育杂志 2014年第6期33卷 410-414,F0003页

作者：刘珊徐文丹代晓南王箐罗建高超高莉刘嘉茵崔毓桂南京医科大学第一附属医院生殖医学科生殖医学国家重点实验室210029 白求恩国际和平医院

目的：Calretinin（CALB2）是一种钙结合蛋白。前期研究表明,CALB2可表达于人睾丸组织,推测其参与睾丸功能的调节。本研究观察不同发育阶段大鼠睾丸中CALB2的表达水平,探讨其在调节雄激素生成中的作用。方法：3~4周龄Sd雄性大鼠作为性... 详细信息

目的：Calretinin（CALB2）是一种钙结合蛋白。前期研究表明,CALB2可表达于人睾丸组织,推测其参与睾丸功能的调节。本研究观察不同发育阶段大鼠睾丸中CALB2的表达水平,探讨其在调节雄激素生成中的作用。方法：3~4周龄Sd雄性大鼠作为性发育前组（相当于人类的青春期前,n=35）,16周龄Sd鼠作为性成熟组（相当于人类的成年期,n=16）,12个月以上的作为老年组（相当于人类男子的中老年,n=10）。放射免疫法测定各组血清睾酮浓度;免疫组织化学法观察CALB2的定位表达;定量聚合酶链反应（q PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）分别检测睾丸中CALB2 m RNA和蛋白水平的表达。结果：CALB2表达定位于睾丸的间质细胞,细胞内定位于细胞质中。性发育前组大鼠血清睾酮水平最低,性成熟组最高,差异有统计学意义（P〈0.05）。性成熟组大鼠睾丸CALB2的表达水平较性发育前组和老年组均升高（P〈0.05）。结论：睾丸组织中,CALB2表达于间质细胞的细胞质;在不同发育阶段,睾丸间质细胞CALB2表达水平与血清睾酮水平呈正相关,表明CALB2参与调节雄激素生成。

关键词：雄激素类睾丸莱迪希细胞钙结合蛋白,维生素d依赖性

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LV-calb2和LV-siRNA-calb2慢病毒载体的构建及其在睾丸间质细胞的表达

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国际生殖健康／计划生育杂志 2016年第2期35卷 96-100,I0001页

作者：徐文丹代晓南朱倩张蓓高超高莉刘嘉茵崔毓桂南京医科大学第一附属医院生殖医学科 210029

目的:构建钙视网膜蛋白(CALB2)基因超表达及小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体,观察CALB2对睾丸间质细胞雄激素合成的调节作用。方法:合成超表达及干涉的质粒,转入制备好的细菌感受态细胞,聚合酶链反应(PCR)鉴定阳性重组子后测序验证,确认构... 详细信息

目的:构建钙视网膜蛋白(CALB2)基因超表达及小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体,观察CALB2对睾丸间质细胞雄激素合成的调节作用。方法:合成超表达及干涉的质粒,转入制备好的细菌感受态细胞,聚合酶链反应(PCR)鉴定阳性重组子后测序验证,确认构建成功的超表达及干涉慢病毒载体。用上述慢病毒载体分别感染MLTC-1及R2C间质细胞,观察感染效率,而后用放射免疫法检测睾酮和孕酮的合成。结果:PCR和基因测序证实LV-calb2和LV-si RNA-calb2慢病毒载体构建成功,并可高效感染MLTC-1及R2C细胞。超表达CALB2后,MLTC-1细胞睾酮生成显著增加(P<0.001);干涉CALB2表达后,R2C间质细胞孕酮生成显著减少(P<0.05)。结论:成功构建了calb2基因超表达及干涉慢病毒载体,并可体外转染睾丸间质细胞系。初步结果表明,CALB2可促进间质细胞类固醇激素生成。

关键词：钙结合蛋白,维生素d依赖性慢病毒属睾丸莱迪希细胞雄激素类

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