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人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道的表达

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中国生育健康杂志 2013年第2期24卷 114-116,124页

作者：林海蕤毛熙光付晓东刘玲泸州医学院附属医院妇产科四川646000

目的探讨人宫颈鳞状上皮细胞癌（简称鳞癌）组织中电导钾离子通道（IKCal）mRNA及其蛋白产物与正常宫颈上皮组织中钙激活性的差异。方法采用免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测30例不同分化程度的宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IK... 详细信息

目的探讨人宫颈鳞状上皮细胞癌（简称鳞癌）组织中电导钾离子通道（IKCal）mRNA及其蛋白产物与正常宫颈上皮组织中钙激活性的差异。方法采用免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测30例不同分化程度的宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCalmRNA及其蛋白产物的表达情况。结果（1）IKCalmRNA阳性表达率15例子宫颈鳞癌组织中分别为73．3％，表达水平为（1．2±n5），18例正常宫颈上皮组织中分别为11．1％，表达水平为（0．9±0．2），差异均有统计学意义；（2）30例宫颈鳞癌组织细胞核及细胞膜上IKCal蛋白产物均呈阳性表达；正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达，差异有统计学意义；（3）宫颈鳞癌组织中IKCal蛋白产物的表达与癌细胞分化程度呈正相关。结论IKCal的高表扶与宫颈鳞痛的发牛和发展密切相关．

关键词：钙激活性中电导钾离子通道子宫颈鳞状上皮细胞癌 mRNA 逆转录-聚合酶链反应免疫组织化学

KCa3．1表达改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

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肿瘤 2009年第4期29卷 323-328页

作者：张英丽赵明智鹿欣黄妍易晓芳郁茵华丰有吉复旦大学附属妇产科医院妇科上海200011 复旦大学上海医学院妇产科学系上海200011

目的:探讨钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,KCa3.1)表达水平和活性改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:将携有KCa3.1RNA干扰(RNA interference,RNAi)片段的质粒转染子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞,应用实时荧光定量PCR(real time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)及Western印迹法检测KCa3.1的表达变化;应用MTT法、BrdU掺入法、FCM及Western印迹法检测KCa3.1特异性阻断剂TRAM-34和KCa3.1RNAi表达质粒干扰后,子宫内膜癌细胞株增殖、细胞周期、凋亡及cyclin D1、cyclin E及survivin蛋白表达的改变。结果:KCa3.1RNAi表达质粒可以明显抑制KCa3.1mRNA及蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P0.05);cyclin D1、cyclin E及survivin的蛋白表达水平降低,与对照组相比差异有统计学意义(P活性可以抑制子宫内膜癌细胞增殖,阻碍细胞周期进展,但对细胞凋亡无明显影响。

关键词：子宫内膜肿瘤 RNA干扰钙激活性中电导钾离子通道细胞增殖细胞周期细胞凋亡

siRNA抑制IKCa1基因表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

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中国妇幼保健 2012年第8期27卷 1221-1224页

作者：聂丹詹平毛熙光汪春燕刘玲泸州医学院附属医院妇产科四川泸州646000

目的:研究siRNA(small interfering RNA)抑制钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,IKCa1)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:构建含有IKCa1基因的siRNA表达载体,脂质体法转染HeLa细胞,通过RT-PCR和Western Blot检测HeLa细胞IKCa1 mRNA和蛋白表达变化;WST-1检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析HeLa细胞周期变化。结果:成功构建针对IKCa1基因的真核表达载体,所获表达载体转染HeLa细胞可使IKCa1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P活性。

关键词：钙激活性中电导钾离子通道小干扰RNA HeLa细胞

阻断钙激活钾通道对宫颈癌细胞增殖及钾通道电流的影响

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山东医药 2015年第43期55卷 1-4页

作者：刘玲聂丹范凌晔詹平钱燕萍毛熙光泸州医学院附属医院四川泸州646000

目的观察钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)被阻断后对宫颈癌He La细胞增殖及IKCa1膜电位的影响。方法分别用IKCa1阻断剂克霉唑和RNA干扰法阻断He La细胞的IKCa1后,用RT-PCR技术检测He La细胞的IKCal mRNA,MTT法检测细胞OD值,膜片钳技术... 详细信息

目的观察钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)被阻断后对宫颈癌He La细胞增殖及IKCa1膜电位的影响。方法分别用IKCa1阻断剂克霉唑和RNA干扰法阻断He La细胞的IKCa1后,用RT-PCR技术检测He La细胞的IKCal mRNA,MTT法检测细胞OD值,膜片钳技术检测细胞IKCa1电流。结果克霉唑阻断IKCa1后,He La细胞的IKCa1 mRNA表达降低、IKCa1电流减弱、细胞OD值下降,与对照组相比,P均<0.05。RNA干扰法阻断IKCa1后,Hela细胞的IKCa1 mRNA表达下降、IKCa1电流减弱、细胞OD值降低,与空白对照组和阴性转染组相比,P均<0.05。结论阻断IKCa1能有效抑制He La细胞增殖,下调细胞IKCa1 mRNA的表达,降低其IKCa1电流;IKCa1通过调控He La细胞膜电位而影响其信号传递,调控He La细胞的增殖。

关键词：离子通道钾离子通道钙激活性中电导钾离子通道钾离子通道阻断剂克霉唑小分子干扰RNA技术宫颈癌细胞 He La细胞株

RNA干扰技术抑制宫颈癌HeLa细胞IKCa1表达的研究

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RNA干扰技术抑制宫颈癌HeLa细胞IKCa1表达的研究

作者：聂丹泸州医学院

学位级别：硕士

目的：探讨钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)的RNA干扰表达载体对宫颈癌HeLa细胞株IKCal基因和蛋白表达的抑制效果以及对HeLa细胞生物学特性的影响。方法：根据短发夹RNA (shRNA)设计原则,设计两条针对IKCal基因的干扰序列和一条非特异... 详细信息

目的：探讨钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)的RNA干扰表达载体对宫颈癌HeLa细胞株IKCal基因和蛋白表达的抑制效果以及对HeLa细胞生物学特性的影响。方法：根据短发夹RNA (shRNA)设计原则,设计两条针对IKCal基因的干扰序列和一条非特异性阴性对照序列,并将其定向克隆入真核表达载体pGenesil-1.1中。得到三种质粒pGenesil-IK1(携带干扰序列1)、pGenesil-IK2(携带干扰序列2)、pGenesil-HK(携带非特异性阴性对照序列),转化感受态细菌DH5a,培养后提取质粒;采用酶切、测序鉴定所提取质粒。利用脂质体法将构建的质粒转染入宫颈癌HeLa细胞中进行后续实验。实验共分4组：HeLa(空白对照)组、pGenesil-IK1组、pGenesil-IK2组、pGenesil-HK(阴性对照)组。转染后48h提取各组细胞总RNA,以荧光定量PCR方法检测转染前后HeLa细胞株IKCal mRNA的变化。转染后48h提取各组细胞的总蛋白,以Western Blotting法检测转染前后IKCal蛋白表达情况,计算蛋白表达抑制率。利用WST-1检测HeLa细胞增殖情况并绘制生长曲线。用流式细胞术分析细胞周期变化并计算细胞增殖指数PI。结果：经酶切和测序鉴定显示IKCal shRNA真核表达载体构建成功。荧光定量PCR显示：pGenesil-IK1组、pGenesil-IK2组IKCal mRNA的表达较pGenesil-HK组、HeLa组均降低,差异有统计学意义(P0.05)。pGenesil-IK1组的蛋白表达抑制率为36.25%。WST-1检测结果显示,质粒pGenesil-IK1能有效抑制HeLa细胞增殖,与pGenesil-HK组、HeLa组比较差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测细胞周期发现,质粒pGenesil-IK1转染HeLa细胞后,Go／G1期细胞比率55.0±1.8%,S期细胞比率29.2±0.9%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。经计算细胞增殖指数PI后发现：转染了pGensil-IK1质粒的HeLa细胞增殖指数为44.97±1.75%,而空白对照组(HeLa)和质粒对照组(pGenesil-HK)增殖指数分别为502±0.1%,49.3±0.44%,均高于pGensil-IK1组,pGensil-IK1组与pGenesil-HK组和HeLa组差异具有显著性(P<0.05)。结论：所构建的IKCal shRNA真核表达载体pGenesil-IK1能有效地抑制宫颈癌HeLa细胞株IKCal基因和蛋白的表达,并且可以抑制细胞增殖,使细胞周期停滞于Go／G1期。

关键词：子宫颈癌 HeLa细胞株钙激活性中电导钾离子通道 RNA干扰荧光定量PCR Western Blotting WST-1 流式细胞术

人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中IKCa1 mRNA的表达及意义

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山东医药 2012年第46期52卷 47-49页

作者：林海蕤毛熙光王定玉泸州医学院附属医院四川泸州646000

目的观察人宫颈鳞状上皮细胞癌组织(简称宫颈癌)及正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)mRNA表达变化,探讨其机制。方法采用RT-PCR方法分别检测15例宫颈癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCalm RNA的表达变化。结果宫颈癌... 详细信息

目的观察人宫颈鳞状上皮细胞癌组织(简称宫颈癌)及正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)mRNA表达变化,探讨其机制。方法采用RT-PCR方法分别检测15例宫颈癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCalm RNA的表达变化。结果宫颈癌组织中IKCal mRNA阳性表达率为73.33%,表达水平为1.14±0.45;正常宫颈上皮组织中分别为11.11%和0.86±0.23(P均中存在更高表达的IKCalmRNA。结论宫颈癌组织中细胞核内IKCal mRNA表达明显高于正常宫颈组织,过度表达的IKCal可能是宫颈癌发生的机制之一。

关键词：宫颈肿瘤宫颈鳞状上皮细胞癌钙激活性中电导钾离子通道

IKCal蛋白产物在人宫颈鳞状上皮细胞癌组织及正常宫颈组织中表达差异分析

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四川医学 2011年第1期32卷 7-9页

作者：林海蕤毛熙光黄桂英鲁照明泸州医学院附属医院妇产科四川泸州646000

目的研究人宫颈鳞状上皮细胞癌组织及正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)蛋白产物的分布差异,探讨IKCal与人类宫颈鳞状上皮细胞癌的关联。方法采用免疫组织化学方法检测18例正常宫颈上皮组织和30例不同分化程度的宫颈... 详细信息

目的研究人宫颈鳞状上皮细胞癌组织及正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)蛋白产物的分布差异,探讨IKCal与人类宫颈鳞状上皮细胞癌的关联。方法采用免疫组织化学方法检测18例正常宫颈上皮组织和30例不同分化程度的宫颈鳞状上皮细胞癌组织中IKCal蛋白产物表达部位及表达水平。结果①IKCal在30例宫颈鳞状上皮细胞癌组织细胞核及细胞膜上均呈阳性表达;18例正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达,IKCal蛋白产物在宫颈鳞癌组织中的表达与正常宫颈组织中存在明显差异(Z=-6.109,P=0.00,P中,IKCal蛋白产物表达程度与癌细胞分化程度呈负相关(2χ=16.468,P=0.00,P中IKCal蛋白产物的表达明显高于正常宫颈组织;且IKCal蛋白产物表达水平与癌细胞的分化程度呈负相关;过高表达的IKCal与宫颈鳞状上皮细胞癌的发生和发展可能存在重要联系。

关键词：钙激活性中电导钾离子通道子宫颈鳞状上皮细胞癌免疫组织化学

IKCa1基因shRNA真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

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泸州医学院学报 2012年第4期35卷 359-363页

作者：聂丹刘玲詹平汪春燕毛熙光任黔川泸州医学院附属医院妇产科四川泸州646000

目的:构建针对钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,IKCa1)的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA)真核表达载体,观察其在宫颈癌细胞HeLa中的表达。方法:设计、合成IKCa1基因特异性shRNA序列,插入空载体pGenesil-1.1中,构建重组体,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,半定量RT-PCR和Western blotting技术检测转染前后HeLa细胞中IKCa1的表达。结果:成功构建IKCa1 shRNA真核表达载体,转染后HeLa细胞中IKCa1的表达受到显著抑制。结论:成功构建IKCa1特异性shRNA表达载体,为进一步研究IKCa1参与宫颈癌发生发展的机制奠定实验基础。

关键词：钙激活性中电导钾离子通道小发夹RNA HeLa细胞